王煜恒，劉文斌，王會(huì)聰，陳軍，駱桂蘭，邢軍

(1.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院 畜牧獸醫(yī)系，江蘇 鎮(zhèn)江212400;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院 江蘇省水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210095)

魚(yú)類(lèi)的必需脂肪酸(essential fatty acid，EFA)是一些不能由魚(yú)體自身合成而只能由食物提供的滿(mǎn)足其正常生長(zhǎng)發(fā)育及維持細(xì)胞組織功能所必需的多不飽和脂肪酸。必需脂肪酸缺乏或者相互之間組成不平衡，均會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)速度及飼料轉(zhuǎn)化率下降，肌肉中水分和肝臟中脂肪含量顯著增加，并引發(fā)多種病理缺乏癥［1-3］。淡水魚(yú)和海水魚(yú)在EFA需求上存在較大差異，淡水魚(yú)能利用18 碳脂肪酸合成20 碳或22 碳脂肪酸，因此，它的EFA 主要是C18:2n-6(linoleic acid，LA)和C18:3n-3(α- linolenic acid，ALA)，而海水魚(yú)主要對(duì)高不飽和脂肪酸如C20:5n-3(EPA)和C22:6n-3(DHA)需求比較大［4］。

以往研究EFA 需要量的試驗(yàn)都采用單因素設(shè)計(jì)，即在飽和或單不飽和脂肪酸的基礎(chǔ)上添加單一的EFA，最近有學(xué)者開(kāi)始通過(guò)在脂肪中添加兩種或更多的EFA 來(lái)研究各種EFA 之間的交互作用。Smith等［5］通過(guò)4 ×4 雙因子試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，砂鱸Bidyanus bidyanus 對(duì)LA 的最適需要量為1.7 g/kg;斑節(jié)對(duì)蝦Penaeus monodon 飼料中n -3和n -6 系列EFA 的比例為2.5 ～1.0 時(shí)，其生長(zhǎng)效果最佳［6］;黃顙魚(yú)Pelteobagrus fulvidraco日糧中ALA 與LA 的比例為1.17和2.12 時(shí)，其增重率最高且飼料系數(shù)最低［7］。但EFA 之間交互作用的機(jī)理目前尚不清楚，推測(cè)可能與其改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，或者其變構(gòu)效應(yīng)對(duì)脂肪酸去飽和酶和競(jìng)爭(zhēng)性底物的影響有關(guān)［8］。

