■金素雅 葉元土 蔡春芳 肖順應(yīng) 王永玲

（1.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇省水產(chǎn)動物營養(yǎng)重點實驗室，江蘇蘇州215123；2.溫州市龍灣區(qū)漁業(yè)技術(shù)推廣站，浙江溫州325000）

菜籽餅粕是重要的水產(chǎn)飼料蛋白質(zhì)飼料資源之一，與其他油料餅粕相比，蛋白質(zhì)中蛋氨酸、半胱氨酸等含硫氨基酸含量較高，賴氨酸略低于豆粕，但蛋白效價為 3.0～3.5，比豆粕還高。菜籽餅粕在膨化飼料中是否會對草魚魚體的氨基酸組成產(chǎn)生影響，魚體氨基酸組成與飼料氨基酸組成有何關(guān)系等之類的問題還少有報道。本文研究4種菜籽餅粕的膨化飼料對草魚全魚、肌肉、肝胰臟的氨基酸組成的影響，并分析其氨基酸組成與對應(yīng)飼料的相關(guān)性，為水產(chǎn)養(yǎng)殖中合理有效地使用菜籽餅粕提供基礎(chǔ)資料。

1 材料及方法

1.1 試驗魚

試驗草魚為蘇州市相城特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場培育的一齡魚種，初重（39.4±2.9）g。經(jīng)兩周暫養(yǎng)后，挑選體格健壯、規(guī)格整齊的魚種隨機(jī)分養(yǎng)于24個養(yǎng)殖網(wǎng)箱中，每組分養(yǎng)15尾，每組3個平行。

1.2 試驗飼料

試驗飼料由小麥、細(xì)米糠、米糠粕、豆粕、魚粉、棉籽粕、菜籽餅粕等常規(guī)原料組成。試驗所選4種菜粕分別為國產(chǎn)菜粕、加拿大菜粕、冷生榨菜餅、印度菜粕，其特性及營養(yǎng)成分見表1，氨基酸組成見表2。4種菜籽餅粕分別設(shè)計23.0%、34.5%二個添加水平，分別命名為國產(chǎn)菜粕膨化Ⅰ組（國菜膨化Ⅰ組，GEⅠ組）、國產(chǎn)菜粕膨化Ⅱ組（國菜膨化Ⅱ組，GEⅡ組）、加拿大菜粕膨化Ⅰ組（加菜膨化Ⅰ組，JEⅠ組）、加拿大菜粕膨化Ⅱ組（加菜膨化Ⅱ組，JEⅡ組）、冷生榨菜餅膨化Ⅰ組（生餅膨化Ⅰ組，SEⅠ組）、冷生榨菜餅膨化Ⅱ組（生餅膨化Ⅱ組，SEⅡ組）、印度菜粕膨化Ⅰ組（印菜膨化Ⅰ組，YEⅠ組）、印度菜粕膨化Ⅱ組（印菜膨化Ⅱ組，YEⅡ組）共8個試驗組，以棉粕用量平衡試驗飼料蛋白質(zhì)水平。所有飼料原料經(jīng)粉碎過60目篩，混合均勻，用LHD超越牌飼料膨化機(jī)加工成直徑2 mm的膨化飼料，飼料置于-20℃冰箱儲存?zhèn)溆谩８髟囼灲M試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表3，氨基酸組成見表4。

表1 4種菜籽餅粕的特性及營養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 4種菜籽餅粕氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ)，g/100 g)

1.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在室內(nèi)長為6 m、寬為3 m、水深1.2 m的水泥池中進(jìn)行，每個水泥池掛5個網(wǎng)箱（1.5 m×1 m×1 m），每個試驗組設(shè)3個重復(fù)，共24個網(wǎng)箱。養(yǎng)殖水體為池塘水經(jīng)過曝氣后抽入，每周換水1次，換水量不超過1/3。每個水泥池加充氧頭10個，保證水體連續(xù)不斷的充氧。養(yǎng)殖時間為9月25～11月25日，正式試驗共62 d。

