吳婉瑩+果德安

摘要： 基于中藥標(biāo)準(zhǔn)“以我為主，引領(lǐng)國(guó)際”的研究目標(biāo)，闡述了中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的科學(xué)方法。作者所在實(shí)驗(yàn)室多年從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建方法與思路的學(xué)習(xí)與實(shí)踐，提出科學(xué)與實(shí)用為基本原則，“深入研究，淺出標(biāo)準(zhǔn)”為指導(dǎo)思想，符合中醫(yī)理論的中藥整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建理念。中藥標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建主要包括基礎(chǔ)研究與標(biāo)準(zhǔn)建立兩部分工作，其中深入的基礎(chǔ)研究是需要溯本求源，需要全面的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的深入探討；同時(shí)也對(duì)如何淺出科學(xué)實(shí)用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提出了相關(guān)建議，包括對(duì)照物質(zhì)，對(duì)照?qǐng)D譜以及新的定量分析方法的應(yīng)用等。

關(guān)鍵詞： 中藥整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系；對(duì)照提取物；對(duì)照?qǐng)D譜；一測(cè)多評(píng)

[收稿日期] 2013-01-03

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局2013年中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)（201307002）；中國(guó)科學(xué)院重點(diǎn)部署項(xiàng)目（KSZD-EW-Z-004-01）

[通信作者] 果德安，研究員，Tel：（021）50271516，E-mail：daguo@simm.ac.cn

《國(guó)家藥品安全“十二五”規(guī)劃》明確指出：“中藥標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)制訂”。這一目標(biāo)的提出表明我國(guó)已經(jīng)開(kāi)始從國(guó)家層面重視中醫(yī)藥的發(fā)展，開(kāi)始把握中藥國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)制訂的主導(dǎo)權(quán)，將推進(jìn)“中藥標(biāo)準(zhǔn)化和現(xiàn)代化”納入了新時(shí)期的重點(diǎn)戰(zhàn)略任務(wù)，從而推動(dòng)中藥國(guó)際化發(fā)展。我國(guó)一直重視中藥質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化工作，《中國(guó)藥典》每5年修訂1次，每年制訂1個(gè)增補(bǔ)版，這在很大程度上提升了我國(guó)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的水平和相對(duì)保障了中藥實(shí)用的安全和有效。2010年版《中國(guó)藥典》收載了4 567個(gè)品種，基本形成了中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)藥品、藥品輔料、生物制品等門類齊全的藥品標(biāo)準(zhǔn)體系。然而到目前為止，我國(guó)尚未有處方藥真正獲得國(guó)外市場(chǎng)尤其是歐美市場(chǎng)的認(rèn)可，中藥往往是以保健品或者食品補(bǔ)充劑的角色出現(xiàn)在歐美市場(chǎng)。因此在推進(jìn)我國(guó)中藥國(guó)際化的進(jìn)程中，中藥標(biāo)準(zhǔn)引領(lǐng)國(guó)際需先行，通過(guò)構(gòu)建完善的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，讓中藥在歐美市場(chǎng)以藥品的形式獲得國(guó)際認(rèn)可。

標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的方法卻一直是仁者見(jiàn)仁，智者見(jiàn)智。如肖小河教授^[1]提出了中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)模式應(yīng)多元化，提出在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用生物效價(jià)檢測(cè)方法；梁鑫淼教授^[2]提出了中藥質(zhì)量控制技術(shù)應(yīng)重點(diǎn)發(fā)展以分離和表征技術(shù)為主的中藥質(zhì)量控制關(guān)鍵技術(shù)，構(gòu)建具有中藥特色的過(guò)程控制和產(chǎn)品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。毋庸置疑，這些創(chuàng)新的方法為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建與完善提供了更多的思路。但是中藥標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建一方面需要先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)，前沿的研究成果，同時(shí)更需要在實(shí)際應(yīng)用中具有可操作性，所以很多新的方法應(yīng)用到標(biāo)準(zhǔn)中還需要大量的實(shí)踐與驗(yàn)證。美國(guó)藥典（USP）、歐洲藥典（EP）、英國(guó)藥典（BP）等國(guó)家官方機(jī)構(gòu)都收錄了多個(gè)傳統(tǒng)草藥或植物藥的標(biāo)準(zhǔn)，據(jù)筆者實(shí)驗(yàn)室最新統(tǒng)計(jì)，2014年出版的美國(guó)藥典37中收錄有153個(gè)草藥及其制劑， 歐洲藥典8.0中，收錄有272個(gè)草藥及其制劑。各國(guó)藥典委員會(huì)在參考《中國(guó)藥典》英文版的同時(shí)，并根據(jù)本國(guó)的實(shí)際情況對(duì)草藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行制訂和管理。以專論（monograph）體現(xiàn)的思路與理念，形式和內(nèi)容，不同的國(guó)家也不盡相同。奧地利國(guó)家中醫(yī)藥研究中心主任Rudolf Bauer教授與歐洲藥典會(huì)中藥專家委員會(huì)主席Gerhard Franz博士在他們的文章中詳細(xì)對(duì)比了2005年版《中國(guó)藥典》與歐洲藥典6.0的異同^[3]。但應(yīng)該看到標(biāo)準(zhǔn)制訂的思路與理念是相通的，在基本指導(dǎo)思想上是可以互相借鑒與學(xué)習(xí)，以便達(dá)成共識(shí)。這些專論為我國(guó)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的國(guó)際化提供了可以學(xué)習(xí)和借鑒的方法。

