林仙軍

(浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310058;浙江省獸藥飼料監(jiān)察所)

雙黃連制劑是由金銀花、黃芩和連翹三味中藥材通過(guò)一定工藝制得的中獸藥制劑，常見(jiàn)的劑型有口服液、注射液、顆粒劑、散劑和粉劑等;其藥理作用主要有抗菌、抗病毒、解熱消炎及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用，常用于預(yù)防和治療畜禽外感風(fēng)寒所致的上呼吸道感染、急性支氣管炎、急性扁桃腺炎和肺炎等感染，獸醫(yī)臨床使用非常廣泛。

1 藥理作用

1.1 抗菌作用 雙黃連制劑的抗菌作用主要表現(xiàn)在清熱解毒，輕宣透邪，疏風(fēng)解表，用于外感風(fēng)熱所致的發(fā)熱、咳嗽、咽痛、上呼吸道感染、肺炎、急性扁桃體炎等證候。

陳百泉等(2002)［1］、袁宏偉等(2007)［2］和程慧等(2011)［3］研究表明，雙黃連制劑中的綠原酸、連翹苷和黃芩苷等多種成分都有明顯的抑菌、殺菌作用，對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌等多種病原菌均有較強(qiáng)的殺滅作用。

體外抑菌試驗(yàn)表明，雙黃連制劑對(duì)金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、大腸埃希氏菌、變形桿菌、痢疾桿菌及腦膜炎球菌等均有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)以假單胞菌制作的大鼠慢性肺部感染病理模型具有明顯的抗感染作用。

1.2 抗病毒作用 雙黃連制劑為廣譜抗病毒藥物，有抗呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、柯薩奇病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、水皰性口炎病毒及麻疹病毒等作用。在細(xì)胞培養(yǎng)條件下能抑制和延緩細(xì)胞病變的出現(xiàn)，避免呼吸道合胞病毒所致的細(xì)胞固縮和細(xì)胞單層不完整。

呂海濤等(2000)［4］研究發(fā)現(xiàn)雙黃連制劑不僅可直接殺傷柯薩奇病毒、阻斷或減緩病毒吸附細(xì)胞等作用，而且對(duì)細(xì)胞內(nèi)低滴度病毒復(fù)制具有一定的抑制作用。李京玉等(2008)［5］選用10日齡SPF 雞胚對(duì)不同濃度的雙黃連口服液進(jìn)行新城疫強(qiáng)毒人工感染抑殺試驗(yàn)，試驗(yàn)藥物經(jīng)100、150、200 倍稀釋后，對(duì)雞胚的保護(hù)率分別達(dá)到100%、100% 和90%，顯示雙黃連制劑具有較強(qiáng)的抗病毒作用。

易世紅等(2001)［6］采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法、染料攝入法檢測(cè)雙黃連粉針劑對(duì)不同病毒的作用，改變給藥時(shí)間、途徑，探討雙黃連粉針劑抗病毒作用環(huán)節(jié)，建立病毒性心肌炎、胰腺炎、流感動(dòng)物模型，通過(guò)組織病理學(xué)檢查方法，觀(guān)察雙黃連粉針劑對(duì)感染動(dòng)物的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雙黃連粉針劑具有明顯抗流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒Ⅲ、單純皰疹病毒Ⅰ型及Ⅱ型、柯薩奇病毒B 等作用，對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅲ型、水泡性口炎病毒、麻疹病毒有一定的抑制作用，能顯著抑制肺炎、心肌炎、胰腺炎等疾病的發(fā)生。

1.3 解熱抗炎作用 研究表明，雙黃連制劑能抑制炎癥介質(zhì)導(dǎo)致的腫脹和增加血管通透性，對(duì)注射細(xì)菌內(nèi)毒素引起的發(fā)熱反應(yīng)有明顯的解熱作用，且呈量效對(duì)應(yīng)關(guān)系。

李京玉等(2008)［5］通過(guò)采取耳緣靜脈注射內(nèi)毒素造成家兔發(fā)熱的方法，對(duì)雙黃連口服液的解熱作用進(jìn)行深入研究，表明雙黃連口服液對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹、蛋清性大鼠足趾腫脹、H +致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性提高均有明顯的抑制作用，還可明顯抑制發(fā)熱模型家兔肛溫的升高，表明雙黃連制劑具有良好的抗炎解熱作用。

