摘要：目的：觀察肝龍膠囊對豚鼠離體回腸收縮活動和對小鼠小腸推進運動的影響。方法：BL-420E+生物機能系統(tǒng)記錄肝龍膠囊對豚鼠離體回腸收縮活動的影響；碳末推進法觀察肝龍膠囊對小鼠小腸推進運動的影響。結果：肝龍膠囊能明顯促進豚鼠離體腸肌和小鼠在體腸肌收縮運動，與N·S組比較具有顯著性差異（P<0.05）。結論：肝龍膠囊體內(nèi)外均能促進腸肌收縮，可能與其激動了H1受體、M膽堿受體和促進Ca+通道開放有關。

關鍵詞：肝龍膠囊；小腸推進率；離體回腸

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349（2013）01-0064-03

美洲大蠊（Periplaneta americana）為大蠊屬蜚蠊目蜚蠊科昆蟲，本院對其已進行了多年研究。現(xiàn)代藥理報道美洲大蠊具有抗肝炎、抗腫瘤、抗菌、抗艾滋病病毒、增強機體免疫力、消炎鎮(zhèn)痛、促進血管增生、組織修復等作用[1～4]。在對腸肌作用方面，有報道表明美洲大蠊提取物中的肽具有很強的控制和調(diào)節(jié)肌肉收縮的活性[5]，特別是美洲大蠊提取物CⅡ3能夠對Ach、His及BaCl2引起的豚鼠離體腸肌痙攣有顯著的解痙作用[6]。

肝龍膠囊是從美洲大蠊中提取的一組有效物質(zhì)，臨床上主要用于治療慢性乙型肝炎，對乙型肝炎有較好的治療效果，而且毒副作用較小。但關于肝龍膠囊對于離體、在體腸肌收縮的影響，目前尚未見研究報道，所以本實驗觀察了其對腸肌活動的影響。

1材料與方法

1.1實驗試劑及藥品乙酰膽堿（Acetylcholine，Ach），sigma公司（批號：00011698）；硫酸阿托品（Atropine），天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司（批號：100925）；組胺（Histamine，His），上海麗珠東風生物技術有限公司（批號：1703）；鹽酸苯海拉明（Diphenhydramine），廣州明興制藥有限公司（批號：040702）；氯化鋇（Barium Chloride，BaCl2）：上?；？茖W校實驗工廠（批號：830703）；鹽酸維拉帕米（Verapamil）：上海禾豐制藥有限公司（批號：100901）；生理鹽水（Saline）：昆明南疆制藥有限公司（批號：D10120702）；臺氏液（1000 mL中含：NaCl：8 g，KCl：0.2 g，MgSO4 ·7H2O：0.26 g，NaH2PO4：0.065 g，NaHCO3：1 g，CaCl2：0.20 g，葡萄糖：1 g）；肝龍膠囊，昆明賽諾制藥有限公司（批號：10110901）；碳素墨水，貴州博士化工有限公司（批號D90411）；嗎丁啉（Domperidone）：西安揚森制藥有限公司（批號：110914490）。

1.2動物普通級健康豚鼠8只，雌雄各半，體重400～500 g，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供。合格證號：SCXK（滇）2011-0003。昆明種健康小鼠，體重18～20 g，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供。合格證號：SCXK（滇）2011-0004。

1.3器材HW-400S恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）、BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）、張力換能器、手術器械、1 mL可調(diào)式微量移液槍。

1.4實驗方法

1.4.1肝龍膠囊對豚鼠離體腸肌收縮活動的影響將健康豚鼠擊頭處死，迅速剖腹，取距回盲部10 cm處回腸的一段，置于盛有冷臺氏液的器皿中，輕輕剝離回腸周圍的脂肪組織，沖洗腸管，剪取1.5～2.0 cm長的腸段數(shù)節(jié)作為標本備用。標本一端穿線并固定于通氣板背面的鐵鉤上，另一端通過蛙心夾連接到張力換能器并與BL-420E+ 生物技能實驗系統(tǒng)連接，然后將標本放入恒溫平滑肌槽的小槽內(nèi)，將槽內(nèi)通20 mL營養(yǎng)液，立即通氧（1～2個氣泡/s）。調(diào)整腸肌張力為1.0 g，讓標本在臺氏液中穩(wěn)定30 min。待自主舒張活動穩(wěn)定后，描記一段正常曲線，然后加入終濃度為1×10-5 g / mL 的Ach，并描記收縮曲線，作用明 顯后，換液3次，待曲線恢復到用藥前水平，再描記一段一段曲線；然后加入生理鹽水，如上操作加入依次加入2.5×10-5 g/mL、5×10-5 g/mL、7.5×10-5g/mL的肝龍膠囊觀察阿托品對肝龍膠囊誘導的腸肌收縮活動的抑制作用。如上操作，分別觀察1×10-5 g/mL苯海拉明和1×10-5 g/mL維拉帕米對肝龍膠囊誘導的腸肌收縮活動的抑制作用。