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建主要包括2部分工作： 基礎(chǔ)研究與標(biāo)準(zhǔn)建立。實(shí)用的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需要方法科學(xué)、多點(diǎn)控制、實(shí)用可行，只有深入地進(jìn)行大量的基礎(chǔ)研究工作與積累總結(jié)，才有簡(jiǎn)便而又嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)，只有足夠地“深入研究”才有合適地“淺出標(biāo)準(zhǔn)”。

1 深入研究

中藥標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建首先要進(jìn)行深入地基礎(chǔ)研究。

1.1 溯本求源——中藥原植物基原的研究

中藥品種的基原確定是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建的根本。從《中國(guó)藥典》收載的中藥的基原背景，已可看出中藥品種的復(fù)雜性?？紤]到歷史沿革和藥材資源的問(wèn)題，中藥多基原的情況一直存在。完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)首先要對(duì)中藥優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行發(fā)現(xiàn)和確立，盡可能的單品種、單基原，以保證所使用藥材療效的一致性。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展進(jìn)程也是對(duì)生物多樣性選擇性應(yīng)用的過(guò)程。《中國(guó)藥典》已經(jīng)在這方面做了很多研究工作，將所含成分差別較大的品種按照一物一名的原則分列。如將葛根項(xiàng)下的野葛與粉葛分列2個(gè)項(xiàng)下，對(duì)于葛根素的限度進(jìn)行了分別要求；將五味子因其性狀和有效成分的不同列為五味子與南五味子2個(gè)品種；將漏蘆分為祁州漏蘆和禹州漏蘆；將川黃柏與關(guān)黃柏分開(kāi)，并分別進(jìn)行了定量控制等等。 但是也有學(xué)者對(duì)有些品種的分列提出質(zhì)疑，如金銀花與山銀花的分列，以木犀草苷作為指標(biāo)成分分列的依據(jù)是否充分，原植物忍冬作為金銀花的唯一來(lái)源給金銀花市場(chǎng)資源可能帶來(lái)的困擾等類似問(wèn)題其實(shí)也存在于一些其他品種中，這就需要大量深入的基礎(chǔ)研究后才能得出科學(xué)恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論^[4]。

中藥基原的復(fù)雜性為藥材的真?zhèn)舞b別與優(yōu)劣評(píng)價(jià)工作帶來(lái)較大難度。現(xiàn)已有許多新技術(shù)、新方法應(yīng)用到實(shí)際研究工作中， 從細(xì)胞學(xué)、化學(xué)、分子生物學(xué)等多角度對(duì)中藥品種進(jìn)行鑒定。近紅外漫反射光譜技術(shù)與聚類分析方法相結(jié)合，快速準(zhǔn)確識(shí)別偽劣藥材已經(jīng)得到廣泛推廣。DNA分子鑒定技術(shù)已經(jīng)在2010年版《中國(guó)藥典》中應(yīng)用于烏梢蛇極其混淆品種鑒別中，這個(gè)方法可以廣泛應(yīng)用于其他動(dòng)物藥如鱉甲、海馬的鑒別中。跨學(xué)科的合作，讓在繼承基礎(chǔ)上的創(chuàng)新能夠得以實(shí)現(xiàn)。天然麝香、市售麝香及人工麝香的譜圖相似性較高，尤其是人工麝香與天然麝香極其相似，難以區(qū)分；采用傅里葉變換紅外（FTIR）光譜法并結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)技術(shù)，提高了譜圖分辨率，可直觀有效地鑒別正品麝香。該方法具有快速、靈敏、直觀、無(wú)損等特點(diǎn)，可為名貴藥材的來(lái)源與真?zhèn)舞b別提供了新的手段^[5]。endprint

1.2 秉承經(jīng)典——基于中醫(yī)理論指導(dǎo)下的全面藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

基于中醫(yī)理論指導(dǎo)下的全面藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的的基石。中藥是多成分的復(fù)雜體系，進(jìn)行全面質(zhì)量控制不宜做到，目前能做到的就是基于中醫(yī)理論指導(dǎo)下去認(rèn)識(shí)中藥的主要藥效成分，基于中醫(yī)理論指導(dǎo)對(duì)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行全面的研究?！吨袊?guó)藥典》中的中藥標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)外植物藥專論最顯著的特點(diǎn)也是最重要的區(qū)別就是中藥標(biāo)準(zhǔn)定性與定量的成分確立依據(jù)離不開(kāi)中醫(yī)臨床的功能主治。而植物藥則是孤立地就已有的化學(xué)研究基礎(chǔ)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建。眾所周知，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系建立的初期主要是參考化學(xué)藥物的質(zhì)控模式，孤立的去構(gòu)建某一個(gè)指標(biāo)性成分的定性定量標(biāo)準(zhǔn)，從而對(duì)整個(gè)中藥進(jìn)行質(zhì)量控制。但是中藥復(fù)雜體系與化學(xué)藥的單一成分完全不同，構(gòu)建這樣的標(biāo)準(zhǔn)體系只能是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建進(jìn)程中的過(guò)往與歷史。擁有多成分與多靶點(diǎn)起效的中藥需要更加完善的整體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系。這就是整體觀，也是基于藥效作用的多成分的分離與定性定量分析。