團(tuán)頭魴Megalobrama amblycephala是中國(guó)主要的淡水養(yǎng)殖品種之一。目前關(guān)于團(tuán)頭魴對(duì)EFA 需要量的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，劉瑋等［9］在不同脂肪源對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)影響的研究中發(fā)現(xiàn)，團(tuán)頭魴的EFA 應(yīng)同時(shí)包含LA和ALA，且對(duì)LA 的需求要比對(duì)ALA 更大。Takeuchi等［10］認(rèn)為，鯉Cyprinus carpio 的EFA 應(yīng)包括1%的LA和1%的ALA，草魚(yú)Ctenopharyngodon idella［11］的EFA 與 鯉 相 似，為0.5% ～1.0%的ALA和1.0%的LA。鑒于團(tuán)頭魴同屬鯉科魚(yú)類(lèi)，對(duì)EFA 的需要量應(yīng)該比較相近，因此，本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上［12］，通過(guò)在含35%蛋白質(zhì)和7%脂肪的基礎(chǔ)日糧中添加LA(3 個(gè)水平)和ALA(3 個(gè)水平)，探討LA和ALA 的不同含量對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)、體成分和消化酶活性的影響，從而確定團(tuán)頭魴幼魚(yú)對(duì)這兩種EFA 的最適需要量，以期為團(tuán)頭魴的脂肪酸需求研究和飼料油脂的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)和生態(tài)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)用魚(yú)為購(gòu)自上海松江浦南水產(chǎn)良種場(chǎng)的團(tuán)頭魴“浦江1 號(hào)”夏花。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼料 試驗(yàn)設(shè)3 個(gè)LA 水平(0.5%、1.0%、1.5%，占飼料質(zhì)量比)和3個(gè)ALA 水平(0.5%、0.9%、1.3%)，采用3 ×3雙因子設(shè)計(jì)方法配制成9種飼料，記為L(zhǎng)0.5A0.5、L0.5A0.9、L0.5A1.3、L1.0A0.5、L1.0A0.9、L1.0A1.3、L1.5A0.5、L1.5A0.9、L1.5A1.3，分別投喂9 組魚(yú)，每組設(shè)4 個(gè)重復(fù)。以酪蛋白和明膠為主要蛋白源，玉米淀粉為糖源，羧甲基纖維素為黏合劑，并填充微晶纖維素、礦物質(zhì)等制成等氮等能的基礎(chǔ)日糧?；A(chǔ)日糧配方(均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%)為:酪蛋白32.00、明膠8.00、玉米淀粉30.00、微晶纖維素15.50、羧甲基纖維素3.00、預(yù)混料1.00、磷酸二氫鈣1.90、沸石粉2.00、抗氧化劑0.10、氯化鈉0.50、油脂6.00。以魚(yú)油、豆油、花生油、亞麻油、油酸和棕櫚酸為脂肪源，通過(guò)幾種油脂的不同配比來(lái)調(diào)節(jié)日糧中LA和ALA的水平。飼料營(yíng)養(yǎng)組成及油脂配制見(jiàn)表1，飼料脂肪酸組成見(jiàn)表2。將各組飼料逐級(jí)混合均勻，再加水拌勻，用QRLS-150Ⅱ型電動(dòng)絞肉機(jī)制成顆粒，成型后先進(jìn)行破碎再經(jīng)20 ～40 目(粒徑為380 ～830 μm)篩兩次篩分，25 ℃下風(fēng)干，置于冰箱(-20 ℃)中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)前先于試驗(yàn)環(huán)境下投喂商品料暫養(yǎng)，馴化10 d 后，選取體格健康、無(wú)畸形體質(zhì)量為(0.80 ±0.02)g 的團(tuán)頭魴魚(yú)苗720 尾，隨機(jī)投放36 個(gè)水族箱(直徑為52 cm，水深為50 cm)中，每箱20 尾。試驗(yàn)期間，每3天換水一次，每次換水量為總水量的30%。每天7:00、12:00、17:00 投飼，日投飼率為魚(yú)體質(zhì)量的3% ～5%，投喂之前吸出糞便，飼料投喂持續(xù)20 min，投喂結(jié)束后30 min，撈出殘餌烘干稱(chēng)重。試驗(yàn)周期為56 d。試驗(yàn)用水為曝氣自來(lái)水，水溫為(27 ±3)℃，pH 為6.8 ～8.0，溶解氧＞5 mg/L。

1.2.3 指標(biāo)的測(cè)定與計(jì)算

(1)生長(zhǎng)性能與營(yíng)養(yǎng)成分。試驗(yàn)魚(yú)養(yǎng)殖56 d后，停飼24 h，測(cè)定總質(zhì)量，計(jì)算增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率，并隨機(jī)從每箱取6尾魚(yú)測(cè)量體長(zhǎng)、體質(zhì)量，解剖取其肝胰臟及全部?jī)?nèi)臟稱(chēng)重，計(jì)算肥滿(mǎn)度、肝胰臟指數(shù)和臟體指數(shù)。同時(shí)取腸道，并將剩余的所有幼魚(yú)用4 ℃預(yù)冷的鹽度為8.6 的生理鹽水沖洗，然后用濾紙吸干水分，于-20 ℃下保存?zhèn)溆?。參照AOAC［13］的方法測(cè)定飼料和魚(yú)體中的水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量，干物質(zhì)烘干(105 ℃)至恒重，通過(guò)失重法測(cè)定;用凱氏定氮儀(2300Kjeltec Analyzer Unit，F(xiàn)OSS TECATOR，Sweden)測(cè)定粗蛋白含量;用馬福爐(550 ℃)燃燒失重法測(cè)定灰分含量;參照Folch等［14］的方法測(cè)定粗脂肪含量。每個(gè)樣品至少測(cè)定3 個(gè)平行。增重率(WG)、特定生長(zhǎng)率(SGR)、飼料系數(shù)(FCR)、蛋白質(zhì)效率(PER)、肥滿(mǎn)度(CF)、肝體指數(shù)(HSI)、臟體指數(shù)(VSI)的計(jì)算公式為

表1 飼料營(yíng)養(yǎng)組成及油脂配制Tab.1 Approximate composition of the experimental diets and preparation of the dietary fat

