趙延峰，董稚明，董宏華，陶紅宇

（1.石家莊星源醫(yī)療美容醫(yī)院河北石家莊050000；2河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四人民醫(yī)院病理科河北石家莊050000）

不同取材及處理方法對(duì)脂肪細(xì)胞影響的研究

趙延峰1，董稚明2，董宏華1，陶紅宇1

（1.石家莊星源醫(yī)療美容醫(yī)院河北石家莊050000；2河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四人民醫(yī)院病理科河北石家莊050000）

目的：探討不同取材及處理方法對(duì)脂肪細(xì)胞的影響。方法：隨機(jī)選取臨床行脂肪移植的就醫(yī)者10名，在同一受術(shù)者雙側(cè)大腿前內(nèi)側(cè)分別用20ml注射器及吸脂機(jī)（吸脂負(fù)壓60kPa）抽吸脂肪，吸脂針頭直徑均為2.5mm，將取出的脂肪經(jīng)過(guò)靜置及不同轉(zhuǎn)速和不同時(shí)間的離心處理，采用完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)及組織學(xué)觀察脂肪細(xì)胞的形態(tài)。結(jié)果：應(yīng)用注射器法和吸脂機(jī)法吸出的脂肪經(jīng)靜置后，兩組在完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，組織學(xué)也顯示兩組的脂肪細(xì)胞細(xì)胞壁均較完整；對(duì)比不同轉(zhuǎn)速（1000轉(zhuǎn)2min和3000轉(zhuǎn)2min）完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)情況，分別為77%和74.5%，兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；對(duì)比不同離心時(shí)間（2000轉(zhuǎn)1min和2000轉(zhuǎn)3min），兩組完整脂肪細(xì)胞比率分別為71%和68.7%，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組織學(xué)上看到，高的離心轉(zhuǎn)速和長(zhǎng)的離心時(shí)間相對(duì)于低的轉(zhuǎn)速及短的離心時(shí)間而言，在脂肪細(xì)胞擠壓變形及細(xì)胞壁受壓情況要更加明顯一些。離心后與離心前完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但組織學(xué)切片上仍可觀察到離心后較離心前脂肪細(xì)胞有不同程度的變形。結(jié)論：在一定離心轉(zhuǎn)速及離心時(shí)間范圍內(nèi)，離心與否以及不同轉(zhuǎn)速與時(shí)間在脂肪細(xì)胞完整率上無(wú)明顯差別，離心與靜置相比以及高的離心轉(zhuǎn)速和長(zhǎng)的離心時(shí)間較低的離心轉(zhuǎn)速和短的離心時(shí)間相比，脂肪細(xì)胞受壓變形更明顯一些。

脂肪移植；脂肪細(xì)胞；組織學(xué)

自體脂肪移植是目前臨床上應(yīng)用比較廣泛的一項(xiàng)技術(shù)，如用于隆乳、額顳部及面頰部填充、各部位凹陷畸形的填充矯正等等[1,7]。自體脂肪移植在臨床應(yīng)用中與效果最密切的就是移植脂肪成活的多少，而影響成活率的關(guān)鍵之一就是脂肪細(xì)胞的提取和處理過(guò)程，目前爭(zhēng)議的焦點(diǎn)多集中在注射器手動(dòng)吸脂還是吸脂機(jī)電動(dòng)吸脂以及過(guò)濾離心的應(yīng)用等，對(duì)此學(xué)者們各自發(fā)表了不同的看法和觀點(diǎn)[2-10]，但均缺乏系統(tǒng)詳盡的研究，為進(jìn)一步明確這些問(wèn)題筆者進(jìn)行了以下研究。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象：選取臨床行自體脂肪移植的就醫(yī)者10例，均為女性，年齡22～42歲，平均28歲，其中自體脂肪隆乳5例，豐臀1例，額顳部填充4例。脂肪均取自大腿。

1.2 方法：將就醫(yī)者依手術(shù)時(shí)間標(biāo)記為1～10號(hào)，奇數(shù)號(hào)左側(cè)用注射器手動(dòng)抽吸（20ml抽吸前預(yù)抽5ml鹽水），右側(cè)采用電動(dòng)吸脂機(jī)抽吸（負(fù)壓60kPa）；偶數(shù)號(hào)者反之。術(shù)前注射同樣配比的腫脹液（500ml鹽水+2%利多卡因15ml+0.5ml腎上腺素），在同一受術(shù)者雙側(cè)大腿前內(nèi)側(cè)分別用注射器及吸脂機(jī)抽脂，吸脂針直徑均為2.5mm。分別靜置10min，對(duì)比注射器和吸脂法脂肪細(xì)胞的情況，然后進(jìn)行離心，注射器法分別用1 000轉(zhuǎn)2min及3 000轉(zhuǎn)2min進(jìn)行離心以比較不同轉(zhuǎn)速的影響，吸脂機(jī)抽吸的脂肪靜置后分別用2 000轉(zhuǎn)1min和2 000轉(zhuǎn)3min進(jìn)行離心以比較不同離心時(shí)間的影響，以上分別標(biāo)記為A～F組（見(jiàn)圖1），脂肪細(xì)胞提取和以上處理均由同一術(shù)者完成。然后分別計(jì)算每組的平均完整脂肪細(xì)胞比率并對(duì)每組的脂肪細(xì)胞進(jìn)行組織學(xué)觀察。組織學(xué)觀察由同一病理醫(yī)師完成。對(duì)完整脂肪細(xì)胞比率采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對(duì)檢驗(yàn)。