在通過(guò)對(duì)更多成分認(rèn)知的過(guò)程中，逐步完善整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建。如筆者所在實(shí)驗(yàn)室通過(guò)對(duì)白芍的化學(xué)成分進(jìn)行分離，從白芍中提取分離到了新化合物芍藥苷亞硫酸酯，并明確了該化合物是白芍硫磺熏制的過(guò)程中由芍藥苷和二氧化硫反應(yīng)而生成，并提出控制芍藥苷亞硫酸酯的限量。由此可見(jiàn)深入的基礎(chǔ)研究可以幫助中藥從炮制、加工開(kāi)始就得到嚴(yán)格有效的質(zhì)控。筆者實(shí)驗(yàn)室通過(guò)化學(xué)手段對(duì)同屬不同種植物進(jìn)行分離研究，發(fā)現(xiàn)了其間的顯著性差異，如《中國(guó)藥典》中靈芝項(xiàng)下收載的赤芝Ganoderma lucidum和紫芝G. sinense，如果僅就多糖類成分進(jìn)行研究，它們幾乎是相同的，但進(jìn)一步對(duì)三萜類成分研究發(fā)現(xiàn)赤芝和紫芝有很大的區(qū)別。赤芝的代表性成分靈芝三萜酸、靈芝三萜烯酸、靈芝醇等成分在紫芝中幾乎檢測(cè)不到^[6]。而很多研究顯示靈芝三萜類化合物具有很好的藥理活性^[7-8]。但是在藥典中，還一直將2種靈芝都作為中藥?kù)`芝的合法來(lái)源。因此建議，靈芝項(xiàng)下收載的赤芝和紫芝2個(gè)品種由于差異性較大，臨床應(yīng)用時(shí)還需要仔細(xì)甄別，區(qū)別使用。

1.3 共舉創(chuàng)新——運(yùn)用多學(xué)科技術(shù)方法開(kāi)展作用機(jī)制的研究

中藥作為復(fù)雜體系，作用機(jī)制的研究在以中醫(yī)理論為指導(dǎo)的同時(shí)，還需要多學(xué)科共同研究，彼此滲透交叉，并通過(guò)多種技術(shù)進(jìn)行輔助、得到盡可能多的信息數(shù)據(jù)，進(jìn)行多角度分析。許多全新的想法與技術(shù)在不斷醞釀，其中比較突出的是系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用到中藥的研究中。系統(tǒng)生物學(xué)主要包括基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、生物信息學(xué)等各種組學(xué)，它對(duì)人體從生物系統(tǒng)中所有組成成分（基因、mRNA、蛋白質(zhì)等）的構(gòu)成及其在特定條件下這些組分之間的相互關(guān)系的研究，系統(tǒng)生物學(xué)的整體觀與中醫(yī)藥復(fù)雜體系的整體觀在某種程度上達(dá)成契合，讓很多科研工作者更有興趣進(jìn)行深入研究。近年來(lái)，筆者實(shí)驗(yàn)室也一直在進(jìn)行該方面的研究，將蛋白組學(xué)、生物信息學(xué)應(yīng)用到中藥單體、中藥提取物研究中，已經(jīng)對(duì)丹參、三七、靈芝的提取物進(jìn)行了相關(guān)研究工作^[9]。通過(guò)蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜鑒定的方法找到了12個(gè)可能與靈芝孢子總多糖（polysaccharides）刺激小鼠脾臟單核細(xì)胞增殖作用相關(guān)的蛋白質(zhì)^[10]；通過(guò)蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)合蛋白質(zhì)功能驗(yàn)證等技術(shù)闡明了靈芝總?cè)疲╣anoderma triterpenes）與抗腫瘤化學(xué)藥物阿霉素合用對(duì)人宮頸癌細(xì)胞株HeLa的細(xì)胞毒性的分子機(jī)制，其協(xié)同作用機(jī)制可能是通過(guò)增加氧自由基損傷和DNA損傷以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺死腫瘤細(xì)胞^[11]。中藥丹參中的主要活性成分丹酚酸B的作用機(jī)制，受到廣泛關(guān)注，實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)^[12-14]丹酚酸B可對(duì)心肌病、心肌缺血再灌注損傷、心肌纖維化、慢性心衰等皆有顯著保護(hù)作用。在細(xì)胞水平，丹酚酸B明顯降低血小板聚集、改善心肌細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞的抗缺氧能力、降低血管平滑肌細(xì)胞的通透性、降低心肌成纖維細(xì)胞的遷移和膠原分泌能力；在分子水平，課題組研究證實(shí)丹酚酸B是一個(gè)新型的MMP-9抑制劑，可與intergrin直接結(jié)合等，上述研究拓展了丹參研究的深度也為制訂科學(xué)合理的丹參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。此外，課題組采用生物信息學(xué)反向?qū)拥姆椒▽ふ业し铀酈的直接結(jié)合蛋白靶點(diǎn)，用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法尋找丹酚酸B作用的信號(hào)傳導(dǎo)靶點(diǎn)，隨后用生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)分析的方法將靶點(diǎn)形成網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行驗(yàn)證^[15-16]。上述研究拓展了丹參研究的深度，也為制訂科學(xué)合理的丹參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