在整個養(yǎng)殖試驗期間，水溫22～28℃、溶氧＞6.0 mg/l、pH值為(7.4±0.3)、氨態(tài)氮＜0.1 mg/l、亞硝酸鹽＜0.01 mg/l、硫化物＜0.05 mg/l。試驗期間每天投喂量為魚體重的3%～5%，每隔1～2周根據(jù)攝食情況調(diào)整投飼量，每天分3次投喂（08:00、12:30、17:00）。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 測定指標(biāo)

測定飼料、全魚、肌肉、肝胰臟干樣的17種蛋白氨基酸及血清、肌肉、全魚的游離氨基酸，并分析全魚、肌肉、肝胰臟氨基酸與原料、飼料氨基酸之間的相關(guān)性。

1.4.2 測定方法

稱取適量全魚、肌肉、肝胰臟干樣 (含蛋白 7.5～25 mg，準(zhǔn)確至 0.1 mg)于 20 ml安瓿瓶中，加 6 mol/l鹽酸 10 ml后液氮冷凍，真空封口，置于(110±1)℃烘箱中水解 22～24 h。水解完成后，取出冷卻至室溫，混勻、開管、過濾，取0.5 ml濾液置于試管內(nèi)。將試管放置真空干燥箱中，低于60℃真空蒸干。蒸干后，加入3～5 ml樣品稀釋液到試管，使氨基酸濃度達(dá)到50～250 nmol/ml，振蕩混勻，0.22 μm 濾膜過濾后，用S-433D氨基酸分析儀（德國SYKAM公司）測定蛋白質(zhì)氨基酸含量。色氨酸因酸水解破壞沒有單獨測定。

表3 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表4 試驗飼料氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

取適量離心后的血清，加入等量磺基水楊酸（8%），混合搖勻后置于4℃的冰箱中存放30 min以上除蛋白，取出后12 000 r/min離心20 min，取上清液，用鋰鹽的樣品稀釋液按1∶1將其溶解，用0.22 μm濾膜過濾后上機(jī)。

準(zhǔn)確稱取一定量的肌肉、全魚鮮樣樣品，加入10倍體積的3%磺基水楊酸后勻漿，12 000 r/m、4℃離心20 min，取上清液用0.22 μm的微孔濾膜過濾后上機(jī)。

用S-433D氨基酸分析儀（德國SYKAM公司）測定游離氨基酸含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗結(jié)果用Excel與SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，在雙因素方差分析的基礎(chǔ)上，采用Duncan's多重比較法檢驗組間差異，以P＜0.05表示差異顯著。相關(guān)系數(shù)的處理方法采用Microsoft Office(2003)中的 Excel表中“CORREL”函數(shù)計算。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菜籽餅粕對草魚全魚氨基酸組成的影響(見表5)

表5 不同菜籽餅粕及其添加水平對全魚氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

由表5可知，各試驗組的全魚氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)無明顯差異，除GEⅠ組的相關(guān)系數(shù)為0.88外，其他的均在0.90以上；與原料氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)在0.90～0.95之間，并無明顯差異。各試驗組全魚的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為11.71%，氨基酸總量的變異系數(shù)為12.17%。各必需氨基酸中蛋氨酸的變異系數(shù)最大，達(dá)到16.47%，其他必需氨基酸變異系數(shù)在10.02%～13.60%之間。非必需氨基酸中脯氨酸變異系數(shù)最大為15.57%，其他非必需氨基酸變異系數(shù)在12.30%～15.49%之間。

以上結(jié)果表明，4種菜籽餅粕沒有顯著影響草魚全魚的氨基酸組成。

2.2 不同菜籽餅粕對草魚肌肉氨基酸組成的影響（見表6)

由表6可知，草魚肌肉的氨基酸組成與對應(yīng)飼料的相關(guān)系數(shù)各試驗組間無差異，都在0.87以上；與對應(yīng)的原料的氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)在0.85～0.92之間，變異系數(shù)為2.12%；肌肉的必需氨基酸變異系數(shù)為3.52%，氨基酸總量的變異系數(shù)為3.73%。各試驗組必需氨基酸的變異系數(shù)在2.68%～6.75%之間，其中組氨酸的變異系數(shù)最高；非必需氨基酸的變異系數(shù)均在5.66%以內(nèi)。