(2)消化酶。將腸道解凍之后準(zhǔn)確稱(chēng)重，使用去離子水按質(zhì)量比為1∶ 9 進(jìn)行冰浴勻漿，以3000 r/min 離心10 min，收集上清液標(biāo)號(hào)分裝待測(cè)，于4 ℃下保存，24 h 內(nèi)測(cè)定完畢。采用福林-酚法測(cè)定總蛋白酶［15］。采用南京建成公司的試劑盒測(cè)定各種消化酶活性。蛋白酶活力單位定義為:在27 ℃條件下，每分鐘水解酪素產(chǎn)生相當(dāng)于1 μg酪氨酸所需的酶量為1 個(gè)酶活力單位。脂肪酶活力單位定義為:在27 ℃條件下，每克組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol 底物為1 個(gè)酶活力單位。淀粉酶活力單位定義為:每毫克蛋白在27 ℃下與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1 個(gè)酶活力單位。

(3)脂肪酸。飼料樣品中脂肪的提取參照Folch等［14］的方法。油脂的皂化及甲酯化方法參照Christie［16］的方法，略有改進(jìn)。樣品皂化甲酯化后，用氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。分析儀器為島津GCMS-QP2010 Plus 氣質(zhì)聯(lián)用儀，色譜柱為HP -5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm);色譜柱升溫程序?yàn)槌鯗?0 ℃，以10 ℃/min 升至150 ℃并保持3 min，以3 ℃/min 升至230 ℃保持3 min;進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為10∶ 1，進(jìn)樣量為1 μL，載氣為高純氮?dú)?，氣流?.3 mL/min。檢索NIST質(zhì)譜圖庫(kù)，比較樣品質(zhì)譜圖與圖庫(kù)中標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖，即可確定樣品中脂肪酸種類(lèi)，采用面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸的相對(duì)含量。

表2 各組試驗(yàn)飼料脂肪酸的組成Tab.2 The fatty acid composition of the experimental diets w/%

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤(means ±S.E.)表示。采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)。當(dāng)差異顯著時(shí)，以飼料LA和ALA 添加水平為主要影響因子，進(jìn)行雙因素方差分析，采用Duncan 法進(jìn)行組間多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 LA和ALA 含量對(duì)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

養(yǎng)殖試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)組幼魚(yú)肉眼未發(fā)現(xiàn)組織病變。從表3可見(jiàn):飼料中LA和ALA 含量對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)WG和SGR 的影響極顯著(P＜0.01);當(dāng)飼料中LA 的添加量為0.5%時(shí)，幼魚(yú)的WG、SGR和PER 均顯著低于其他兩個(gè)LA 組(P＜0.05);而當(dāng)ALA 添加量為0.9%時(shí)，幼魚(yú)的WG、SGR和PER 均顯著高于1.3%組(P＜0.05)，但與0.5%組無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)。同時(shí)發(fā)現(xiàn):LA 與ALA 之間存在交互作用，當(dāng)飼料中LA 含量為1.0%且ALA 的含量為0.9%時(shí)，其WG和SGR 均達(dá) 到 最 高，顯 著 高 于L0.5A0.5、L0.5A1.3和L1.5A1.3 組(P＜0.05)，但與其他組無(wú)顯著性差異(P ＞0.05);L1.0A0.5 組PER 為各組最高且與L1.0A0.9、L1.5A0.5和L1.5A0.9 組無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)，但顯著高于其他組(P＜0.05)。觀察FCR 發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中ALA 為1.3%時(shí)，顯著高于其他兩個(gè)ALA 組(P＜0.05)，而LA 添加量對(duì)其無(wú)顯著影響(P ＞0.05)。各試驗(yàn)組存活率無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)。通過(guò)二次回歸分析得到增重率(y)與LA(x)的關(guān)系式為y=-96.043x2+208.88x+265.3(R2=0.3337)，當(dāng)增重率最高時(shí)LA 為1.09%，其回歸曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。同時(shí)建立增重率(y)與ALA(x)的關(guān)系式為y=-154.77x2+260.08+269.93(R2=0.3293)，當(dāng)增重率最高時(shí)ALA 為0.84%，其回歸曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

表3 飼料中亞油酸和亞麻酸含量對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響Tab.3 Effect of dietary linoleic acid and linolenic acid levels on growth performance in juvenile blunt snout bream