迄今為止，不少科研工作者都在系統(tǒng)生物學(xué)思路指導(dǎo)下開(kāi)展了對(duì)中藥復(fù)雜體系的研究，但是全新的技術(shù)如何能全面、系統(tǒng)、正確地闡明中藥的作用靶點(diǎn)、作用環(huán)節(jié)和作用過(guò)程還有很長(zhǎng)的一段路要走。

2 淺出標(biāo)準(zhǔn)

中藥標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建在深入的基礎(chǔ)研究之后，立足點(diǎn)還要落在制訂的標(biāo)準(zhǔn)要科學(xué)、相對(duì)簡(jiǎn)單并可行。根據(jù)在實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題與積累的經(jīng)驗(yàn)，在現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，對(duì)中藥整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究的思路與方法提出以下幾點(diǎn)建議，以供商榷。

2.1 對(duì)照物質(zhì)——標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照提取物的應(yīng)用

對(duì)照物質(zhì)在標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建與執(zhí)行過(guò)程中扮演著重要角色。在實(shí)驗(yàn)研究中，經(jīng)常會(huì)遇到用于定性的對(duì)照藥材缺貨或者買到的對(duì)照藥材不同批號(hào)在薄層鑒別中表現(xiàn)不同，用于定量的對(duì)照品含量經(jīng)常低于90%，這一問(wèn)題為標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建工作帶來(lái)很大困擾。在實(shí)驗(yàn)室大量的實(shí)踐工作中發(fā)現(xiàn)，對(duì)照提取物的應(yīng)用以及一測(cè)多評(píng)方法可以更好地幫助解決這一問(wèn)題。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照提取物的制備比對(duì)照品（reference standard）更易獲得，經(jīng)濟(jì)實(shí)用；同時(shí)又比用對(duì)照藥材制訂的標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)謹(jǐn)，批與批之間易保證良好的一致性，在相同的色譜條件下，色譜行為重現(xiàn)性好。在《中國(guó)藥典》，對(duì)照提取物僅應(yīng)用于以該提取物為原料藥制備的制劑中。實(shí)際上對(duì)照提取物在藥材的鑒別上同樣適用。對(duì)于多基原的品種及一個(gè)中藥中含有不同類別的成分，通過(guò)制備相應(yīng)的對(duì)照提取物同樣可以制訂科學(xué)可行的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。endprint

提取物制備的工藝過(guò)程可以是開(kāi)放式的，不用條條框框去限定，不要成為標(biāo)準(zhǔn)制訂的瓶頸，可以殊途同歸，但最后還是都要?dú)w結(jié)到符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上。所以要求提取物的標(biāo)準(zhǔn)要盡可能地周詳與嚴(yán)謹(jǐn)，通過(guò)結(jié)果控制過(guò)程。在美國(guó)藥典植物藥的專論中， 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照提取物的使用貫穿于整個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的定性、定量研究。在定性研究中，采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照提取物進(jìn)行薄層鑒別中條帶（或斑點(diǎn)）以及特征圖譜中特征峰的指認(rèn)。在定量研究中，采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照提取物在一測(cè)多評(píng)方法的應(yīng)用中幫助進(jìn)行非對(duì)照色譜峰的其他峰指認(rèn)。

美國(guó)藥典與歐洲藥典都采用終產(chǎn)品質(zhì)量控制的方式，提取物的制備過(guò)程及方法在標(biāo)準(zhǔn)中表述的比較簡(jiǎn)單。美國(guó)藥典的提取物與制備相關(guān)的內(nèi)容主要包括3大元素：提取所用生藥，合適的溶劑以及標(biāo)示量（或含量）。例如，Echinacea pallida提取物，在表述上為：采用醇水混合溶劑或其他合適的溶劑對(duì)E. pallida的根進(jìn)行提??；生藥與所得提取物的比例為2∶1～8∶1；本品按干燥品計(jì)算，含總酚以咖啡酰酒石酸（caftaric acid），菊苣酸（chicoric acid），綠原酸（chlorogenic acid）以及松果菊苷（echinacoside）之和計(jì)，應(yīng)為4.0%～5.0%。在歐洲藥典中，也是類似的情況，如歐洲藥典 6.1中銀杏提取物的標(biāo)準(zhǔn)中，該部分內(nèi)容是從3個(gè)方面進(jìn)行描述：定義（包括含量）、生產(chǎn)過(guò)程以及性狀。在生產(chǎn)過(guò)程（production）項(xiàng)下的描述中，提取物是由銀杏葉精制而成，采用合適的過(guò)程，提取溶劑為有機(jī)溶劑或與水混合成一定比例，采用合適的物理分離過(guò)程。在制備方法中少了我國(guó)藥典中的提取時(shí)間、次數(shù)、提取溶劑及所用倍量等等，而對(duì)于這些細(xì)節(jié)上的要求，其實(shí)是通過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行控制。