以上結(jié)果表明，4種菜籽餅粕沒有顯著影響草魚肌肉的氨基酸組成。

2.3 不同菜籽餅粕對草魚肝胰臟氨基酸組成的影響（見表7）

由表7可知，草魚肝胰臟的氨基酸組成與對應(yīng)飼料的相關(guān)系數(shù)各試驗組間無差異，都在0.88～0.91之間，變異系數(shù)為1.01%；與原料氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)在0.87～0.91之間，變異系數(shù)為1.76%，各試驗組并無明顯差異。各試驗組必需氨基酸的變異系數(shù)在8.70%～15.75%之間，其中蛋氨酸的變異系數(shù)最高，達(dá)15.75%；非必需氨基酸的變異系數(shù)最高的是脯氨酸，其值為13.73%。肝胰臟的必需氨基酸變異系數(shù)為9.84%，氨基酸總量的變異系數(shù)為9.98%。

表6 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚肌肉氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表7 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚肝胰臟氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

以上結(jié)果表明，4種菜籽餅粕沒有顯著影響草魚全魚肝胰臟的氨基酸組成。

2.4 不同菜籽餅粕對草魚血清游離氨基酸組成及含量的影響（見表8）

由表8可知，各試驗組草魚的血清游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)均成負(fù)相關(guān)，其變異系數(shù)為14.34%。各試驗組血清游離氨基酸的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為3.92%，其中苯丙氨酸的變異系數(shù)最大，達(dá)到12.39%；氨基酸總量的變異系數(shù)為4.41%，各氨基酸變異系數(shù)在4.12%～16.36%之間。各試驗組之間的血清游離氨基酸的相關(guān)系數(shù)在0.974～0.995之間，表明各試驗組草魚的血清游離氨基酸組成接近。

表8 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚血清游離氨基酸組成及含量的影響

以上結(jié)果顯示：①各試驗組草魚的血清游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性不強(qiáng)。②依據(jù)血清游離氨基酸的含量，計算各試驗組之間血清游離氨基酸整體的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果均在0.974以上(見表8)，表明不同試驗組之間血清氨基酸組成模式基本一致，處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)。

2.5 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚肌肉游離氨基酸組成及含量的影響（見表9）

由表9可知，各試驗組的肌肉游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)均成負(fù)相關(guān)，其變異系數(shù)為15.03%。各試驗組肌肉游離氨基酸的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為2.8%，其中蛋氨酸的變異系數(shù)最大，達(dá)到18.6%；氨基酸總量的變異系數(shù)為1.7%，各氨基酸變異系數(shù)在2.6%～18.6%之間。各試驗組之間的肌肉游離氨基酸的相關(guān)系數(shù)在0.993～0.999之間，表明各試驗組間草魚的肌肉游離氨基酸組成接近。

表9 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚肌肉游離氨基酸組成及含量的影響

以上結(jié)果顯示：①各試驗組草魚的肌肉游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性不強(qiáng)。②依據(jù)肌肉游離氨基酸的含量，計算各試驗組之間肌肉游離氨基酸整體的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果均在0.993以上(見表9)，表明不同試驗組之間肌肉氨基酸組成模式基本一致，處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)。

2.6 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚全魚游離氨基酸組成及含量的影響（見表10）

由表10可知，各試驗組的草魚全魚游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成相關(guān)系數(shù)在0.332～0.450之間，變異系數(shù)為9.03%。各試驗組的全魚游離氨基酸的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為1.3%，變異系數(shù)最大的是蛋氨酸，達(dá)6.5%；氨基酸總量的變異系數(shù)為2.2%，各氨基酸的變異系數(shù)在2.0%～20.4%之間。各試驗組之間的全魚游離氨基酸的相關(guān)系數(shù)在0.989～0.997之間，表明各試驗組草魚的全魚游離氨基酸組成接近。

以上結(jié)果顯示：①各試驗組草魚的全魚游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性不強(qiáng)。②依據(jù)全魚游離氨基酸的含量，計算各試驗組之間全魚游離氨基酸整體的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果均在0.989以上(見表10)，表明不同試驗組之間的全魚氨基酸組成模式基本一致，處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)。