2.2 LA和ALA 含量對(duì)幼魚(yú)形體指標(biāo)的影響

從表4可見(jiàn):飼料中LA和ALA 含量對(duì)團(tuán)頭魴HSI和VSI 無(wú)顯著影響(P ＞0.05)，但隨著飼料中LA和ALA 含量的增加HSI 均呈下降趨勢(shì)，L0.5A0.5 組的HSI 達(dá)到2.80，為各組最高;LA為1.0%組的VSI 略小于其他兩個(gè)LA 組，而ALA為1.3%組的VSI 略高于其他兩個(gè)ALA 組;團(tuán)頭魴幼魚(yú)的CF 受LA 的影響顯著(P＜0.05)，LA 為1.0%組的CF 顯著高于其他兩個(gè)LA 組(P＜0.05)，ALA 對(duì)CF 影響不顯著(P ＞0.05)，但0.9%組的CF 略高于其他兩個(gè)ALA 組。

圖1 飼料中亞油酸和亞麻酸含量與增重率的關(guān)系Fig.1 Effect of dietary LA，and ALA levels on weitght gain of blunt snout bream

表4 飼料中亞油酸和亞麻酸含量對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)形體指標(biāo)的影響Tab.4 Effect of dietary LA and ALA levels on morphometric index of juvenile blunt snout bream

2.3 LA和ALA 含量對(duì)幼魚(yú)體組成的影響

從表5可見(jiàn)，飼料中LA和ALA 對(duì)全魚(yú)的粗蛋白質(zhì)與粗灰分含量均無(wú)顯著影響(P ＞0.05)。LA為1.0%組的全魚(yú)粗蛋白質(zhì)含量略高于其他兩個(gè)LA 組，但粗蛋白質(zhì)含量隨ALA 添加量的增加呈下降趨勢(shì);LA 為0.5%組的全魚(yú)水分含量顯著高于其他兩個(gè)LA 組(P＜0.05);LA 為0.5%組的全魚(yú)粗脂肪含量顯著低于其他兩個(gè)LA 組(P＜0.05);ALA 對(duì)全魚(yú)水分和粗脂肪含量均無(wú)顯著影響(P ＞0.05);LA和ALA 均對(duì)肝胰臟脂肪含量的影響顯著(P＜0.05)，LA 為0.5%組顯著高于其他兩個(gè)LA 組(P＜0.05)，ALA 為0.9%組顯著低于其他兩個(gè)ALA 組(P＜0.05)，但LA和ALA對(duì)肝胰臟脂肪含量不存在交互作用，L0.5A0.5 組的肝胰臟脂肪含量為各組最高。

2.4 LA和ALA 含量對(duì)幼魚(yú)消化酶活性的影響

從表6可見(jiàn):飼料中LA和ALA 對(duì)團(tuán)頭魴腸道淀粉酶活性無(wú)顯著影響(P ＞0.05);LA 為1.0%組的腸道脂肪酶活性顯著高于LA 為0.5%組(P＜0.05)，但與1.5%組無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)，ALA 為1.3%組顯著低于其他兩個(gè)ALA 組(P＜0.05)，此外兩種EFA 對(duì)脂肪酶存在交互作用，L0.5A0.5和L1.5A1.3 組顯著低于L1.0A0.5和L1.0A0.9 組(P＜0.05)，其他組之間無(wú)顯著性差異(P ＞0.05);LA 為0.5%組的腸道蛋白酶活性顯著低于其他兩個(gè)LA 組(P＜0.05)，ALA 為1.3%組的蛋白酶活性顯著低于其他兩個(gè)ALA 組(P＜0.05)。