總之，新的對(duì)照物質(zhì)、對(duì)照提取物的廣泛應(yīng)用可以幫助更經(jīng)濟(jì)更科學(xué)的構(gòu)建中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 對(duì)照?qǐng)D譜——薄層圖譜、特征圖譜與指紋圖譜的應(yīng)用

中藥標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建離不開(kāi)薄層圖譜、特征圖譜或指紋圖譜，他們將中藥標(biāo)準(zhǔn)采用圖譜的形式生動(dòng)直觀的展現(xiàn)出來(lái)，讓標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單清晰的表達(dá)出來(lái)，更容易被接受和理解，這是“深入研究，淺出標(biāo)準(zhǔn)”這一理念的最好表現(xiàn)形式。

2.2.1 薄層圖譜 目前《中國(guó)藥典》中藥標(biāo)準(zhǔn)中，在鑒別項(xiàng)下大多以顯微鑒別和薄層鑒別為主，在薄層鑒別中，大多品種僅僅要求與對(duì)照藥材一致，沒(méi)有標(biāo)明所含成分，沒(méi)有明確檢測(cè)幾個(gè)斑點(diǎn)。但在實(shí)際工作中，需要對(duì)更多的成分進(jìn)行檢識(shí)，以便更好的監(jiān)控中藥的真?zhèn)魏蛢?yōu)劣，所以建議對(duì)于薄層鑒別圖譜進(jìn)行細(xì)化和完善。

如丹參在《中國(guó)藥典》中，只分別對(duì)丹參酮ⅡA、丹酚酸B以及對(duì)照藥材進(jìn)行鑒別，筆者實(shí)驗(yàn)室對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂，該部分的工作體現(xiàn)在美國(guó)藥典37版第4卷收載的丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)中^[17]， 表述如下：日光下，供試品色譜圖中，在薄層板上1/3部分，在Rf約為0.75的位置，與丹參酮ⅡA對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的粉紅色斑點(diǎn)。供試品色譜中，在Rf約為0.65和0.50的位置上還分別有1個(gè)黃白色斑點(diǎn)和1個(gè)橙色斑點(diǎn)，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，分別由丹參酮I和隱丹參酮產(chǎn)生。紫外光燈下（365 nm），供試品色譜圖中，在薄層板下1/3部分， 在Rf約為0.20的位置，與丹酚酸B對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。供試品色譜中，在Rf約為0.30和0.35的位置上還有2個(gè)斑點(diǎn)，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，分別由紫草酸和迷迭香酸產(chǎn)生。修訂后的標(biāo)準(zhǔn)不僅明確了丹參酮ⅡA、丹酚酸B 2個(gè)成分，同時(shí)還通過(guò)Rf及斑點(diǎn)或條帶的顏色來(lái)指認(rèn)對(duì)照藥材色譜上相應(yīng)的位置上的成分，將丹參中目前含量較高的6個(gè)活性成分均予以指認(rèn)。在美國(guó)藥典與歐洲藥典中，即便不知道條帶（或斑點(diǎn)）歸屬的化學(xué)成分，也會(huì)對(duì)條帶進(jìn)行詳細(xì)的描述，要求在鑒別中進(jìn)行檢識(shí)。如美國(guó)藥典中刺五加（eleuthero）的薄層鑒別中，除了對(duì)對(duì)照品刺五加苷B（eleutheroside B）進(jìn)行描述為棕色至紅色條帶外，又分別對(duì)其上下的藍(lán)色條帶和黃色條帶進(jìn)行描述，同時(shí)還描述在薄層板的上部有若干棕色至黃色條帶。歐洲藥典在標(biāo)準(zhǔn)中是采用了更直觀的與薄層板對(duì)應(yīng)比例的圖表，在相應(yīng)的位置寫(xiě)上條帶的顏色，如銀杏提取物中，條帶的表述有8條，大約十余個(gè)成分在表述中。盡可能多的成分在薄層檢識(shí)中需要被鑒別。

完善的薄層圖譜應(yīng)該能最大程度的把中藥中的主要成分直觀表現(xiàn)出來(lái)，更好的發(fā)揮其定性鑒別作用。

2.2.2 特征圖譜 特征圖譜是指對(duì)于一個(gè)中藥品種或其提取物，共用的具有特征性的一類或幾類成分的色譜或光譜圖，在標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建中可以用于定性鑒別。2010年版《中國(guó)藥典》中新增加了特征圖譜項(xiàng)，如人參莖葉總皂苷、人參總皂苷、山楂葉提取物、連翹提取物、腫節(jié)風(fēng)浸膏、茵陳提取物、滿山紅油等提取物都有其特異性的鑒別圖譜，這是《中國(guó)藥典》在標(biāo)準(zhǔn)工作中的又一進(jìn)步。

