劉長(zhǎng)姣，張守勤，孟憲梅

（1.吉林工商學(xué)院糧油食品深加工吉林省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春130062；2.吉林大學(xué)生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130022）

五味子是雙子葉植物門(mén)、木蘭亞綱、八角目、五味子科植物，其干燥果實(shí)具有斂肺、止瀉、生津、益智、安神之功效[1]。五味子是一種多用途植物，它既可入藥也可用于保健食品，如釀酒和制汁生產(chǎn)飲料[2]。其含有木脂素、多糖、揮發(fā)油、色素、不飽和脂肪酸等成分。五味子種子和果肉中活性成分存在明顯差異，五味子甲素、五味子乙素等木脂素成分、揮發(fā)油和油脂主要存在于種子中；并且五味子油含有人體必需脂肪酸十八碳二烯酸和十八碳烯酸[3-5]。研究證明五味子中木脂素成分具有護(hù)肝、抗氧化的活性[6-7]，五味子油具有降低血糖、高血清胰島素，降低胰高血糖素的作用[8]，五味子揮發(fā)油具有較強(qiáng)的抗纖溶酶原激活物抑制劑（PAI）活性、鎮(zhèn)咳、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)非特異性刺激的防御能力等多種功能[9-12]。目前針對(duì)五味子的研究與應(yīng)用主要以五味子的干燥整果為主，對(duì)其種子中脂溶性成分的系統(tǒng)研究少，因此本文以五味子種子為原料，利用傳統(tǒng)壓榨法提取五味子油，利用GC/MS聯(lián)用法測(cè)定五味子油的脂肪酸組成，并應(yīng)用HPLC法測(cè)定五味子油中木脂素成分；同時(shí)應(yīng)用水蒸氣蒸餾法提取五味子種子揮發(fā)油，采用GC/MS聯(lián)用法測(cè)定其組成成分，為五味子種子的精深加工和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

五味子漿果 購(gòu)于吉林省撫松縣；五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素 中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇 色譜純，F(xiàn)isher公司；其余化學(xué)試劑 均為分析純，北京化工廠(chǎng)。

MA110電子天平 上海天平儀器廠(chǎng)；LC-20A高效液相色譜儀、GC-MS-QP2010日本島津公司；GC-MS-5975/6890N 美國(guó)安捷倫；DZKW-C恒溫水浴鍋 上海市實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)；榨油機(jī) 長(zhǎng)春長(zhǎng)白山榨油機(jī)廠(chǎng)。

1.2 油脂提取與樣品的制備

1.2.1 油脂制備 稱(chēng)取干燥五味子種子500g，置于小型植物油料榨油機(jī)中，壓榨，收集壓榨五味子油脂，4000r/m in離心10m in，取上清液得五味子油樣品，得率計(jì)算公式如下：

注：W：五味子油質(zhì)量（g）；M：五味子種子質(zhì)量（g）；Y：五味子油得率（%）。

1.2.2 甲酯化方法 取五味子種子油0.5g，加0.5mol/L KOH/CH3OH溶液4m L，60℃水浴加熱1h，進(jìn)行酯化反應(yīng)。然后加入正己烷2m L和水2m L充分振蕩，靜置后上層溶液為GC/MS待測(cè)樣。

1.2.3 油脂木脂素測(cè)定樣品制備 稱(chēng)取五味子油1.0g，加入適量甲醇，超聲處理15m in，甲醇定容到50m L容量瓶中，取一定量樣品液甲醇稀釋20倍，過(guò)濾得HPLC測(cè)定樣品。

1.3 揮發(fā)油提取與樣品的制備

稱(chēng)取100g五味子種子粉末，置于揮發(fā)油提取器提取7h，得揮發(fā)油，無(wú)水硫酸鈉除水，4℃保存，一周內(nèi)測(cè)定分析。揮發(fā)油得率計(jì)算公式如下：

注：V：五味子揮發(fā)油體積（v）；W：五味子種子質(zhì)量（g）；D：五味子揮發(fā)油得率（v/w）。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 脂肪酸測(cè)定方法 脂肪酸成分分析采用安捷倫GC-MS-5975/6890N進(jìn)行測(cè)定，色譜柱為HP-5（30m×0.25mm×0.25μm，美國(guó)）毛細(xì)管色譜柱。載氣為高純氦氣，分流比為1∶50，載氣流速為20m L/m in。采用程序升溫，起始柱溫80℃，以10℃/m in的升溫速度升溫至200℃，然后以5℃/m in的升溫速度升溫至250℃；最后以10℃/min的升溫速度升溫至280℃，并保持10m in。進(jìn)樣口溫度為280℃，離子源溫度為200℃，電離電壓為70eV。

1.4.2 木脂素測(cè)定方法 采用HPLC法測(cè)定木脂素成分。色譜柱為Shim-pack ODS（150×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇（A）和水（B），梯度洗脫程序?yàn)?～ 25min 65%～75%A、25～55min 75%～100%A、55～65min 100%A，流速為1.0m L/m in；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為10μL。

