王乃紅 靳月琴 蘆 成

(山西省蠶業(yè)科學(xué)研究院， 山西運城 044000)

蛹蟲草(Cordycepsmilitaris)，又稱北冬蟲夏草、北蟲草，具有抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力等功效，是一種藥食同源的真菌，主要寄生于鱗翅目、雙翅目及鞘翅目等昆蟲的蛹或幼蟲體上，蛹蟲草的活性成分種類及含量與冬蟲夏草基本相似，完全可以替代日益匱乏的冬蟲夏草[1-4]。目前，從野生蟲草上分離培育的蛹蟲草菌種，利用柞蠶、家蠶、大米和小麥等培養(yǎng)基的人工栽培技術(shù)已日漸成熟，并且具有廣闊的開發(fā)前景。本文綜述了柞蠶蛹蟲草的人工培育、活性成分、藥理作用及產(chǎn)品開發(fā)方面的研究新進(jìn)展。

1 柞蠶蛹蟲草的人工培養(yǎng)

1.1 菌種的分離與馴化

培養(yǎng)柞蠶蛹蟲草的關(guān)鍵技術(shù)是獲得對蠶蛹感染力強且生產(chǎn)性能優(yōu)良的蟲草菌株。目前，在蛹蟲草人工培養(yǎng)成功的報道中，一般是將采集到的野生北蟲草經(jīng)過表面消毒后切取小段，接種于試管固體PDA培養(yǎng)基(土豆、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鈉、硫酸鎂)上，25 ℃下培養(yǎng)，從組織塊上長出白色絨毛狀菌絲，直到長滿整個斜面有淺黃色色素產(chǎn)生，即為母種。然后將分離得到的母種菌種接種于液體培養(yǎng)基內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)成菌絲團(tuán)，隨著時間的推移，菌絲團(tuán)內(nèi)部組織分化成子實體，經(jīng)過馴化成熟的子實體再進(jìn)行分離，并接種到用75%乙醇消毒的柞蠶蛹體內(nèi)，培養(yǎng)出子實體后，再進(jìn)行分離，這樣反復(fù)篩選而得到適合柞蠶蛹的蟲草菌株[5-6]。在我國野生的北蟲草分布范圍較廣，各地都有。由于柞蠶主要產(chǎn)于東北地區(qū)，野生蟲草也多數(shù)來源于吉林省的長白山、遼寧省的棋盤山和冰峪溝等地。

1.2 接種方法

1986年谷恒生等[7]報道，用柞蠶和家蠶蛹為宿主，采用將體表消過毒的蠶蛹投入長有蛹蟲草菌絲的培養(yǎng)基上，或用向蛹體注入液體培養(yǎng)菌液這2種方法，使蛹體感染，感染后的蛹體置空瓶中培養(yǎng)，獲得了具有天然形態(tài)的蛹蟲草。最近十多年里，柞蠶蛹蟲草已經(jīng)可以規(guī)?；a(chǎn)，接種技術(shù)也越來越成熟，應(yīng)用最廣泛的還是液體注射的接種方法。

1.3 利用柞蠶幼蟲培養(yǎng)蛹蟲草

柞蠶屬于野外大規(guī)模放養(yǎng)的經(jīng)濟(jì)昆蟲，以柞蠶幼蟲為寄主栽培蛹蟲草的生長期，比以蛹為寄主栽培蛹蟲草所需的時間短, 可以節(jié)省勞動力,其蟲草的形態(tài)更接近天然蟲草。劉勤等[8]利用4齡柞蠶幼蟲，采用穿刺接種、浸漬接種、添食接種、穿刺與浸漬接種相結(jié)合、穿刺與添食接種相結(jié)合、浸漬與添食接種相結(jié)合及穿刺、浸漬與添食3種接種相結(jié)合共7種接種方式，最后得出：蟲草菌能夠在蠶幼蟲體內(nèi)寄生并可培育成蟲草，穿刺處理時每頭蠶注射0.5 mL菌液至血液中, 在3～4 腹節(jié)背部節(jié)膜處注射是蟲草菌液接種柞蠶4齡幼蟲的最佳方式，因蠶血液環(huán)境是酸性(pH為6.2～6.8) 正適合蟲草菌孢子(25 ℃條件下)生長，并且血液營養(yǎng)豐富有利于蟲草菌生長。孟楠等[9]用柞蠶5齡幼蟲培育蠶蟲草，結(jié)果表明：采用液體菌液(200 uL/頭)針頭平行蠶體表注射的方法，常規(guī)條件下培養(yǎng)，對5齡蠶效果最佳，感染硬化時間短，可達(dá)到批量生產(chǎn)的規(guī)模。