特征圖譜不要求與指紋圖譜一樣對(duì)圖譜的相似性進(jìn)行全面評(píng)價(jià)，它的主要特點(diǎn)是要突出該品種與其他品種不同的特異性成分，并將這些成分作為特征峰通過(guò)與S峰（參照物峰）的相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算，進(jìn)行色譜峰在特征圖譜上的定位，這些峰可以是已知的，也可以是未知的。如滿山紅油的特征圖譜中峰1是已知的乙酸龍腦酯，峰8是S峰-牻牛兒酮，其他特征峰根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間定位判斷，并不需要進(jìn)行成分的指認(rèn)。在美國(guó)藥典與歐洲藥典中，也有類似特征圖譜樣的譜圖鑒別出現(xiàn)在鑒別（identification）項(xiàng)下。主要采用對(duì)照提取物為標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)樣品進(jìn)行鑒別，用于鑒別特征色譜峰并可配合定量分析方法進(jìn)行各個(gè)色譜峰的定位?？偨Y(jié)國(guó)內(nèi)外的研究方法，基本思路是一樣的，都是首先采用對(duì)照藥材或?qū)φ仗崛∥锝?duì)照特征圖譜，并對(duì)特征成分進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)檢出的特征峰數(shù)，包含成分不明確的色譜峰，盡量使評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單明確。在標(biāo)準(zhǔn)中要求檢測(cè)出與對(duì)照藥材或?qū)φ仗崛∥镆粯拥纳V峰，用來(lái)說(shuō)明中藥中所含成分。并提示最好采用對(duì)照藥材或?qū)φ仗崛∥镞M(jìn)行系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)，調(diào)整分析參數(shù)，從而保證定性研究與定量研究的一致性。endprint

2.2.3 指紋圖譜 中藥指紋圖譜系指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析方法得到的能夠體現(xiàn)中藥整體或部分化學(xué)特性的色譜或光譜譜圖。中藥指紋圖譜應(yīng)最大限度地表征藥效相關(guān)成分或特征成分，滿足整體性、專屬性和重現(xiàn)性的要求。經(jīng)過(guò)多年的探索與應(yīng)用，指紋圖譜終于走進(jìn)了2010年版《中國(guó)藥典》，在中藥的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)中發(fā)揮著巨大的作用。三七總皂苷、三七三醇皂苷、丹參總酚酸提取物及丹參酮提取物等研究比較深入全面的提取物都建立了成熟的指紋圖譜方法。目前，指紋圖譜已經(jīng)廣泛應(yīng)用到藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別以及新藥生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)控中。如市場(chǎng)上許多偽藥都是通過(guò)單一成分加入來(lái)達(dá)到現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)采用指紋圖譜后，對(duì)于多成分的全面的控制使偽劣產(chǎn)品的鑒別找到了切實(shí)可行的辦法。指紋圖譜方法目前在美國(guó)藥典與歐洲藥典中還沒(méi)有采用，但在中藥標(biāo)準(zhǔn)國(guó)際化的過(guò)程中，指紋圖譜的方法也一定會(huì)被收載草藥和植物藥的各國(guó)藥典所接受和學(xué)習(xí)。

2.3 相對(duì)校正因子——一測(cè)多評(píng)的應(yīng)用

由于已經(jīng)認(rèn)識(shí)到中藥化學(xué)成分的多樣性，作用基礎(chǔ)的多靶點(diǎn)，并且是多成分協(xié)同起效，國(guó)家藥典委員會(huì)從2005年版《中國(guó)藥典》的修訂時(shí)就提出加強(qiáng)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的整體研究，需要對(duì)盡可能多的活性成分進(jìn)行定性定量研究。據(jù)筆者實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)，在2010年版《中國(guó)藥典》中，中藥材的多指標(biāo)成分（≥2）含量測(cè)定共有90個(gè)品種，占總藥材的15.18%；植物油和提取物多指標(biāo)成分含量測(cè)定為17個(gè)，占提取物總數(shù)的36.17%。但是大多數(shù)還局限在對(duì)2種指標(biāo)成分的含量測(cè)定，其中對(duì)3個(gè)以上指標(biāo)成分測(cè)定的品種共有26個(gè)，其中最多測(cè)定5個(gè)指標(biāo)成分，僅有2個(gè)中藥。多指標(biāo)成分的質(zhì)控是大勢(shì)所趨，但是對(duì)照品的提供是該方法應(yīng)用的瓶頸。由此，能夠進(jìn)行多指標(biāo)含量測(cè)定的一測(cè)多評(píng)方法受到越來(lái)越多的重視。