1.3 完整脂肪細(xì)胞比率的計(jì)算方法及實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 完整脂肪細(xì)胞比率的計(jì)算方法：顯微鏡下選取脂肪組織完整的部位，在高倍鏡（×400）下計(jì)數(shù)500個(gè)脂肪細(xì)胞，以完整脂肪細(xì)胞數(shù)/總脂肪細(xì)胞數(shù)×100%得出完整脂肪細(xì)胞百分率。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)步驟：①應(yīng)用不同方法采集的脂肪組織經(jīng)OTC包埋，連續(xù)5um冰凍切片；②冰凍切片經(jīng)吹風(fēng)機(jī)吹干，雙蒸水浸泡2min×2；③蘇木素染色1min，雙蒸水洗1 min×2，鹽酸酒精分化，雙蒸水洗1 min×2；④伊紅染色30s，梯度酒精脫水；⑤樹膠封片，顯微鏡觀察。

圖1實(shí)驗(yàn)方法組織結(jié)構(gòu)圖

2 結(jié)果

2.1 各組完整脂肪細(xì)胞百分率見(jiàn)表1。

2.2脂肪細(xì)胞組織學(xué)觀察：A組：細(xì)胞壁完整，有血管、纖維，發(fā)育尚未成熟的脂肪細(xì)胞，脂肪細(xì)胞無(wú)變形（圖1）；B組：脂肪細(xì)胞基本完好，部分細(xì)胞壁受擠壓有破裂（圖中右側(cè)）（圖2）；C組：部分細(xì)胞壁受擠壓有破裂，呈現(xiàn)融合（圖3）；D組：細(xì)胞壁完整，脂肪細(xì)胞無(wú)明顯變形及破裂（圖4）；E組：細(xì)胞形態(tài)雖然有擠壓、變形，但基本完好（圖5）；F組：細(xì)胞有較明顯的受擠壓，呈現(xiàn)細(xì)胞影（右下方呈現(xiàn)破潰）（圖6）。

圖1細(xì)胞壁完整，有血管、纖維，發(fā)育尚未成熟的脂肪細(xì)胞，脂肪細(xì)胞無(wú)變形；圖2脂肪細(xì)胞基本完好，部分細(xì)胞壁受擠壓有破裂（圖中右側(cè)）；圖3部分細(xì)胞壁受擠壓有破裂，呈現(xiàn)融合；圖4：細(xì)胞壁較完整，脂肪細(xì)胞無(wú)明顯變形及破裂；圖5細(xì)胞形態(tài)雖然有擠壓、變形，但基本完好；圖6細(xì)胞有較明顯的受擠壓，呈現(xiàn)細(xì)胞影（右下方呈現(xiàn)破潰）。

3 討論

整形美容外科臨床中自體脂肪移植應(yīng)用范圍廣泛，但脂肪移植后的吸收是一個(gè)影響術(shù)后效果的決定因素，移植后的吸收很大程度上取決于提取過(guò)程脂肪的破壞情況，對(duì)于提取和處理方法目前探討較多的是注射器和吸脂機(jī)吸脂的不同以及離心與否和離心速度及離心時(shí)間的不同對(duì)脂肪細(xì)胞的影響[2-6]。通過(guò)筆者本次研究，注射器法吸出脂肪靜置后（A組）和吸脂機(jī)吸出脂肪靜置后（D組）兩組在完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，組織學(xué)也顯示兩組的脂肪細(xì)胞細(xì)胞壁均較完整，脂肪細(xì)胞無(wú)明顯變形及破裂（圖1、圖4）。進(jìn)一步研究離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間對(duì)脂肪細(xì)胞完整率的影響情況，對(duì)比B（1 000轉(zhuǎn)2min）和C組（3 000轉(zhuǎn)2min）完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)情況，B組為77%，C組為74.5，兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示離心轉(zhuǎn)速對(duì)脂肪細(xì)胞完整性無(wú)明顯影響（轉(zhuǎn)速過(guò)大的情況除外），然后對(duì)比E組（2 000轉(zhuǎn)1min）和F組（2 000轉(zhuǎn)3min），E組為71%，F(xiàn)組為68.7%，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示離心時(shí)間對(duì)完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯影響。但同時(shí)在組織學(xué)上筆者看到，雖然完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯差異，但高的離心轉(zhuǎn)速（C組）和長(zhǎng)的離心時(shí)間（F組）較低的轉(zhuǎn)速（D組）及短的離心時(shí)間（E組）在脂肪細(xì)胞擠壓變形上還是有組織學(xué)差異的，前者情況脂肪細(xì)胞細(xì)胞壁受壓情況要更加明顯一些（圖2～3；圖5～6）。同樣離心后與離心前完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但組織學(xué)切片上仍可觀察到離心后較離心前脂肪細(xì)胞有不同程度的變形（圖2、3Vs圖1；圖5、6Vs圖4）。而對(duì)于變形但細(xì)胞壁尚完整的脂肪細(xì)胞在移植后的成活是否會(huì)明顯低于無(wú)變形的脂肪細(xì)胞尚需進(jìn)一步研究。