3 討論

本試驗(yàn)中通過(guò)在等氮等能的純合飼料基礎(chǔ)上添加不同水平的LA和ALA，在各組飼料中提供等量的EPA和DHA 來(lái)研究團(tuán)頭魴幼魚(yú)對(duì)這兩種脂肪酸的需求量，由于飼料中EFA 過(guò)量或缺少時(shí)都會(huì)對(duì)魚(yú)類(lèi)的增重率產(chǎn)生影響［17］，所以本試驗(yàn)中以團(tuán)頭魴幼魚(yú)的增重率作為主要評(píng)判指標(biāo)來(lái)研究幼魚(yú)對(duì)這兩種脂肪酸的適宜需求量。結(jié)果表明:增重率隨LA 含量的增加而逐漸升高，當(dāng)LA 添加量為1.0%時(shí)達(dá)到最高，而LA 增加到1.5%時(shí)增重率有所下降但不顯著;當(dāng)ALA 添加量為0.5%和0.9%時(shí)，增重率無(wú)顯著差異，但當(dāng)ALA 達(dá)到1.3%時(shí)對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)有一定的阻礙作用。Glencross等［18］研究表明:斑節(jié)對(duì)蝦的增重率隨飼料中ALA 含量的增加而升高，當(dāng)ALA 達(dá)到2.6%時(shí)其增重率最高，再增加時(shí)就對(duì)其生長(zhǎng)產(chǎn)生消極影響;LA 對(duì)生長(zhǎng)雖有促進(jìn)作用，但過(guò)量時(shí)對(duì)生長(zhǎng)的抑制作用可能與ALA的交互作用有關(guān)。Smith等［5］研究砂鱸對(duì)LA和ALA 的需要量時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨LA 含量的增加其增重率升高，最適添加量為1.8%，當(dāng)添加量為2.3%時(shí)增重率明顯下降，但ALA 對(duì)增重率影響不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究相似，團(tuán)頭魴幼魚(yú)同樣對(duì)LA和ALA 的需要量有一個(gè)適宜范圍，添加量過(guò)多或過(guò)少都會(huì)影響其生長(zhǎng)，參照Z(yǔ)uridah等［19］的方法進(jìn)行二次回歸分析，得出當(dāng)LA 為1.09%和ALA為0.84%時(shí)可使增重率分別達(dá)到最高。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，LA和ALA 對(duì)增重率的影響存在一定的交互作用，Glencross等［18］認(rèn)為，飼料中LA和ALA 的交互作用對(duì)增重率的影響與這兩種EFA在飼料中的平衡(即飼料中LA和ALA 應(yīng)保持適宜水平和比例)密切相關(guān)，這種平衡性主要體現(xiàn)在LA和ALA在體內(nèi)進(jìn)行生物合成HUFA 過(guò)程中兩者對(duì)△6和△5 去飽和酶系統(tǒng)底物的競(jìng)爭(zhēng)性抑制［20］。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，各組飼料系數(shù)普遍偏高，推測(cè)可能與純合飼料適口性較差和消化吸收率低有關(guān);LA 對(duì)飼料系數(shù)影響不大，但當(dāng)ALA 添加過(guò)量后會(huì)導(dǎo)致飼料系數(shù)升高，這可能與過(guò)量ALA 會(huì)阻礙團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)有關(guān)。

表5 飼料中亞油酸和亞麻酸含量對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)全魚(yú)體組成的影響(濕質(zhì)量)Tab.5 Effect of dietary LA and ALA levels on whole body composition(wet weight basis)of juvenile blunt snout bream w/%

表6 飼料中亞油酸和亞麻酸含量對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)腸道消化酶活性的影響Tab.6 Effect of dietary LA and ALA levels on activities of intestinal digestive enzymes in juvenile blunt snout bream

Takeuchi等［21］研究了EFA 對(duì)虹鱒Oncorhynchus mykiss 的營(yíng)養(yǎng)功能，發(fā)現(xiàn)EFA 缺乏可使該魚(yú)肝臟脂質(zhì)特別是中性脂肪大量積累，而磷脂含量大幅降低。其他學(xué)者在大菱鲆Scophthalmus maximus［22］和鮭魚(yú)Oncorhychus keta［23］等魚(yú)類(lèi)中也觀察到，缺乏EFA 時(shí)魚(yú)類(lèi)肝臟中脂質(zhì)積累增加并且肝質(zhì)量相對(duì)增大。本試驗(yàn)結(jié)果表明，LA 為0.5%組的魚(yú)體肝胰臟脂肪含量顯著高于其他兩個(gè)LA 組，LA 對(duì)魚(yú)體肝體指數(shù)的影響雖不顯著但趨勢(shì)相似，這些表明，當(dāng)LA 添加量為0.5%時(shí)不能滿(mǎn)足魚(yú)體需要，導(dǎo)致EFA 缺乏。飼料中ALA 對(duì)魚(yú)體肝胰臟脂肪含量和肝體指數(shù)的影響結(jié)果顯示，添加0.9%的ALA時(shí)團(tuán)頭魴幼魚(yú)肝臟表現(xiàn)的更為健康。Lee等［24］對(duì)星斑川鰈Platichthys stellatus 的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)EFA 缺乏時(shí)全魚(yú)的粗脂肪含量也有所降低。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):LA 為0.5%組的全魚(yú)粗脂肪含量顯著小于LA為1.0%和1.5%組;ALA 對(duì)全魚(yú)粗脂肪含量的影響雖不顯著，但ALA 為0.9%組還是要稍高于其他兩個(gè)ALA 組，由此認(rèn)為，LA 為1.0%和ALA 為0.9%時(shí)，更能滿(mǎn)足魚(yú)體EFA 的需要。