一測(cè)多評(píng)方法是指在含量測(cè)定時(shí)，采用一個(gè)對(duì)照品，同時(shí)對(duì)多個(gè)成分進(jìn)行含量測(cè)定。其他成分通過(guò)相對(duì)保留時(shí)間及對(duì)照藥材（或?qū)φ仗崛∥铮┑奶卣鲌D譜確認(rèn)色譜峰，進(jìn)而根據(jù)相對(duì)轉(zhuǎn)換因子計(jì)算其他色譜峰的含量。與傳統(tǒng)的多指標(biāo)成分定量評(píng)價(jià)方法相比較，主要是在標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行階段，后者需要更多的對(duì)照品，而一測(cè)多評(píng)法在方法構(gòu)建階段時(shí)，要比后者多進(jìn)行相對(duì)轉(zhuǎn)換因子和相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算，對(duì)方法的耐用性要求更高。一測(cè)多評(píng)方法構(gòu)建的內(nèi)容包括：指標(biāo)成分的確立、分析方法的建立、相對(duì)校正因子及相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算、方法學(xué)驗(yàn)證及多個(gè)實(shí)驗(yàn)室復(fù)核等，其中相對(duì)校正因子是一測(cè)多評(píng)方法的核心，如何保證方法建立過(guò)程中所獲得的校正因子具有可重復(fù)性是該分析方法的關(guān)鍵所在。筆者實(shí)驗(yàn)室在研究工作中重點(diǎn)對(duì)校正因子的多方面影響因素進(jìn)行了考察^[18-19]，由于校正因子的存在，所以在標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)于實(shí)驗(yàn)條件與參數(shù)要盡可能詳細(xì)地描述。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)藥典37版中，共有包括植物、植物提取物以及植物制劑153個(gè)專論，其中Red Clover，Echinacea angustifolia，Ginkgo，Grape Seeds Oligomeric Proanthocyanidins和Milk Thistle等品種采用的都是一測(cè)多評(píng)的定量分析方法。近年來(lái)，美國(guó)藥典也非常重視一測(cè)多評(píng)方法的使用。在其藥典論壇中，發(fā)表的很多新建立的植物藥標(biāo)準(zhǔn)都采用該方法。如發(fā)表在美國(guó)藥典論壇36卷第4期中的中藥積雪草Centella asiatica的標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)6個(gè)成分采用一測(cè)多評(píng)方法進(jìn)行了質(zhì)控，其中積雪草苷為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物質(zhì)，表述為積雪草苷（asiaticoside，1.00），其余5個(gè)成分的相對(duì)保留時(shí)間表述如下：羥基積雪草苷 （madecassoside，0.71），積雪草苷B（asiaticoside B，0.72），羥基積雪草酸（madecassic acid，2.40），特米諾酸（terminolic acid，2.44），積雪草酸（asiatic acid，3.12）。在標(biāo)準(zhǔn)中，校正因子的表述如下：積雪草苷（asiaticoside，1.00），羥基積雪草苷（madecassoside）與積雪草苷B（asiaticoside B）之和（1.017），羥基積雪草酸（madecassic acid）與其同分異構(gòu)體特米諾酸（terminolic acid）之和（0.526），積雪草酸（asiatic acid，0.509）。在這個(gè)表述中，可以看到，對(duì)于2個(gè)成分未達(dá)到分離的混合峰也是被接受的，混合物的校正因子也體現(xiàn)了美國(guó)藥典希望測(cè)定盡可能多的成分進(jìn)行質(zhì)量控制的理念。

綜上所述，通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建方法與思路的學(xué)習(xí)與實(shí)踐，結(jié)合筆者所在實(shí)驗(yàn)室多年的研究，體會(huì)到好的中藥標(biāo)準(zhǔn)是從技術(shù)與應(yīng)用2個(gè)層面構(gòu)建整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系，中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建既要求新技術(shù)、新方法，同時(shí)要求結(jié)合中醫(yī)臨床與生產(chǎn)實(shí)際，具有實(shí)用性和可操作性，科學(xué)深入與實(shí)用淺出并重。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 肖小河， 金城， 趙中振，等. 論中藥質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)模式的創(chuàng)新與發(fā)展[J]. 中國(guó)中藥雜志， 2007， 32（14）：1377.

[2] 梁鑫淼， 豐加濤， 金郁， 等. 中藥質(zhì)量控制技術(shù)發(fā)展展望[J]. 色譜， 2008， 26（2）：130.

[3] Rudolf B，Gerhard F. Modern European monographs for quality control of Chinese herbs[J]. Planta Med， 2010，76：2004.

[4] 汪冶， 文惠玲， 梅樹(shù)模， 等.《中國(guó)藥典》2005年版金銀花和山銀花品種分列的商榷[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2009， 20（1）：150.

[5] 周健，全城，肖小河，等.應(yīng)用紅外光譜技術(shù)鑒別中藥麝香的真?zhèn)蝃J]. 光譜學(xué)與光譜分析， 2010， 30（9）： 2368.