雙黃連中的黃芩具有清肺熱、抗病毒、解肌表之熱等功效，而金銀花配合連翹能辛涼透邪以清熱，同時(shí)具有抗炎癥效果。朱社敏等(2001)［7］將預(yù)測(cè)體溫合格家兔給藥后立即靜脈注射細(xì)菌內(nèi)毒素50 EU/kg，每隔30 min 檢測(cè)直腸溫度1 次，表明雙黃連注射液、滴丸、顆粒劑和口服液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素引起的家兔體溫升高具有良好的解熱作用，與空白組比較效果顯著。

1.4 免疫調(diào)節(jié)作用 雙黃連制劑是一種多功能免疫增強(qiáng)劑。據(jù)袁宏偉(2007)［2］等研究，經(jīng)腹腔注射5 mL/kg、15 mL/kg、25 mL/kg 均能頡頏氫化可的松導(dǎo)致的小鼠免疫功能抑制，能使補(bǔ)體總量、補(bǔ)體介導(dǎo)的免疫復(fù)合物溶解性能增高，其強(qiáng)度以大劑量最顯著，接近機(jī)體正常水平。

另?yè)?jù)試驗(yàn)，雙黃連制劑還可促進(jìn)溶血素的形成，有增強(qiáng)小鼠免疫功能等作用。巨噬細(xì)胞在抗感染免疫、抗腫瘤免疫和免疫應(yīng)答等方面起著非常重要的作用，體內(nèi)試驗(yàn)表明低劑量黃芩苷對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞具有調(diào)節(jié)作用，可顯著增加巨噬細(xì)胞吞噬溶菌酶的含量。

1.5 與抗生素配伍的應(yīng)用研究 雙黃連對(duì)部分抗生素具有明顯的協(xié)同作用，而對(duì)其他部分抗生素具有頡頑作用。朱杰(2011)［8］研究了雙黃連黃芪多糖對(duì)豬口蹄疫的治療效果?？谔阋呤强谔阋卟《疽鹋继銊?dòng)物的一種烈性傳染病，傳播快，發(fā)病率高，主要危害牛、豬、羊等，是世界上危害最嚴(yán)重的家畜傳染病之一。

發(fā)病動(dòng)物主要癥狀是鼻部水皰，口腔溫度高，流涎，廢食;跛行，蹄冠、趾間紅腫，出現(xiàn)充滿(mǎn)灰白色或灰黃色液體的水皰，水皰破裂出血后形成暗紅斑塊。采用雙黃連注射液和黃芪多糖注射液混合肌注及口服等方法，結(jié)合口腔及蹄部局部用藥，共治療病豬477 頭，其中完全康復(fù)469 頭，僵豬2 頭，死亡6 頭，治愈率達(dá)98.3%，死亡者多為哺乳仔豬。

2 毒理作用

雙黃連制劑為純中藥復(fù)方制劑，成分較復(fù)雜，在提取、精制工藝過(guò)程中可能會(huì)含有鞣質(zhì)、色素、樹(shù)脂及蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。這些雜質(zhì)作為抗原、半抗原經(jīng)肌內(nèi)或靜脈注射可引起不良反應(yīng)。

李瑾翡等(2008)［9］進(jìn)行了注射用雙黃連的免疫毒性研究，采用豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)，觀(guān)察注射用雙黃連的過(guò)敏原性，雙黃連高、低劑量組均未出現(xiàn)明顯過(guò)敏反應(yīng)。采用大鼠、小鼠、豚鼠等同種、異種動(dòng)物間的被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)注射用雙黃連具有一定的致敏性。因此，雙黃連注射液可引起一定的過(guò)敏反應(yīng)。

3 應(yīng)用研究

3.1 防控豬病上的應(yīng)用研究 雙黃連制劑具有辛涼解表，清熱解毒，增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功效，對(duì)多種細(xì)菌、病毒具有一定的抑殺作用，治療豬感冒發(fā)熱、流感、仔豬腹瀉、氣喘病及母豬子宮內(nèi)膜炎等疾病均有良好效果。