本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):LA 為1.0%時(shí)團(tuán)頭魴幼魚(yú)的肥滿(mǎn)度顯著高于0.5%和1.5%組，LA 對(duì)全魚(yú)粗蛋白質(zhì)含量的影響無(wú)顯著性差異，但1.0%組粗蛋白質(zhì)含量稍高于其他兩個(gè)LA 組;ALA 對(duì)肥滿(mǎn)度無(wú)顯著影響，但ALA 為0.9%時(shí)為3 組中最高。薛敏等［25］認(rèn)為，魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)效果和魚(yú)體品質(zhì)與飼料中EFA 的適宜含量和比例密切相關(guān)。結(jié)合本試驗(yàn)中當(dāng)LA 為1.0%和ALA 為0.9%時(shí)，魚(yú)體肥滿(mǎn)度、全魚(yú)粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量較高，肝胰臟脂肪含量較低，說(shuō)明此時(shí)飼料中EFA 的含量是適宜的。

當(dāng)考慮LA 與ALA 的交互作用影響時(shí)，L1.0A0.9、L1.5A0.5、L1.5A0.9 組的相關(guān)指標(biāo)均較好，而L1.0A0.5、L1.0A1.3、L1.5A1.3 組也未表現(xiàn)出 EFA 極度缺乏或者過(guò)量癥狀，僅L0.5A0.5、L0.5A0.9、L0.5A1.3 組表現(xiàn) 出EFA不足的可能癥狀，故從對(duì)形體指標(biāo)和機(jī)體成分的影響綜合分析，團(tuán)頭魴幼魚(yú)對(duì)LA、ALA 均需要，但對(duì)LA 的需求更大，當(dāng)LA 為0.5%時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生EFA 缺乏，當(dāng)LA 為1.5%和ALA 為1.3%時(shí)也能耐受。

魚(yú)類(lèi)消化酶活性的高低能直接反映對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，提高魚(yú)體的消化酶活性就能提高魚(yú)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化能力，魚(yú)類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收也會(huì)隨之增加［26］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示:當(dāng)LA 的添加量為1.0%時(shí)，腸道脂肪酶活性最大;ALA 添加水平為1.3%時(shí)能顯著降低脂肪酶活性。作者推測(cè)，這兩種EFA可能通過(guò)消化酶影響?hù)~(yú)體消化吸收，從而造成對(duì)魚(yú)體體脂沉積的改變，但有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。飼料中LA和ALA 對(duì)蛋白酶的影響顯著，當(dāng)LA 過(guò)低和ALA 過(guò)高時(shí)都會(huì)導(dǎo)致蛋白酶活性降低，雖然EFA 對(duì)蛋白酶活性的影響未顯著改變魚(yú)體組織中蛋白質(zhì)的積累，但是可以通過(guò)提高團(tuán)頭魴對(duì)蛋白質(zhì)的利用率，促進(jìn)魚(yú)體生長(zhǎng)。

綜上所述，從團(tuán)頭魴幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)、體成分和消化酶數(shù)據(jù)來(lái)看，團(tuán)頭魴幼魚(yú)對(duì)LA的需要量為1.0% ～1.5%，對(duì)ALA 的需要量為0.5% ～0.9%。通過(guò)二次回歸方程分析得出，當(dāng)LA 為1.09%和ALA 為0.84%時(shí)，團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)較好，各項(xiàng)生理機(jī)能指標(biāo)正常。

［1］Watanabe T，Ogino C，Koshiishi Y，et al.Requirement of rainbow trout for essential fatty acids［J］.Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1974，40:493 -499.

［2］劉穗華，曹俊明，黃燕華，等.飼料中不同亞麻酸/亞油酸比對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦生長(zhǎng)性能和脂肪酸組成的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22(5):1413 -1421.

［3］Glencross B D，Smith D M.The dietary linoleic and linolenic fatty acids requirements of the prawn Penaeus monodon［J］.Aquaculture Nutrition，1999，5(1):53 -63.

［4］Sargent J，Henderson R J，Tocher D R.The lipids［M］//Halver J E.Fish Nutrition.2nd ed.New York:Academic Press，1989:153-218.

