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（中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島266032）

無高致病性禽流感生物安全隔離區(qū)監(jiān)測指南

劉俊輝，張衍海，范欽磊，鄭增忍，蔣正軍

（中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島266032）

本文根據(jù)OIE《動(dòng)物衛(wèi)生法典》關(guān)于禽流感監(jiān)測總則的有關(guān)內(nèi)容，參考泰國生物安全隔離區(qū)建設(shè)經(jīng)驗(yàn)，提出了無高致病性禽流感生物安全隔離區(qū)監(jiān)測的主要方法和要求，以期對(duì)我國生物安全隔離區(qū)建設(shè)企業(yè)提供參考。

生物安全隔離區(qū)；監(jiān)測；方法

生物安全隔離區(qū)在重大動(dòng)物疫病防控和促進(jìn)動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品國內(nèi)外貿(mào)易中發(fā)揮重要作用，已被越來越多的國家認(rèn)可[1-2]。隨著生物安全隔離區(qū)建設(shè)理念的普及和農(nóng)業(yè)部的推動(dòng)，吉林、山東、河南和福建等多個(gè)省份獸醫(yī)行政主管部門，采取了多種推進(jìn)措施，在生物安全隔離區(qū)建設(shè)方面開展了一些積極的探索。同時(shí)，國內(nèi)很多基礎(chǔ)條件好、管理水平高，對(duì)生物安全隔離區(qū)的認(rèn)識(shí)比較到位的企業(yè)，積極開展生物安全隔離區(qū)建設(shè)，取得了重大進(jìn)展[3]。

“證明無疫靠監(jiān)測”，開展有效監(jiān)測是獲得無疫生物安全隔離區(qū)國家評(píng)估的重要基礎(chǔ)。本文在總結(jié)一些地方成功經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，就如何對(duì)高致病性禽流感生物安全隔離區(qū)開展監(jiān)測，為開展生物安全隔離區(qū)建設(shè)的養(yǎng)禽企業(yè)提供借鑒和參考。

1 監(jiān)測的基本要求

1.1 進(jìn)行生物安全隔離區(qū)建設(shè)的企業(yè)應(yīng)與當(dāng)?shù)孬F醫(yī)機(jī)構(gòu)共同建立生物安全隔離區(qū)監(jiān)測體系，制定監(jiān)測計(jì)劃和監(jiān)測方案，共同承擔(dān)禽流感監(jiān)測工作。

1.2 生物安全隔離區(qū)和緩沖區(qū)的禽流感監(jiān)測應(yīng)綜合運(yùn)用臨床監(jiān)測、血清學(xué)監(jiān)測和病原學(xué)監(jiān)測方法。

1.3 樣品采集、保存和運(yùn)輸應(yīng)按照國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定進(jìn)行。

1.4 承擔(dān)禽流感監(jiān)測、診斷的實(shí)驗(yàn)室可以是企業(yè)自控的實(shí)驗(yàn)室，也可以是指定的第三方實(shí)驗(yàn)室，但該實(shí)驗(yàn)室必須要由官方指定，并按照ISO/ IEC17025要求運(yùn)行，而且該實(shí)驗(yàn)室要建立向獸醫(yī)機(jī)構(gòu)快速報(bào)告檢測結(jié)果的程序。

1.5 樣品檢測方法應(yīng)是國家發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法；沒有標(biāo)準(zhǔn)檢測方法時(shí)，可采用OIE規(guī)定的國際標(biāo)準(zhǔn)或診斷試劑提供的方法進(jìn)行檢測，但需到國家有關(guān)部門進(jìn)行備案、獲得認(rèn)可。

1.6 開展生物安全隔離區(qū)建設(shè)的企業(yè)和所在地獸醫(yī)機(jī)構(gòu)應(yīng)分別建立抽樣、檢測、報(bào)告和檢測結(jié)果分析等記錄。