3.1.1 治療豬流感 豬流感是一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，發(fā)病率較高。據(jù)蔣達(dá)華(2003)［10］、陳文云等(2008)［11］研究表明，雙黃連粉針對(duì)感冒發(fā)熱病豬能起到明顯的治療作用，對(duì)臨床自然感冒發(fā)熱具有良好療效。高、中劑量雙黃連粉針在癥候、體溫、咳嗽、食欲、精神等方面作用顯著，明顯優(yōu)于對(duì)照藥物安乃近注射液。據(jù)張劍(2005)［12］等研究表明，雙黃連注射液治療豬流感繼發(fā)重癥肺炎效果明顯。

3.1.2 治療豬子宮內(nèi)膜炎 母豬子宮內(nèi)膜炎多數(shù)為慢性炎癥，能使交配后的精子失去受精能力，可使受精后的早期胚胎不能著床，即使著床也將發(fā)生早期死亡或中期流產(chǎn)。目前，子宮內(nèi)膜炎已成為母豬繁殖的第一大病害，也是人工授精失敗的主要因素之一。陳寶巖等(2008)［13］、汪勇等(2006)［14］經(jīng)獸醫(yī)臨床試驗(yàn)表明，雙黃連注射液治療母豬子宮內(nèi)膜炎效果顯著，對(duì)家畜無(wú)毒副作用，且能增強(qiáng)家畜的抵抗力。

3.1.3 治療仔豬白痢 仔豬白痢是由致病性大腸桿菌引起的多發(fā)性感染病，尤以10～30日齡仔豬易感，常與引起腹瀉的病毒混合感染，發(fā)病率高達(dá)80%，但死亡率較低，病豬生長(zhǎng)緩慢、發(fā)育不良，多數(shù)成為僵豬。田青等(2011)［15］和李婷婷等(2007)［16］采用雙黃連注射液進(jìn)行仔豬白痢的治療效果試驗(yàn)，采用人工誘發(fā)仔豬白痢的疾病模型，通過(guò)肌注給藥方式進(jìn)行治療試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雙黃連高、中、低劑量組治愈率分別為85.0%、80.0%和67.5%，對(duì)照藥物氟哌酸組治愈率為70.0%，高、中劑量組治療效果顯著強(qiáng)于對(duì)照組。臨床上治療仔豬白痢時(shí)，按雙黃連注射液的推薦用量0.2 mL/kg，肌注給藥，每日兩次，連用5 d，療效顯著。

3.1.4 治療豬氣喘病 豬氣喘病是由豬霉形體引起的一種慢性流行性傳染病。陳文云等(2008)［11］以西藥硫酸卡那霉素注射液為對(duì)照，對(duì)體重40～60 kg 左右的40 頭育肥豬進(jìn)行治療試驗(yàn)。將患豬隨機(jī)分成4 組，即雙黃連粉針大、中、小劑量(肌注，2.0 g、1.0 g、0.5 g)及硫酸卡那霉素對(duì)照組。結(jié)果表明，大、中劑量雙黃連粉針劑治療豬氣喘病，在癥候、體溫、咳嗽、食欲、精神等方面均有顯著療效，治療效果優(yōu)于對(duì)照組，雖差異不顯著(P ＞0.05)，但顯著高于雙黃連低劑量組(P ＜0.05)。推薦劑量為:體重40～60 kg 中豬每次1.0 g，肌注，每日2 次，連用3 d。結(jié)論為雙黃連粉針劑對(duì)臨床治療豬氣喘病，療效顯著。

3.2 防控禽病上的應(yīng)用研究 周翠珍等(2008)［17］采用雙黃連可溶性粉進(jìn)行雞傳染性支氣管炎的預(yù)防和治療試驗(yàn)，預(yù)防組在攻毒前2 d 開(kāi)始用雙黃連可溶性粉對(duì)雞傳染性支氣管炎(IB)進(jìn)行藥物預(yù)防，連用7 d，治療組在攻毒后表現(xiàn)臨床癥狀時(shí)，開(kāi)始用藥進(jìn)行治療，連用5 d。

結(jié)果表明，預(yù)防組高、中、低劑量組對(duì)IB 具有明顯效果，其中高、中劑量組與空白對(duì)照組相比差異極顯著(P ＜0.01);治療組中，高、中劑量組與空白對(duì)照組相比，差異極顯著(P ＜0.01)，表明雙黃連可溶性粉防控雞傳染性支氣管炎的效果顯著。試驗(yàn)表明，雙黃連制劑除對(duì)呼吸道疾病的治療作用外，還具有較強(qiáng)的抑菌殺菌作用，對(duì)各種細(xì)菌引起的腸道疾病有明顯治療作用。