［5］Smith D M，Hunter B J，Allan G L，et al.Essential fatty acids in the diet of silver perch(Bidyanus bidyanus):effect of linolenic and linoleic acids on growth and survival［J］.Aquaculture，2004，236:377 -390.

［6］Blanchard G，Makombu J G，Kesternont P.Influence of different dietary 18:3n-3/18:2n-6 ratio on growth performance，fatty acid composition and hepatic ultrastructure in Eurasian perch，Perca fluviatilis［J］.Aquaculture，2008，284(1/4):144 -150.

［7］Tan X Y，Luo Z，Xie P，et al.Effect of dietary linolenic acid/linoleic acid ratio on growth performance，hepatic fatty acid profiles and intermediary metabolism of juvenile yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco［J］.Aquaculture，2009，296:96 -101.

［8］Garg M L，Sebokava E，Thomson A B R，et al.Δ6 -desaturase activity in liver microsomes of rats fed diets enriched with cholesterol and/or ω3 fatty acids［J］.Biochem J，1988，249:351 -356.

［9］劉瑋，戴年華，任本根，等.不同脂肪源飼料對(duì)團(tuán)頭魴稚魚(yú)生長(zhǎng)的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1997，21(1):44 -48.

［10］Takeuchi T，Watanabe T.Requirement of carp for essential fatty acids［J］.Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1977，43(4):541 -551.

［11］Takeuchi T，Watanabe K，Yong W Y，et al.Essential fatty acids of grass carp Ctenopharyngodon idella［J］.Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1991，57:467 -473.

［12］Li X F，Liu W B，Jiang Y Y，et al.Effects of dietary protein and lipid levels in practical diets on growth performance and body composition of blunt snout bream(Megalobrama amblycephala)fingerlings［J］.Aquaculture，2010，303:65 -70.

［13］AOAC.Official Methods of Analysis［M］.15th ed.Arlington:Association of Official Analytical Chemists，1990:684.

［14］Folch J，Lees M，Stanley G H S.A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues［J］.The Journal of Biological Chemistry，1957，226(1):497 -509.

［15］Lowry O P，Rosebrough N J，F(xiàn)arr A L，et al.Protein measurement with the folin - phenol reagent［J］.The Journal of Biological Chemistry，1951，193(1):265 -275.

［16］Christie W W.A simple procedure for rapid transmethylation of glycerolipids and cholesteryl esters［J］.Journal of Lipid Research，1982，23:1072 -1075.

［17］Zeitoun I H，Ullrey D E，Magee W T，et al.Quantifying nutrient requirements of fish［J］.J Fish Res Board Can，1976，33:167 -172.

［18］Glencross B D，Smith D M，Thomas M R，et al.The effect of dietary n-3 and n-6 fatty acid balance on the growth of the prawn Penaeus monodon［J］.Aquaculture Nutrition，2002，8(1):43-51.

［19］Zuridah O，Shim M K F.Quantitative requirements of linolenic and docosahexaenoic acid for juvenile Penaeus monodon［J］.Aquaculture，1997，157:277 -295.

［20］Henderson R J，Tocher D R.The lipid composition and biochemistry of freshwater fish［J］.Progress in Lipid Research，1987，26(4):281 -347.

［21］Takeuchi T，Watanabe T.Effects of various polyunsaturated fatty acids on growth and fatty acid composition of rainbow trout，Oncorhynchus keta［J］.Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1982，48:1745 -1752.

［22］Cowey C B，Owen J M，Adron J W，et al.Studies on the nutrition of marine flatfish［J］.Bri J Nutr，1986，36:479 -486.

［23］Takeuchi T，Watanabe T，Nose T.Requirement for essential fatty acids of chum salmon(Oncorhynchus keta)in fresh water environment［J］.Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1979，45:1319 -1323.

［24］Lee S M，Lee J H，Kim K D.Effect of dietary essential fatty acids on growth，body composition and blood chemistry of juvenile starry flounder(Platichthys stellatus)［J］.Aquaculture，2003，225:269 -281.

［25］薛敏，李?lèi)?ài)杰，張顯娟.牙鲆幼魚(yú)對(duì)EPA和DHA 的營(yíng)養(yǎng)需求［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2004，28(3):285 -291.

［26］李衛(wèi)芬，沈濤，陳南南，等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)草魚(yú)消化酶活性和腸道菌群的影響［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，27(3):31 -35.