（保定出入境檢驗檢疫局，河北保定 071051）

基質(zhì)固相分散萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜對腸衣中磺胺類藥物殘留的測定

劉謙

（保定出入境檢驗檢疫局，河北保定 071051）

建立檢測腸衣中磺胺多殘留的液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法，包括磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉。腸衣樣品中加入C18填料分散萃取，乙腈水溶液提取，光波模式下微波輻照，正己烷脫脂，采用液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測，使用電噴霧離子化源（ ESI），在正離子條件下以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式進行掃描。在3個添加水平下，方法對各被測物的回收范圍為68%～89%，相對標準偏差均小于20%。各被測物的檢出限為50μg/kg，可用于腸衣中磺胺類物質(zhì)多殘留檢測，且穩(wěn)定性好，結(jié)果可靠。

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；基質(zhì)固相分散萃取；腸衣；磺胺

磺胺類物質(zhì)是對氨基苯磺酸的衍生物，其分子中含有苯環(huán)、對氨基（N4）和磺酰胺基，抗菌譜廣、性質(zhì)穩(wěn)定、價格便宜，畜牧業(yè)上廣泛用于細菌感染性疾病預(yù)防和治療。但是如果用藥劑量、時間和部位使用不合理就會導致其在體內(nèi)蓄積，可形成過敏性反應(yīng)[1-5]，抑制人體的白細胞生成?；前匪幬餁埩暨€會導致人體內(nèi)耐藥性細菌的生成，有潛在的致癌性，日益受到社會的重視。目前中國、歐盟、美國、日本等均將磺胺類藥物列為動物飼養(yǎng)過程中的限用藥物，其最大殘留限量多小于100μg/kg。我國農(nóng)業(yè)部2002年第253號公告規(guī)定規(guī)定磺胺類藥物最大殘留限量為100μg/kg。

常用的檢測磺胺類藥物殘留的方法為液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜/質(zhì)譜法和液相色譜/質(zhì)譜法[6-10]。液相色譜/質(zhì)譜法由于具有很高的靈敏度且能準確的定性定量，非常適合藥物殘留的分析。本實驗以腸衣為研究對象，建立了腸衣中磺胺多殘留（包括磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉）檢測的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，其穩(wěn)定性好，結(jié)果可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配以電噴霧離子源（ESI）、萬分之一分析天平、高速離心機、氮氣濃縮儀、具塞離心管、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、渦旋混勻器、pH計、棕色分液漏斗、棕色雞心瓶、微波爐。

乙腈、正己烷、正丙醇均為色譜純；無水硫酸鈉、甲酸為分析純；C18填料為40μm；磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉標準品，均購自上海安譜試劑公司。

1.2 樣品處理

準確稱取制備好的樣品號2.0g，置于玻璃研缽中，稱取6.0g C18填料加至試樣上用玻璃杵輕輕研磨，要求樣品與填料混合均勻，色澤均一，狀態(tài)分散，裝于50mL塑料離心管中，加入25mL 乙腈水（100：3）溶液，渦旋振1min，放入微波爐中在光波模式下微波輻照30s，3000 r/min離心5min，將乙腈層移入100 mL 分液漏斗中，離心后的沉淀物再加25mL 乙腈搖勻，微波輔助提取30s，3000 r/min 離心5min ，合并乙腈提取液，待凈化。

提取液中加入25mL乙腈飽和的正己烷溶液，振蕩5 min，將底層乙腈溶液移入150mL 雞心瓶中，加入10mL 正丙醇，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45℃減壓蒸發(fā)至近干，氮氣吹干，用1.0mL50%乙腈水溶液定容，超聲30s 溶解殘渣，將溶解液移入10mL 離心管中，加0.5mL乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩2min，3000r/min 離心5min，棄去正己烷溶液，取底層乙腈水溶液過0.22μm濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.3 標準曲線的制備

取空白樣品，經(jīng)1.2處理后制備空白基質(zhì)溶液，配制目標物濃度為100、200、300、400、500ng/ mL。

1.4 檢測條件

1.4.1 色譜條件 色譜柱：Venusil MP C18，3μm，100 mm×2.1mm；柱溫：35℃；進樣量：20 μL；液相梯度洗脫程序見表1。

1.4.2 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；離子源溫度：120 ℃；定性離子對，定量離子對，去簇電壓和碰撞能量見表2。