3.3 防控犬病上的應(yīng)用研究 犬的呼吸系統(tǒng)感染是臨床上的常見(jiàn)病、多發(fā)病，常繼發(fā)于犬瘟熱，雙黃連制劑對(duì)犬上呼吸道感染、急性支氣管炎、慢性支氣管炎及肺炎等具有良好的療效。

王紅等(2006)［18］采用雙黃連制劑治療犬急性呼吸道感染的臨床試驗(yàn)，治療組治愈率和總有效率分別為85.0%和95.0%，與對(duì)照組57.0%和77.0%相比，差異極顯著(P ＜0.01);退熱時(shí)間治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組，兩組比較，差異極顯著(P ＜0.01)。

3.4 防控其他動(dòng)物疾病中的應(yīng)用研究 李佩林等(1998)［19］采用雙黃連粉針劑治療兔慢性化膿性中耳炎病50 例，治愈32 例，好轉(zhuǎn)14 例，無(wú)效4 例;其中病程最短者1 個(gè)月，最長(zhǎng)者半年。

治療方法:先用3%雙氧水將耳內(nèi)膿液沖洗潔凈，用消毒棉簽拭干，再用經(jīng)1%新潔爾滅浸泡消毒的干塑料管在患兔耳內(nèi)吹入雙黃連粉劑。

4 制備工藝、質(zhì)量控制及檢測(cè)方法

4.1 制備工藝 房春林等(2009)［20］對(duì)雙黃連顆粒制備工藝條件進(jìn)行了篩選，并對(duì)所用輔料種類(lèi)、用量和顆粒劑干燥溫度進(jìn)行試驗(yàn)。

結(jié)果表明，稱(chēng)取處方量黃芩、金銀花和連翹經(jīng)提取濃縮后得清膏約220 g(相對(duì)密度為1.21－1.25)，顆粒劑所用輔料優(yōu)選糊精和蔗糖，其清膏∶蔗糖∶糊精最佳比例為1 ∶3.5 ∶0.5，干燥溫度為70℃，制備的顆粒劑外觀(guān)粒度較好，吸濕性小，水溶化性良好，符合顆粒劑相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，表明本制劑所制定的工藝路線(xiàn)可行，適合大批量生產(chǎn)。

4.2 質(zhì)量控制及檢測(cè)方法 雙黃連制劑的質(zhì)量控制，通常以金銀花、黃芩、連翹中所含的綠原酸、黃芩苷、連翹苷等作為質(zhì)量控制成分。中獸藥雙黃連制劑產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)獸藥典》(2010年版二部)［21］、《獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)匯編》(第二冊(cè))(農(nóng)業(yè)部公告1506 號(hào))［22］和《獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)匯編》(第三冊(cè))(農(nóng)業(yè)部公告1759 號(hào))［23］等。

檢測(cè)方法有薄層色譜鑒別和高效液相色譜檢測(cè)含量等，檢測(cè)項(xiàng)目包括綠原酸、黃芩苷和連翹苷中的一種或多種。收載于農(nóng)業(yè)部公告1506 號(hào)中的雙黃連注射液僅檢測(cè)黃芩苷的含量作為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制;收載于農(nóng)業(yè)部公告1759 號(hào)的雙黃連可溶性粉只檢測(cè)黃芩苷的含量，以上產(chǎn)品金銀花和連翹質(zhì)量不可控。收載于《中國(guó)獸藥典》(2010年版二部)的雙黃連口服液通過(guò)薄層色譜鑒別黃芩苷、綠原酸和連翹苷。同時(shí)，采用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷含量，以對(duì)雙黃連口服液進(jìn)行質(zhì)量控制。檢測(cè)黃芩苷、綠原酸和連翹苷含量，即能有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

綜上所述，中獸藥雙黃連制劑具有安全、毒副作用小、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，隨著中獸藥制劑技術(shù)的提高，獸用雙黃連劑型品種的增加，檢測(cè)方法研究的深入，在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用將更加科學(xué)和合理。

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