[6] Da J， Wu W， Guo D， et al. Comparison of two officinal Chinese pharmacopoeia species of Ganoderma based on chemical research with multiple technologies and chemometrics analysis[J]. J Chromatogr A，2012，1222：59.endprint

[7] Liu J， Shiono J， Shimizu K， et al. Ganoderic acids from Ganoderma lucidum： inhibitory activity of osteoclastic differentiation and structural criteria[J]. Planta Med， 76（2）：137.

[8] Fatmawati S， Shimizu K， Kondo R. Ganoderic acid Df， a new triterpenoid with aldose reductase inhibitory activity from the fruiting body of Ganoderma lucidum[J]. Fitoterapia， 81（8）：1033.

[9] 劉璇，岳慶喜，果德安. 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及其在中藥復(fù)雜體系研究中的應(yīng)用[J].中國(guó)天然藥物， 2009， 7（4）： 260.

[10] Ma C， Liu X， Guo D，et al. Differential protein expression in mouse splenic mononuclear cells treated with polysaccharides from spores of Ganoderma lucidum[J]. Phytomedicine， 2008， 15 （4）： 268.

[11] Yue Q X， Liu X， Guo D，et al. Interaction of Ganoderma triterpenes with docetaxel and cisplain in cytotoxicity against human carcinoma cells[J]. Chin J Nat Med， 2008， 6（5）： 367.

[12] Xu L， Jiang B， Guo D， et al. Cardio-protection of salvianolic acid B through inhibition of apoptosis network[J]. PLoS One， 2011， 6 （9）：e24036.

[13] Jiang B， Wu W， Guo D， et al. Salvianolic acid a， a novel matrix metalloproteinase-9 inhibitor， prevents cardiac remodeling in spontaneously hypertensive rats[J]. PLoS One， 2013， 8（3）：e59621.

[14] Wang Y， Jiang B， Guo D， et al. Matrix metalloproteinase-9 induces cardiac fibroblast migration， collagen and cytokine secretion： inhibition by salvianolic acid B from Salvia miltiorrhiza[J]. Phytomedicine， 2011，19 （1）：13.

[15] Feng L X， Liu X， Guo D， et al. Clarifying the signal network of salvianolic acid B using proteomic assay and bioinformatic analysis[J]. Proteomics ，2011，11： 1473.

[16] Ma C， Liu X ， Guo D， et al. Differential proteomic analysis of platelets suggested possible signal cascades network in platelets treated with salvianolic acid B[J]. PLoS One， 2011，6（2）： e14692.

[17] The United Pharmacopeial Convention. The united states pharmacopeia， 37th revision/national formulary.Vol 4[S]. 32th Edition.Rockville： The United States Pharmacopeial Convention， 2014.

[18] Hou J J， Wu W， Guo D， et al. Ruggedness and robustness of conversion factors in method of simultaneous determination of multi-components with single reference standard[J]. J Chromatogr A， 2011， 1218：5618.

[19] Hou J J， Wu W， Guo D， et al. A single， multi-faceted， enhanced strategy to quantify the chromatographically diverse constituents in the roots of Euphorbia kansui[J]. J Pharmaceut Biomed Anal， 2014， 88：321.

Strategies for elaboration of comprehensive quality standardendprint

system on traditional Chinese medicine

WU Wan-ying， GUO De′an*

（National Engineering Laboratory for TCM Standardization Technology， Shanghai Institute of Materia Medica，

Chinese Academy of Sciences， Shanghai 201203， China）

[Abstract] Based on the research goal of "traditional Chinese medicine standards lead in the international standard-setting"， scientific strategies for the elaboration of traditional Chinese medicine （TCM） comprehensive quality standard system were introduced. TCM is a complex multi-component system which was used under the guidance of traditional Chinese medical theory. The present paper has put forward the basic principle of "deep research and simplified standard" to construct the quality standards of TCM. "Deep research" refers to systematic， thorough investigations on active constituents and biological mechanisms. On the basis of deep research， "simplified standard" means to establish a scientific and feasible standard， which should be practical and less complicated， to control the quality of Chinese herbs. Three key issues related to the elaboration of the quality standards are suggested. For reference substances， we propose the research methodology using reference extract to develop the qualitative and quantitative determination methods. Compared with that of using reference compounds， the preparation of reference extract is more accessible， economical and practical. Moreover， compared with reference crude drugs， the reference extract showed better batch-to-batch consistency. For identification， in addition to conventional methods， high performance liquid chromatography （HPLC）， chemical fingerprints and characteristic chromatogram are proposed， in which more major marker compounds are monitored. And then LC-MS technique is employed to comprehensively analyze and characterize the peaks in the fingerprint. For multi-component quantification， the method of single standard to determine multi-components （SSDMC） is suggested， providing solutions for the lack of reference standards in quality evaluation. The SSDMC method uses a single reference standard to simultaneously determine the content of multiple compounds. In general， the integrate quality control standard of TCM is established based on combining innovative technology with practical applications.

[Key words] comprehensive quality standard system for traditional Chinese medicine； quality control； reference extract； reference fingerprint； single standard to determine multi-components （SSDMC）

doi：10.4268/cjcmm20140301

[責(zé)任編輯 孔晶晶]endprint