表1 液相梯度洗脫程序

表2 質(zhì)譜參數(shù)

2 檢測結(jié)果

標準品特征離子譜圖在上述儀器條件下，3.5-8.0min全部出峰，且峰形尖銳而對稱，測試結(jié)果見圖1-5。圖1表示的是目標物總離子流圖，出峰先后依次為磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉；圖2-5分別表示磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉的提取離子流圖。

圖1 磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉總離子流圖

圖2 磺胺嘧啶提取離子流圖

2.1 添加回收率和精密度

圖3 磺胺二甲基嘧啶提取離子流圖

圖4 磺胺甲氧嘧啶提取離子流圖

圖5 磺胺喹噁啉提取離子流圖

標準曲線制備過程見1.3，以兩種目標物的特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線（圖6-9）。其相應(yīng)的回歸方程為y=293x-1375、y=332x-2933、y=151x-1568、y=282x-3470，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。

采用空白樣陰性品，4種磺胺物質(zhì)的添加濃度為 100、200、500ng/mL共3個水平，每個濃度做6個平行，經(jīng)1.2樣品處理后，取20.0μL進樣分析，每個濃度重復進樣3次。根據(jù)峰面積計算添加回收率和變異系數(shù)（CV）。檢測結(jié)果如表3所示。

圖6 磺胺嘧啶標準曲線

圖7 磺胺二甲基嘧啶標準曲線

圖8 磺胺喹噁啉標準曲線

圖9 磺胺甲氧嘧啶標準曲線

表3 精密度和回收率

3 討論

3.1 基質(zhì)固相分散萃取

基質(zhì)固相分散萃取集樣品制備、萃取和凈化過程于一步中，是一種優(yōu)秀的樣品前處理技術(shù)，特別適用于難勻漿和均質(zhì)的樣品，例如腸衣樣品。本實驗采用C18填料作為擔體，通過剪切力和摩擦作用將樣品基質(zhì)徹底粉碎，并均勻的分布于填料。所需樣品量和有機溶劑消耗少，前處理時間短，操作簡便，回收率高。

3.2 提取溶液的選擇

因磺胺類藥物不溶于非極性溶劑，而乙腈具有除蛋白作用，本實驗采用乙腈-水進行提取，對磺胺類的選擇性好，且提取雜質(zhì)較少，操作簡便?；前奉愃幬飳儆谒釅A兩性物質(zhì)，在酸性水溶液中，磺胺類呈電離狀態(tài)，溶解度會增大，可以在提取液中加入少量甲酸，增強提取效果。

3.3 樣品濃縮

由于本實驗中采用了基質(zhì)固相分散萃取，將萃取和凈化步驟同時進行，節(jié)省了處理時間，操作簡便，有機溶劑消耗比較少。在處理過程中使用乙腈飽和的正己烷萃取樣品的脂肪。由于磺胺的熱不穩(wěn)定性，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮過程中加入了少量的正丙醇，可以避免磺胺的分解。

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Determination of Sulfonamides in Casings by Liquid Chromatography -Mass Spectrometry with Matrix Solid Phase Dispersion Extraction

Liu Qian

（Baoding Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Hebei 071051）

A specifc and sensitive liquid chromatography-mass spectrometry method was developed for the determination of sulfadiazine，sulfamethazine，sulfaquinoxaline and sulfamonomethoxine. The C18 fller was added to disperse casing samples for extraction，acetonitrile solution was used to extract under microwave irradiation，and after being defatted with n-hexane，the analytes were tested by liquid chromatography-mass spectrometry with electrospray ion（ESI）source and multiple reaction monitoring（MRM） for screening．The mean recovery rates ranged from 68% to 89% with relative standard deviations below 20% at three spiked concentrations. The lower quantifcation limit was 50μg/ kg，The method was sensitive，rapid and accurate enough to determine various sulfonamides in casing samples.

HPLC/ MS； matrix solid phase dispersion extraction； casing； sulfonamides

TS207.53 < class="emphasis_bold"> 文獻標識碼 A

A

1005-944X（2014）07-0097-04