1.4.3 揮發(fā)油測(cè)定方法 采用島津GC-MS-QP2010測(cè)定揮發(fā)油成分，色譜柱為Rxi-5MS（30.0m×0.25mm×0.25μm）毛細(xì)管色譜柱。載氣為高純氦氣，分流比為1∶50，載氣流速為36.5cm/sec。采用程序升溫，起始柱溫60℃，保持3m in后，以5℃/m in的升溫速度升溫至150℃，然后以1℃/min的升溫速度升溫至170℃；最后以5℃/m in的升溫速度升溫至220℃，并保持5m in。進(jìn)樣口溫度為260℃，離子源溫度為200℃，電離電壓為70eV。

2 結(jié)果與分析

2.1 油脂脂肪酸成分分析

采用壓榨法制備五味子油，因?yàn)閴赫シň哂袩o(wú)溶劑殘留，可以避免長(zhǎng)時(shí)間高溫對(duì)有效成分的破壞，是目前人們信賴(lài)的提取技術(shù)。經(jīng)提取五味子種子油脂得率為24.03%。采用GC/MS聯(lián)用法對(duì)五味子油的脂肪酸組成成分進(jìn)行分析，應(yīng)用面積歸一化法計(jì)算不同脂肪酸的相對(duì)百分含量，將得到的樣品的質(zhì)譜數(shù)據(jù)與NIST數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)照相匹配，對(duì)相似度大于80的鑒定結(jié)果進(jìn)行報(bào)道，結(jié)果見(jiàn)表1。共鑒定了10種脂肪酸，其中含量高的是亞油酸和油酸，與Balandin的研究結(jié)果一致[13]。

表1 五味子油脂肪酸成分分析Table1 Fatty acid analysis of S.chinensis oil

亞油酸具有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，降低血清膽固醇和甘油三酯，防止動(dòng)脈粥樣硬化/軟化心腦血管、促進(jìn)血液循環(huán)的作用，素有“血管清道夫”的美譽(yù)[14]。與常見(jiàn)植物油相比，玉米油亞油酸含量為55%～ 60%、葵花籽油亞油酸含量為65%～78%，五味子油亞油酸含量為72.8%，高于玉米油，與葵花籽油相近。而葵花籽油與玉米油是為數(shù)不多的高亞油酸油脂，所以葵花籽油與玉米油被列為“健康保健油脂”[15]。由此證明五味子油是一種高亞油酸含量的油脂。從脂肪酸飽和程度分析，五味子油是高不飽和油脂，其不飽和脂肪酸含量為92.86%，遠(yuǎn)高于飽和脂肪酸含量。由此可見(jiàn)五味子油是一種高亞油酸和高不飽和油脂。

2.2 油脂木脂素成分的測(cè)定

五味子中木脂素成分脂溶性強(qiáng)，并主要存在于種子中，因此應(yīng)用HPLC法測(cè)定五味子油中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素三種木脂素成分的含量，結(jié)果見(jiàn)圖1。利用HPLC法測(cè)得五味子油中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量分別為0.755%、0.125%和0.952%。結(jié)果證明五味子油不僅含有不飽和脂肪酸，還含有五味子的主要活性成分木脂素，這也使得五味子油具有木脂素的功能活性。

圖1 五味子木脂素標(biāo)準(zhǔn)品和樣品HPLC圖Fig.1 HPLC spectra of standard lignans and sample

2.3 揮發(fā)油成分的測(cè)定

圖2 五味子種子揮發(fā)油總離子流圖Fig.2 Total ions chromatogram of volatile oil in S.chinensis seeds

表2 五味子種子揮發(fā)油化學(xué)成分Table2 Chemical composition of volatile oil in S.chinensis seeds

五味子種子揮發(fā)油為淡黃色透明液體，得率為2.34%（v/w干燥種子計(jì)）。利用GC/MS法測(cè)定揮發(fā)油成分，采用面積歸一化法計(jì)算各個(gè)成分的相對(duì)含量，將得到的樣品的質(zhì)譜數(shù)據(jù)與NIST數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)照相匹配，對(duì)相似度大于80的鑒定結(jié)果進(jìn)行報(bào)道，結(jié)果見(jiàn)圖2和表2。共鑒定了52種化合物，占相對(duì)總面積的89.74%；含量最高的三種化合物分別為衣蘭烯（10.16%），β-雪松烯（9.46%）和雙-表-α-雪松烯（8.92%），與Tan等報(bào)道的結(jié)果一致[16]。從成分類(lèi)別分析，五味子種子揮發(fā)油含有28種倍半萜類(lèi)化合物，占總含量的69.71%；17種單萜類(lèi)化合物，占總含量的12.78%；此外還有6種脂肪族化合物和2種芳香族化合物。由此可知五味子種子揮發(fā)油的化學(xué)成分主要屬于倍半萜類(lèi)和單萜類(lèi)化合物，與Li等的報(bào)道一致[17]。韋敏等研究證明揮發(fā)油的主要成分——異戊二烯萜類(lèi)具有抗腫瘤作用[18]，而五味子揮發(fā)油中異戊二烯萜類(lèi)成分占總含量的82.49%，是良好的異戊二烯萜類(lèi)成分來(lái)源，可見(jiàn)利用五味子種子制備揮發(fā)油，并進(jìn)行開(kāi)發(fā)和利用是可行的。