3 討論

魚蝦對蛋白質(zhì)的需要量實際是對必需氨基酸和非必需氨基酸混合比例數(shù)量的需要。魚類必需氨基酸有10種，它們的總含量應(yīng)不低于飼料中粗蛋白含量的1/3，而動物性蛋白含量應(yīng)不低于飼料蛋白質(zhì)含量的1/3，在魚類的日糧中必需氨基酸與非必需氨基酸之間的比例大致是40%∶60%。本試驗所用飼料的∑EAA/pr值在0.33～0.38之間，其必需氨基酸和非必需氨基酸之間的比例大約為45%∶55%，符合魚體對蛋白的需求。葉元土等認(rèn)為飼料氨基酸的平衡效果對草魚的養(yǎng)殖效果有密切影響，其影響規(guī)律成正相關(guān)關(guān)系。本試驗結(jié)果表明各試驗飼料與其相對應(yīng)的試驗組的全魚、肌肉、肝胰臟相關(guān)系數(shù)均在0.87～0.95之間，并無顯著差異，表明各試驗組的氨基酸含量均能滿足草魚的生長需要。

表10 不同菜籽餅粕及其添加水平對草魚全魚游離氨基酸組成及含量的影響

各試驗組草魚肌肉的各種必需氨基酸的變異系數(shù)在2.68%～6.75%之間，說明各試驗組肌肉的必需氨基酸組成非常接近，并且與飼料的必需氨基酸相關(guān)性不顯著（P＞0.05），這表明試驗飼料對肌肉的必需氨基酸組成沒有影響。這一結(jié)果與黃更生等[6]研究結(jié)果相同。Kaushi飼喂不同試驗飼料的大菱鲆全魚必需氨基酸組成沒有顯著性差異；Mambrini、Akiyama推斷全魚必需氨基酸的穩(wěn)定性可以延用到大部分的硬骨魚類上。Mai等研究表明大黃魚肌肉其它必需氨基酸不受飼料中蛋氨酸的影響，蛋氨酸和異亮氨酸含量受飼料中蛋氨酸水平的影響。林仕梅等發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充D-蛋氨酸對羅非魚全魚氨基酸含量不產(chǎn)生任何影響，但魚體組氨酸和脯氨酸含量受飼料中蛋氨酸水平的影響。本試驗結(jié)果表明試驗中的飼料氨基酸組成對草魚全魚、肌肉、肝胰臟氨基酸組成沒有明顯影響。

施瑔芳認(rèn)為，飼料中的蛋白質(zhì)在魚體內(nèi)經(jīng)過消化轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N氨基酸，由腸壁吸收后進(jìn)入魚體的血液，其中一部分經(jīng)肝門靜脈進(jìn)入肝臟；另一部分氨基酸隨血液循環(huán)分布到魚體內(nèi)各組織細(xì)胞中，用來合成魚體自身的特殊蛋白質(zhì)或各種活性物質(zhì)，血液中的游離氨基酸是魚體肌肉組織中游離氨基酸和蛋白質(zhì)的主要來源。不同器官組織游離氨基酸的組成和來源有差異，不同組織蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)代謝存在差異。羅莉等研究表明，對草魚飼喂不同氨基酸模式的日糧發(fā)現(xiàn)，氨基酸模式越平衡，蛋白質(zhì)合成和降解速率越高，蛋白質(zhì)合成的增加更占優(yōu)勢。本試驗結(jié)果表明，各試驗組草魚的血清、肌肉、全魚游離氨基酸組成與對應(yīng)飼料的氨基酸組成的相關(guān)性均不強(qiáng)，但不同試驗組之間的草魚同一器官組織的游離氨基酸組成的相關(guān)系數(shù)均在0.9以上。

4 結(jié)論

4種菜籽餅粕在草魚膨化飼料中的使用不會顯著影響草魚全魚、肌肉、肝胰臟的氨基酸組成；不同試驗組之間的草魚同一器官組織的游離氨基酸組成模式基本一致，處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)。

（參考文獻(xiàn)14篇，刊略，需者可函索）