1.7 禽類出欄實(shí)行檢疫申報(bào)制度。養(yǎng)禽場應(yīng)在商品禽出欄前3天向獸醫(yī)機(jī)構(gòu)報(bào)檢，由官方獸醫(yī)到養(yǎng)禽場采取適宜樣品，送官方指定的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行禽流感檢測，結(jié)合臨床健康狀況出具檢疫合格證明。

2 監(jiān)測方案的制定

生物安全隔離區(qū)建設(shè)企業(yè)應(yīng)制定完善的高致病性禽流感監(jiān)測方案，監(jiān)測方案應(yīng)明確監(jiān)測類型、監(jiān)測對(duì)象和范圍、監(jiān)測方法、抽樣原則及數(shù)量等，抽樣數(shù)量應(yīng)根據(jù)設(shè)計(jì)流行率和置信水平進(jìn)行確定。

2.1 監(jiān)測類型

生物安全隔離區(qū)禽流感監(jiān)測主要包括兩種類型：一是評(píng)估養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實(shí)施的最初的強(qiáng)化監(jiān)測，二是維持養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實(shí)施的持續(xù)的日常監(jiān)測。

2.2 監(jiān)測對(duì)象和范圍

生物安全隔離區(qū)包括種禽、商品禽在內(nèi)的所有養(yǎng)殖單元均應(yīng)納入監(jiān)測范圍。生物安全隔離區(qū)設(shè)有緩沖區(qū)的，還應(yīng)對(duì)緩沖區(qū)內(nèi)的易感禽只進(jìn)行禽流感監(jiān)測。

2.3 監(jiān)測方法

監(jiān)測方法包括臨床監(jiān)測、血清學(xué)監(jiān)測和病原學(xué)監(jiān)測。

2.3.1 臨床監(jiān)測

發(fā)現(xiàn)禽類急性死亡，并且出現(xiàn)腳鱗皮下出血，或雞冠出血或發(fā)紺、頭部水腫，或肌肉和其他組織器官廣泛性嚴(yán)重出血就可以懷疑為禽流感。任何人發(fā)現(xiàn)可疑病例，須遵照《動(dòng)物防疫法》要求向當(dāng)?shù)孬F醫(yī)行政主管部門、動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)或動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告。

2.3.2 血清學(xué)監(jiān)測

用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）或血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測血清抗體。如果出現(xiàn)間接ELISA陽性，或H5或H7的HI效價(jià)達(dá)到1∶16以上，須進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查并采樣進(jìn)行病原學(xué)檢測。如生物安全隔離區(qū)實(shí)施禽流感免疫，則不宜采用血清學(xué)監(jiān)測。

2.3.3 病原學(xué)監(jiān)測

用SPF雞胚分離病原或用RT—PCR檢測禽流感病原。如果發(fā)現(xiàn)病原，應(yīng)將樣品送指定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步檢驗(yàn)。

2.4 抽樣原則及數(shù)量

采用隨機(jī)抽樣的原則，簡單隨機(jī)抽樣可采用抽簽法或隨機(jī)數(shù)表法。血清學(xué)監(jiān)測采集禽血清，病原學(xué)監(jiān)測每只禽需同時(shí)采集咽喉棉拭子和泄殖腔棉拭子。

確定抽樣數(shù)量應(yīng)綜合考慮監(jiān)測目的、預(yù)期患病率（設(shè)計(jì)流行率）、置信水平和檢測方法敏感性等因素。

3 監(jiān)測要求

3.1 生物安全隔離區(qū)禽流感監(jiān)測

根據(jù)泰國生物安全隔離區(qū)建設(shè)經(jīng)驗(yàn)[4]，生物安全隔離區(qū)禽流感監(jiān)測分為兩個(gè)階段：一確認(rèn)養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實(shí)施的最初的強(qiáng)化監(jiān)測，二維持養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實(shí)施的持續(xù)日常監(jiān)測。

3.1.1 評(píng)估養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實(shí)施的強(qiáng)化監(jiān)測