1.4 利用柞蠶蛹培養(yǎng)蛹蟲草

由于柞蠶蛹個體大，體內(nèi)蛋白質(zhì)營養(yǎng)豐富，而且蛹期較長利于保存，是栽培蛹蟲草的理想原材料。自1986年吉林蠶業(yè)研究所首次培育柞蠶蛹蟲草成功后[7]，苑貴華等[10]又進(jìn)行了規(guī)模化培育蠶蛹蟲草的研究，隨后利用柞蠶蛹栽培蟲草的報道日漸增多。李亞潔等[11]取剛化蛹的柞蠶蛹用75%乙醇消毒后，再用注射器將0.3～0.5 mL液體菌液注射到蛹體內(nèi)，在23～25 ℃條件下培養(yǎng)7～10 d變成僵蛹，再經(jīng)過25～30 d培養(yǎng)，形成子實體并可以收獲。

柞蠶是兼性滯育昆蟲，東北地區(qū)飼養(yǎng)的屬于二化性，河南省飼養(yǎng)的屬于一化性，為了能工廠化全年生產(chǎn)， 陳丹等[12]利用吉林省的春、秋二化性柞蠶蛹和河南省的一化性柞蠶蛹進(jìn)行試驗，結(jié)果表明：不同發(fā)育狀態(tài)和不同化性的柞蠶蛹生產(chǎn)的蟲草出草率不同，滯育蛹出草率為74%，發(fā)育蛹為42%；一化性柞蠶蛹出草率為72.1%，二化性春柞蠶蛹為7.7%。秋柞蠶化蛹后30 d 進(jìn)入滯育期，此時綜合代謝水平最低，是接種蛹蟲草菌種的最佳時期；秋柞蠶蛹如感受5～8 ℃溫度45 d則完全解除滯育，再感受9.5 ℃溫度即開始發(fā)育，所以要特別注意秋柞蠶蛹的儲存溫度，7月至10月最適宜用一化性柞蠶蛹生產(chǎn)蛹蟲草，二化春柞蠶蛹則不適合生產(chǎn)蛹蟲草，而二化性秋蛹最適合工廠化生產(chǎn)蛹蟲草。

蛹蟲草菌并非柞蠶蛹的致病菌，工廠化過程中，難免出現(xiàn)一些問題，劉曉紅等[13]在進(jìn)行菌絲培養(yǎng)時以經(jīng)過滅菌的蛭石和草炭等混合的“營養(yǎng)土”覆蓋蛹體可加速菌絲生長，蛹體發(fā)菌均勻一致，蛹體僵化快；蛹體僵化后，用刀在蛹體的一端進(jìn)行刻傷，即在頭部刻出鋸齒狀條痕，這樣的蛹出草快，出草一致，生長周期縮短，出草率高，蛹蟲草的質(zhì)量好。