表1 10名病例完整脂肪細(xì)胞百分率（%）

張新合等[2]曾對(duì)比減碎法、注射器法及吸管法三種方法對(duì)脂肪細(xì)胞的損傷程度進(jìn)行了研究，得出剪碎法對(duì)脂肪細(xì)胞損傷率為8.6%±1.8%；注射器法為15.7%±2.4%；吸管法為76.4%±8.7%，而得出結(jié)論剪碎法對(duì)脂肪細(xì)胞損傷程度最輕，注射器法居中，吸管法損傷最重。但他們用吸管法吸脂的吸引頭直徑8mm，負(fù)壓一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓（相當(dāng)于101kPa），而筆者采用的吸引頭直徑是2.5mm，負(fù)壓是60kPa，吸力過(guò)大筆者認(rèn)為是實(shí)驗(yàn)中造成脂肪破壞過(guò)多的重要原因，而注射器法的研究中，他們應(yīng)用的是22號(hào)鈍頭抽吸針和20ml注射器，與筆者應(yīng)用的2.5mm直徑抽吸針和注射器大小基本一致，故得出的注射器法的脂肪細(xì)胞破壞率基本一致。根據(jù)研究結(jié)果，筆者認(rèn)為只要在低負(fù)壓和同樣吸脂管徑的情況下，注射器法和吸脂機(jī)抽吸對(duì)脂肪細(xì)胞的完整性無(wú)明顯影響。臨床上可根據(jù)具體情況選用，對(duì)于只進(jìn)行面部填充等需要小量脂肪時(shí)可采用注射器抽吸，根據(jù)筆實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者推薦還是進(jìn)行離心，這樣可以使水和油滴進(jìn)一步分離，提高有效脂肪細(xì)胞數(shù)量同時(shí)減少油滴注入后栓塞等嚴(yán)重并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，離心速度和時(shí)間筆者推薦3 000轉(zhuǎn)3min。對(duì)于如自體脂肪豐胸需要大量脂肪時(shí)筆者推薦還是吸脂機(jī)低負(fù)壓吸引。

本次試驗(yàn)中筆者還看到個(gè)別病例（病例3，見(jiàn)表1紅色斜體）完整脂肪細(xì)胞比例在各個(gè)處理環(huán)節(jié)都比較少，而部分病例（病例10，見(jiàn)表1綠色斜體）則情況相反，提示在相同提取和處理?xiàng)l件的情況下，脂肪細(xì)胞完整性還因個(gè)體差異而有明顯不同，鑒于此，術(shù)前與就醫(yī)者溝通時(shí)應(yīng)予以提示。

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編輯/張惠娟

Rea rch o f the ad ipoc yte inju ries o f d iffe ren t ha rvesting and p rocessing m e thods.

ZHAO Yan-feng1,DONG Zhi-m ing2,DONG Hong-hua1,TAO Hong-yu1
（1.Shijiazhuang Xingyuan Cosm etic Hospital,Shijiazhuang,Shijiazhuang 050000,Hebei,China; 2.Department of Pathology,The Fourth Peop le's Hosp ital Affiliated to Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000,China）

Ob jective To research the influence to ad ipocyte of different obtain and p rocessing m ethod.M ethods We have choose 10 patients that undergo fat transp lantition,liposuction was done w ith syringe(20m l)and fat attac ting machine(60kPa negative p ressure)from b ilateral inner thighrespec tively,diameter of liposuc tion need le was 2.5mm.Fat that gained was standing and then centrifugation by different rpm and time.The fat cells were evaluated underm icroscope and comp lete fat cell count.Resu lts Ratio of com p lete fat cellwas sim ilar between syringe g roup and fat attacting m achine group.To d ifferent centrifugalspeed(1000rpm and 3000rpm),ratio of comp lete fat cellwas 77%and 74.5%respec tively and has no statistical differences.To d ifferent centrifugal time(1m in and 3m in),ratio of comp lete fat cellwas 71%and 68.7%respectively and has no statisticald ifferences.But by histolog ical observe,higher centrifugal speed and longer centrifugal tim e has m ore obvious deformation of ad ipocyte than lower centrifugalspeed and short centrifugal time.Ratio of comp lete fat cell has no statistical differences between groups that before and after the centrifugal.Conclusion Centrifugal or not and different speed and tim e that within a certain range has no obvious difference on the com p lete rate in fat cells.higher centrifugal speed and longer centrifugal time has more obvious deformation of adipocyte than lower centrifugalspeed and short centrifugal time.

fat transp lantation;adipocye;histology

Q813.1

A

1008-6455（2014）22-1896-04

2014-09-16

2014-10-29