摘 要：三聚氰胺是一種用途十分廣泛的有機(jī)化工產(chǎn)品，由于其含氮量高達(dá)66%，因此近年來被不法商家利用。國(guó)內(nèi)外三聚氰胺的分析方法很多，本文綜述了三聚氰胺的各種檢測(cè)方法，并且比較了不同方法的優(yōu)缺點(diǎn)及其實(shí)用性，意在找出最快速、便捷、成本低的檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：三聚氰胺 檢測(cè) 食品 方法

中圖分類號(hào)：TS201 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2013）06（a）-0229-02

三聚氰胺作為一種重要的化工原料，常用于制造三聚氰胺樹脂該物質(zhì)，是建筑業(yè)中常用的防火阻燃燃料[1]。三聚氰胺既不是食品原料，也不是食品添加劑，但與蛋白質(zhì)相比其含氮量更高，并且價(jià)格較蛋白質(zhì)便宜很多，因此一些不法商家將其添加在食品或飼料中，鉆國(guó)家目前蛋白質(zhì)檢測(cè)方法的空子，以形成產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量高的假象[2]，從而獲得更高的利益。這種手段造成了極其惡劣的社會(huì)影響，也給國(guó)家?guī)砹藝?yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。如今三聚氰胺的分析檢測(cè)問題已成為一個(gè)熱點(diǎn)問題，受到廣泛的關(guān)注。本文對(duì)三聚氰胺的各種檢測(cè)方法進(jìn)行歸納總結(jié)，為三聚氰胺的快速檢測(cè)提供理論依據(jù)。

近幾年三聚氰胺的檢測(cè)方法發(fā)展迅速，已經(jīng)由早期的苦味酸法和升華法到后來的高效液相色譜法、液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，到現(xiàn)在的酶聯(lián)免疫法、金納米粒子光度法和膠體金免疫層析法等。三聚氰胺的分析檢測(cè)方法在儀器上不斷提高，在精確度上也是逐步提升，時(shí)間上不斷縮短。

1 重量法

重量法包括苦味酸法和升華法，其反應(yīng)原理簡(jiǎn)單，但精確度不高。

苦味酸法方法原理是將水加入試樣，加熱溶解后，加人苦味酸溶液，稱量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的質(zhì)量，即測(cè)得三聚氰胺純度含量。升華法測(cè)定原理是在升華裝置中將試樣在負(fù)壓下進(jìn)行加熱，讓三聚氰胺完全升華后，稱其殘?jiān)?，即測(cè)得三聚氰胺純度[3]。

2 高效液相色譜法（HPLC）

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22400-2008[4]公布了原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)的高效液相色譜法，采用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑，0.2μm微孔濾膜過濾后供HPLC測(cè)定。采用紫外/二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，該方法的檢出限為0.05 mg/kg，重復(fù)性好，再現(xiàn)性強(qiáng)。

王輝等[5]建立用高效液相色譜-二極管陣列法測(cè)定高蛋白食品中的三聚氰胺的檢測(cè)方法。對(duì)不同樣品采用不同的前處理方法，流動(dòng)相為0.02 mol/L硫酸銨∶甲醇=94∶6（V∶V），二極管陣列檢測(cè)器于235 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，并以保留時(shí)間和三維光譜圖相似性系數(shù)進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。不同樣品的加標(biāo)回收率98.8%～101.5%，RSD小于1.2%。方法線性范圍為0.1～150μg/mL，檢測(cè)限為0.01μg/mL，相關(guān)系數(shù)R=0.9999。張美金[6]等人建立了采用HPLC檢測(cè)寵物食品和飼料中的三聚氰胺，得出最低檢測(cè)限位1.0 mg/kg，加標(biāo)回收率為80%～110%，RSD<10%。

3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-MS）

該檢測(cè)方法檢測(cè)過程很簡(jiǎn)單，靈敏度高，最重要的是它可以不需要標(biāo)準(zhǔn)品就可以進(jìn)行定性和定量分析。

欒偉[7]建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）用于寵物食品中三聚氰胺檢測(cè)的方法，并將其與美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局US FDA公布的氣相色譜-質(zhì)譜和液相色譜方法進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LC-MS/MS的方法，前處理過程簡(jiǎn)單，是一種高靈敏度、高選擇性的分析方法。

李愛軍[8]等應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺殘留，試樣提取后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定性定量分析。采用電噴霧離子源，定性離子對(duì)為127.2/85.2和127.2/68.2；定量離子對(duì)為127.2/85.2。在添加了0.5～10.0 mg/kg的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)的回收率為92.6%～103.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.8%～2.0%，檢出限為0.2 mg/kg。