2 柞蠶蛹蟲草活性成分分析

蟲草素、蟲草酸及蟲草多糖是蛹蟲草的主要活性成分，也是衡量柞蠶蛹蟲草品質(zhì)的重要指標(biāo)，都興范等[14]分析表明：柞蠶蛹蟲草中的蟲草素含量為1.863 mg/g，冬蟲夏草的蟲草素含量為0.123 mg/g，二者相差近15倍；而蟲草多糖柞蠶蛹蟲草為1.34%，是冬蟲夏草(蟲草多糖為0.85%)的1.6倍；柞蠶蛹蟲草和冬蟲夏草的蟲草酸含量分別為13.79%和13.17%，差別較小。柞蠶蛹蟲草與冬蟲夏草在化學(xué)成份上大致相同，從氨基酸種類和含量的分析來看，柞蠶蛹蟲草與冬蟲夏草均含有18種氨基酸，氨基酸總量柞蠶蛹蟲草為271.30 mg/g，冬蟲夏草為197.02 mg/g，柞蠶蛹蟲草氨基酸總量是冬蟲夏草的1.2倍；必需氨基酸含量柞蠶蛹蟲草為101.3 mg/g，冬蟲夏草為66.82 mg/s，必需氨基酸含量占總氨基酸含量的比例分別為37.24%和33.92%。由此不難看出，柞蠶蛹蟲草與冬蟲夏草氨基酸含量豐富，種類齊全，比例適當(dāng)。

3 藥理作用

3.1 延緩衰老

蛹蟲草含有大量的生理活性成分，迄今已檢測或分離到多種活性物質(zhì)如蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸、超氧化物歧化酶(SOD)以及礦物質(zhì)元素等，被中醫(yī)推崇為治療“虛癥、虛痙、虛痛”的圣藥，既補肺陰，又補腎陽[15-16]。王寶貴等[17]的研究結(jié)果表明：柞蠶蛹蟲草能夠明顯延長果蠅存活的時間；張海娟等[18]從衰老自由基學(xué)說的角度進(jìn)一步探討其延緩衰老的機(jī)制，試驗證明：柞蠶蛹蟲草具有明顯的抗氧化和降低脂質(zhì)過氧化物，以及增強谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px活性的作用，故能提高清除自由基的能力。同時，可能因為腺苷成分還屬于羥自由基的清除劑，阻斷氧化過程，從而對含脂質(zhì)豐富的細(xì)胞膜和亞細(xì)胞器起到保護(hù)作用，防止能量生成系統(tǒng)、酶、抗體及蛋白激素等合成障礙，防止細(xì)胞發(fā)生自溶而損壞細(xì)胞等。

3.2 抗腫瘤作用

柞蠶蛹蟲草和冬蟲夏草一樣，蟲草素是主要的功效成分之一，它還含有腺苷、腺嘌呤、尿嘧啶、甘露醇及l(fā)8種氨基酸。劉潔等[19]研究結(jié)果表明：蠶蛹蟲草對小鼠S180有明顯的抑制作用，延長荷瘤小鼠壽命，可明顯抑制小鼠 Lewis肺癌原發(fā)灶生長和自發(fā)性肺部轉(zhuǎn)移。王林美等[20]試驗結(jié)果表明：柞蠶蛹蟲草水提物中的有效成分對體外培養(yǎng)的人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長有顯著抑制作用, 并呈時間與劑量的依賴性。都興范等[21]用柞蠶蛹蟲草提取的蟲草素對人乳腺癌MCF-7和小鼠S180肉瘤細(xì)胞生長抑制作用進(jìn)行了研究，蟲草素抑制腫瘤作用是引起細(xì)胞凋亡，而不是壞死，結(jié)果與王林美等[20]的報道相似。

4 產(chǎn)品開發(fā)

目前，柞蠶蛹蟲草已經(jīng)應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、食品及化妝品等領(lǐng)域。據(jù)李樹英等[22]介紹市場上柞蠶蛹蟲草制品如蟲草丹、寧心寶膠囊具有鎮(zhèn)咳、降低膽固醇等療效；還有化妝品北蟲草活力霜可營養(yǎng)肌膚、抗衰、防皺，適于中老年人使用；在食品方面有蟲草茶、蟲草酒，長期食用能提高機(jī)體的免疫力。除此之外，許多飯店還推出了蛹草清蒸雞、蛹草燉乳鴿、蛹草燉甲魚等幾十道美味佳肴。

蠶蛹蟲草技術(shù)已經(jīng)歷20多年的歷史，且功效也與冬蟲夏草相當(dāng)，是冬蟲夏草最理想的替代品，具有很好的開發(fā)應(yīng)用前景。

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