/李金海（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院豬病研究中心，四川雅安 625014），李興玉，曹三杰…//中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào).-2013，29（4）.-380～384，407

目的建立一種能快速、高效、敏感、特異地檢測(cè)口蹄疫病毒（FMDV）的一步法熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法。方法根據(jù)FMDV聚合酶3D基因序列比對(duì)結(jié)果，設(shè)計(jì)特異性引物和MGB探針；通過(guò)優(yōu)化，得到最佳反應(yīng)體系和反應(yīng)條件；分別以質(zhì)粒和病毒RNA為模板，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線；并進(jìn)行特異性、敏感性、重復(fù)性試驗(yàn)。結(jié)果該方法能特異性檢測(cè)A型、O型、Asia 1型FMDV，而對(duì)豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒、豬細(xì)小病毒、豬狂犬病毒、豬乙型腦炎等病原檢測(cè)結(jié)果均為陰性；構(gòu)建的熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct值與模板濃度呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)質(zhì)粒的敏感性可達(dá)83.4copies/μL，檢測(cè)病毒RNA的敏感性可達(dá)7.1fg/μL，比多重RT-PCR敏感性高10倍；對(duì)4份樣品進(jìn)行5次批內(nèi)和批間重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果變異系數(shù)均小于2%。結(jié)論建立的口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好，可用于口蹄疫臨床樣品診斷、流行病學(xué)調(diào)查和畜產(chǎn)品安全監(jiān)測(cè)。