收縮率的計算：收縮率（%）=[（實驗組收縮張力-正常組收縮張力）/正常組收縮張力]×100%

1.4.2肝龍膠囊對正常小鼠小腸運動影響取健康昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分成5組：生理鹽水組、0.2 % 嗎丁啉組、肝龍膠囊高劑量組（75 mg/kg）、中劑量組（50 mg/kg）、低劑量組（25 mg/kg）。各組均按0.2 mL/10 g劑量連續(xù)給藥4 d。第3天給藥后禁食不禁水18 h并于末次給藥1 h后，分別給各組小鼠灌胃碳素墨水（0.2 mL/10 g），20 min后脫頸椎處死各小鼠，立即打開腹腔分離腸系膜，剪取上端至幽門，下端至回盲部的腸管，置于桌面上拉直，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至碳末前沿的距離作為“碳末推進距離”，用下列公式計算碳末推進百分率：

碳末推進百分率（%）=碳末推進距離（cm）/小腸總長度（cm）×100 %

1.4.3統(tǒng)計學處理各組實驗數(shù)據(jù)均以（ ±s ）表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0進行組間t檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1肝龍膠囊對豚鼠離體腸肌收縮的作用

2.2.1維拉帕米對肝龍膠囊所致腸肌收縮活動的抑制作用與N·S組比較，肝龍膠囊能夠顯著增強離體腸肌的收縮作用（P<0.05）。加入維拉帕米阻斷劑后，肝龍膠囊所致腸肌收縮率顯著降低，分別為4.94 %、6.79 %、2.18 %。維拉帕米對肝龍膠囊的收縮作用的抑制率，與BaCl2組比較沒有顯著性差異（P>0.05），表明維拉帕米對肝龍膠囊所致腸肌收縮活動有顯著的抑制作用，即肝龍膠囊促進離體腸肌的收縮作用與開放Ca+ 通道有關。結果見表1。

2.2.2阿托品對肝龍膠囊所致腸肌收縮活動的抑制作用與N·S組比較，肝龍膠囊能夠顯著增強離體腸肌的收縮作用（P<0.05）。加入阿托品作為阻斷劑后，肝龍膠囊所致腸肌收縮率顯著降低，分別為141.5 %、258.5 %、466.9 %。阿托品對肝龍膠囊的收縮作用的抑制率，與N·S組比較P<0.05，表明阿托品對肝龍膠囊所致腸肌收縮活動有顯著的抑制作用，即肝龍膠囊促進離體腸肌的收縮作用與激動M膽堿受體有關。結果見表2。

2.2.3苯海拉明對肝龍膠囊所致腸肌收縮活動的抑制率

與N·S組比較，肝龍膠囊能夠顯著增強離體腸肌的收縮作用（P<0.05），加入苯海拉明作為阻斷劑后，肝龍膠囊所致腸肌收縮率顯著降低，分別為7.00 %、10.76 %、3.15 %。苯海拉明對肝龍膠囊的收縮作用的抑制率，與N·S組比較P<0.05，與His 組比較無顯著性差異（P>0.05），表明苯海拉明對肝龍膠囊所致腸肌收縮活動有顯著的抑制作用，即肝龍膠囊促進離體腸肌的收縮作用與激動H1受體有關。結果見表3。

3結果討論

M膽堿受體又稱M受體，對毒蕈堿敏感，能與乙酰膽堿結合。主要分布于節(jié)后膽堿能神經(jīng)纖維所支配的效應器細胞膜上，對胃壁細胞、自主神經(jīng)節(jié)、平滑肌和外分泌腺等具有活性。阿托品能松弛許多內(nèi)臟平滑肌，可抑制胃腸道平滑肌的強烈痙攣，降低蠕動的幅度和頻率[12]。

鈣離子作為生物細胞的重要信使，參與細胞多種重要功能的調(diào)節(jié)，包括心臟起搏、心肌細胞核骨骼平滑肌以及血管平滑肌的興奮-收縮偶聯(lián)、神經(jīng)遞質(zhì)釋放、腺體分泌及基因表達等。鈣離子通道阻滯藥對支氣管平滑肌松弛作用較為明顯，

較大劑量也能松弛胃腸道平滑肌[12]。

H1受體激活產(chǎn)生支氣管與胃腸道平滑肌興奮、毛細血管通透性增加和部分血管擴張效應。苯海拉明為H1受體阻斷藥，可完全對抗組胺引起的支氣管、胃腸道平滑肌的收縮作用[12]。

Ach、His、BaCl2 通過對相應受體的激活來增加胃腸道平滑肌的蠕動。臨床上分別用阿托品、苯海拉明及維拉帕米對其促進作用進行阻斷。在本實驗中，肝龍膠囊能夠促進小鼠小腸蠕動，增強小腸的推進作用，且存在一定的劑量依賴性。而且肝龍膠囊還具有促進豚鼠離體回腸收縮的作用，其收縮程度隨著其濃度的升高而增強，與N·S組比較均具有明顯差異（P<0.05），而且可見苯海拉明、維拉帕米和阿托品對其收縮有明顯抑制作用。因此說明肝龍膠囊促進豚鼠離體腸肌的收縮作用可能與其激動H1受體、M膽堿受體及開放Ca+ 通道有關。其確切的作用機制還需進一步研究。

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（收稿日期：2012-10-22）