在過去至少12個(gè)月內(nèi)對(duì)生物安全隔離區(qū)的每個(gè)養(yǎng)禽場實(shí)施臨床監(jiān)測和實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測相結(jié)合的強(qiáng)化監(jiān)測。

3.1.1.1 臨床監(jiān)測

養(yǎng)禽場管理人員每天應(yīng)進(jìn)行日常臨床監(jiān)視。當(dāng)觀察到任何疑似禽流感臨床癥狀的禽只時(shí)，養(yǎng)禽場管理者應(yīng)按規(guī)定向當(dāng)?shù)孬F醫(yī)機(jī)構(gòu)進(jìn)行報(bào)告。

當(dāng)?shù)孬F醫(yī)機(jī)構(gòu)在接到禽流感疑似疫情報(bào)告后，應(yīng)立即開展流行病學(xué)調(diào)查，并采集5～10只病死禽的適宜樣品送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。

3.1.1.2 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測

在每批禽只出欄前3～5天，由地方獸醫(yī)機(jī)構(gòu)在每個(gè)養(yǎng)禽場的每個(gè)禽舍隨機(jī)抽取15個(gè)泄殖腔棉拭子樣品和15個(gè)血清樣品，送指定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行禽流感檢測。

這種監(jiān)測可以在等于或高于20%患病率，以及在95%置信水平上檢測到禽流感感染。只有所有臨床監(jiān)測和實(shí)驗(yàn)室主動(dòng)監(jiān)測結(jié)果均為禽流感陰性時(shí)，才可認(rèn)可該生物安全隔離區(qū)為無禽流感生物安全隔離區(qū)。

3.1.2 維持養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實(shí)施的日常監(jiān)測

當(dāng)一個(gè)生物安全隔離區(qū)被認(rèn)可為無禽流感狀態(tài)后，地方獸醫(yī)機(jī)構(gòu)和企業(yè)應(yīng)對(duì)養(yǎng)禽場進(jìn)行持續(xù)的日常監(jiān)測，以確信該生物安全隔離區(qū)保持無禽流感狀態(tài)。日常監(jiān)測包括：

3.1.2.1 臨床監(jiān)測

臨床監(jiān)測內(nèi)容同3.1.1。

3.1.2.2 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測

在禽只出欄前3～5天，由地方獸醫(yī)機(jī)構(gòu)在每個(gè)養(yǎng)禽場隨機(jī)抽取5個(gè)禽舍，每個(gè)禽舍隨機(jī)抽取20個(gè)泄殖腔棉拭子樣品和20個(gè)血清樣品，送指定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行禽流感檢測。每出欄兩批禽只進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測。

只有臨床監(jiān)測和實(shí)驗(yàn)室主動(dòng)監(jiān)測結(jié)果均為禽流感陰性時(shí)，才可認(rèn)為該生物安全隔離區(qū)保持無禽流感狀態(tài)。

3.2 緩沖區(qū)禽流感監(jiān)測

地方獸醫(yī)機(jī)構(gòu)應(yīng)與養(yǎng)禽場管理者共同對(duì)緩沖區(qū)內(nèi)的家禽及易感動(dòng)物進(jìn)行禽流感監(jiān)測。

3.2.1 臨床監(jiān)測

臨床監(jiān)測內(nèi)容同3.1.1。

3.2.2 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測

當(dāng)一個(gè)生物安全隔離區(qū)被認(rèn)可為無禽流感狀態(tài)時(shí)，地方獸醫(yī)機(jī)構(gòu)應(yīng)每季度在緩沖區(qū)內(nèi)隨機(jī)抽取5個(gè)鄰近的農(nóng)戶/小規(guī)模飼養(yǎng)場，每個(gè)農(nóng)戶/小規(guī)模飼養(yǎng)場隨機(jī)抽取20只禽的泄殖腔棉拭子樣品和血清樣品（不足20只的全部抽取），送指定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行禽流感檢測。