4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法就是進(jìn)樣后利用氣相色譜將各物質(zhì)分離，定性的測(cè)定三聚氰胺，再用質(zhì)譜的方法測(cè)定該成分的分子量從而確定該物質(zhì)的存在。婁大偉[9]等利用三乙胺、水、甲醇超聲萃取樣品中的三聚氰胺，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)奶粉中三聚氰胺進(jìn)行測(cè)定。使用三乙胺/去離子水/甲醇混合液對(duì)奶粉中的三聚氰胺進(jìn)行提取后，進(jìn)一步采取硅烷化衍生法，有效地去除了基質(zhì)所帶來的干擾，而在前處理中加入苯代三聚氰胺做內(nèi)標(biāo)，顯著地提高了方法的精密度。

5 酶聯(lián)免疫法

利用抗原與抗體的高特異性反應(yīng)，通過合適的載體，使酶標(biāo)抗原或抗體與待測(cè)樣品反應(yīng)，形成酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物，在相應(yīng)的酶底物參與下，復(fù)合物上的酶催化底物使之水解成有色物質(zhì)。一定條件下，呈色物質(zhì)與待測(cè)物的含量直接相關(guān)，因此可以根據(jù)呈色物質(zhì)顏色的深淺，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定性定量分析。

陳俊峰[10]等將標(biāo)準(zhǔn)液和待測(cè)液置于酶聯(lián)免疫試劑盒中振蕩反應(yīng)一段時(shí)間后，將混合液用酶標(biāo)儀在雙波長(zhǎng)450 nm、630 nm下檢測(cè)吸光度。試驗(yàn)結(jié)果表明使用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行三聚氰胺的含量測(cè)定，具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點(diǎn)。但是此法對(duì)與三聚氰胺結(jié)構(gòu)相似的也有一定程度的交叉反應(yīng)，導(dǎo)致測(cè)得的結(jié)果偏高，因此一旦出現(xiàn)陽性樣品還需要用GC-MS法加以確定，而且此法受溫度影響較大。

6 金納米粒子光度法

2011年，曾國(guó)平[11]等報(bào)道在PBS緩沖體系中，金納米粒子與三聚氰胺形成粒徑較大的聚集體，導(dǎo)致共振瑞利散射強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。在一定條件下，散射強(qiáng)度與三聚氰胺濃度成正比，由此建立了以金納米粒子作光譜探針檢測(cè)鮮牛奶中三聚氰胺的新方法。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，三聚氰胺的檢出限為2.7×10-8 mol/L，本方法金納米粒子無需修飾，在體系中僅加入一定量的單鏈寡聚核苷酸，實(shí)驗(yàn)表明該方法具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高及選擇性好等特點(diǎn)。2012年，孫海燕[12]等報(bào)道以金納米粒子作為比色探針，建立了快速檢測(cè)牛奶和雞蛋中三聚氰胺的方法，該方法的加標(biāo)回收率為95.0%～105.0%。

7 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法是近10年發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)，它是基于抗原抗體的特異性反應(yīng)，用膠體金作為標(biāo)記物。該方法操作簡(jiǎn)單、快速、特異靈敏，不需要儀器，不需專業(yè)技術(shù)人員操作，幾分鐘內(nèi)即可通過目視判斷檢測(cè)結(jié)果，并可保持檢測(cè)結(jié)果，比酶聯(lián)免疫吸附法操作更簡(jiǎn)單，更適合在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。2012年，周彤[13]等人采用戊二醛法制備三聚氰胺-BSA偶聯(lián)抗原，膠體金標(biāo)記三聚氰胺單克隆抗體，建立了檢測(cè)三聚氰胺的膠體金免疫層析試驗(yàn)。結(jié)果顯示，該試驗(yàn)具有良好的敏感性，膠體金免疫層析試驗(yàn)對(duì)鮮奶、奶粉和飼料樣品中三聚氰胺的最低檢測(cè)量分別為1.0、2.0和2.5μg/g，該法適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)三聚氰胺。

8 結(jié)語

理想的分析技術(shù)應(yīng)該滿足以下條件：高靈敏度或低檢測(cè)限，高度專一，分析時(shí)間短，成本低廉，便捷易攜帶，少量或不用預(yù)處理程序，適合復(fù)雜基質(zhì)測(cè)定。由于三聚氰胺對(duì)食品安全構(gòu)成的威脅，迫切要求開發(fā)更快速、低成本的檢測(cè)方法，筆者全面分析了目前食品中三聚氰胺的檢測(cè)方法，膠體金免疫層析法具有操作簡(jiǎn)單、快速、特異靈敏，不需要儀器，可以廣泛地應(yīng)用于實(shí)際生活。

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