3 結(jié)論

本文針對(duì)五味子種子中脂溶性成分進(jìn)行系統(tǒng)分析，包括油脂中脂肪酸和木脂素，以及揮發(fā)油中各成分的鑒定。采用壓榨法制備五味子油，得率為24.03%；采用GC/MS聯(lián)用法鑒定了10種脂肪酸，其中含量高的是亞油酸和油酸，不飽和脂肪酸含量可達(dá)92.86%，證明五味子油是一種高亞油酸含量和高不飽和油脂。同時(shí)測(cè)定五味子油中木脂素成分，其中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量分別為0.755%、0.125%和0.952%。采用水蒸氣蒸餾法提取五味子種子揮發(fā)油，得率為2.34%，采用GC/MS聯(lián)用法鑒定了52種化合物，含量最高的三種化合物依次為衣蘭烯、β-雪松烯和雙-表-α-雪松烯，鑒定的成分主要屬于倍半萜類(lèi)和單萜類(lèi)化合物。結(jié)果表明利用五味子種子提取油脂和揮發(fā)油，可以制得富含亞油酸和木脂素成分的植物油脂和富含異戊二烯萜類(lèi)成分的揮發(fā)油，為五味子種子的深加工利用提供了依據(jù)。

[1]靳杰.中藥五味子的研究進(jìn)展 [J].黑龍江醫(yī)藥，2005，18（5）：335.

[2]丁鄉(xiāng)，丁立威.北五味子藥市現(xiàn)狀及后市淺析[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2004，11（3）：231.

[3]張?zhí)炖ぃ?，徐維波，耿寧.GC/MS測(cè)定五味子油中脂肪酸組成[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，21（2）：29-31.

[4]Liu C J，Zhang SQ，Zhang J S，et al.Chemical composition and antioxidantactivity of essentialoil from berries of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill[J].Natural Product Research，2012，26（23）：2199-2203.

[5]李立順，時(shí)維靜，馬迅兵.北五味子種子和果肉中的活性成分比較[J].食品科學(xué)，2012，33（16）：175-178.

[6]Chiu P Y，Tang M H，Mak D H F，et al.Hepatoprotective mechanism of Schisandrin B：Role of mitochondrial mutathione antioxidantstatusand heatshock proteins[J].Free Radical Biology &Medicine，2003，35（4）：368-380.

[7]Choi Y W，Takamatsu S，Khan S I，et al.Schisandrene，a Dibenzocyclooctadiene lignan from schisandra chinensis：Structure antioxidantactivity relationships of dibenzocyclooctadiene lignans [J].Journal of Natural Products，2006，69：356-359.

[8]柴可夫，草志成，王亞麗.北五味子油對(duì)糖尿病小鼠胰島細(xì)胞形態(tài)及功能的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2007，14（3）：177.

[9]戴好富，譚寧華，周俊，等.北五味子揮發(fā)性化學(xué)成分研究[J].中草藥，2005，6（9）：1309-1310.

[10]柯銘清.中草藥中有效成分理化與藥理特性[J].長(zhǎng)沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1982：541.

[11]倪立東，陳延西.五味子藥理作用研究概況[J].暨南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，1996，17（2）：125-128.

[12]應(yīng)國(guó)清，俞志明，單劍峰，等.北五味子有效組分的研究進(jìn)展[J].河南中醫(yī)，2005，25（6）：85-87

[13]Balandin D A.Fatty oil from Schizandra seeds[J].Doclady AcademiiNauk SSSR，1940，26：592-594.

[14]Tan X M，Chen F L.Analysis of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill volatile oilextracted by supercritical CO2extraction and steam distillation[J].Journal of Chinese MedicinalMaterials，2002，25：796-797.

[15]衣丹，林學(xué)政，沈繼紅，等.共軛亞油酸降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)生物進(jìn)展，2011（7）：1228.

[16]畢艷蘭.油脂化學(xué)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[17]Li X N，Cui H，Song Y Q，et al.Analysis of the essential oil of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill[J].Acta Pharmaceutica Sinica，2001，36（3）：215-219.

[18]韋敏，臧林泉，陶亮.植物揮發(fā)油中異戊二烯萜類(lèi)的抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2007，38（11）：754-757.