3.3 監(jiān)測結(jié)果的處理

出現(xiàn)疑似禽流感病例，或經(jīng)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)為禽流感病例時(shí)，應(yīng)立即按《高致病性禽流感疫情處置技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，實(shí)施禽流感疫情處置。

4 說明

“證明無疫靠監(jiān)測”。疫病監(jiān)測是及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫病風(fēng)險(xiǎn)，維持生物安全隔離區(qū)無疫狀況的重要手段。生物安全隔離區(qū)及緩沖區(qū)監(jiān)測工作是生物安全隔離區(qū)建設(shè)管理的一項(xiàng)重要內(nèi)容。開展疫病監(jiān)測，需要根據(jù)當(dāng)?shù)匾?guī)定動(dòng)物疫病的流行病學(xué)特點(diǎn)和生物安全隔離區(qū)及周邊地區(qū)的風(fēng)險(xiǎn)因素，制定監(jiān)測方案，明確監(jiān)測范圍、監(jiān)測方法、監(jiān)測頻率、抽樣原則、樣本數(shù)量、檢測方法等。本文討論的生物安全隔離區(qū)無高致病性禽流感監(jiān)測方法，是根據(jù)OIE《動(dòng)物衛(wèi)生法典》關(guān)于禽流感監(jiān)測總則的有關(guān)要求提出的，該方法也征求了OIE有關(guān)專家的意見，但不作為國家評(píng)估的正式評(píng)估依據(jù)，僅對(duì)生物安全隔離區(qū)建設(shè)企業(yè)提供參考。

生物安全隔離區(qū)建設(shè)需要地方獸醫(yī)部門和企業(yè)共同進(jìn)行，但是如何開展生物安全隔離區(qū)及緩沖區(qū)的監(jiān)測工作，尤其是如何確定監(jiān)測的實(shí)施主體，目前還存在一定變數(shù)。有專家認(rèn)為生物安全隔離區(qū)及緩沖區(qū)的監(jiān)測工作應(yīng)納入到國家監(jiān)測計(jì)劃中，由政府統(tǒng)一組織對(duì)生物安全隔離區(qū)的監(jiān)測工作，企業(yè)配合政府承擔(dān)部分抽樣工作。這樣的好處是：一方面可以獲得較為可靠的監(jiān)測數(shù)據(jù)，便于準(zhǔn)確把握生物安全隔離區(qū)內(nèi)的動(dòng)物疫病狀況；另一方面是獲取的監(jiān)測數(shù)據(jù)屬于官方數(shù)據(jù)，更容易獲得外界認(rèn)可，具有較強(qiáng)的說服力。另外一種觀點(diǎn)認(rèn)為，企業(yè)是生物安全隔離區(qū)建設(shè)的主體，也是最直接的受益者，所以企業(yè)應(yīng)作為監(jiān)測工作的實(shí)施主體。但是，不管如何，企業(yè)和獸醫(yī)機(jī)構(gòu)在生物安全隔離區(qū)建設(shè)管理中都發(fā)揮著重要作用，二者應(yīng)相互配合，充分發(fā)揮各自優(yōu)勢，共同做好生物安全隔離區(qū)監(jiān)測工作。

[1] 劉俊輝，張衍海，范欽磊，等.國內(nèi)外生物安全隔離區(qū)建設(shè)概況[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（12）：178-182.

[2] 陳國勝. 關(guān)于生物安全隔離區(qū)建設(shè)試點(diǎn)的幾點(diǎn)思考[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2009，26（7）：1-3.

[3] 劉俊輝，張衍海，鄭增忍，等.我國生物安全隔離區(qū)建設(shè)調(diào)查研究[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2013，30（8）：14-18.

[4] 陳萍，黃保續(xù). 家禽生產(chǎn)中的風(fēng)險(xiǎn)減輕方法——生物安全隔離區(qū)[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2011，28（8）：4-9.

S851.33文獻(xiàn)識(shí)別碼：B

：1005-944X（2014）04-0056-03