晉 翔，劉 鵬，張雅紅

迷迭香酸對(duì)大鼠抑郁樣行為的作用及其機(jī)制研究

晉 翔，劉 鵬，張雅紅

目的探討迷迭香酸(RA)對(duì)慢性不可預(yù)見(jiàn)應(yīng)激(CUS)抑郁模型大鼠抑郁樣行為的改善作用及機(jī)制。方法 將大鼠隨機(jī)分為6組，每組16只。A組:生理鹽水組;B組:低劑量RA組;C組:高劑量RA組;D組:CUS+生理鹽水組;E組:CUS+低劑量RA組;F組:CUS+高劑量RA組。建立CUS抑郁大鼠模型，干預(yù)結(jié)束后對(duì)部分大鼠(每組8只)進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳行為學(xué)測(cè)試后，取海馬組織蛋白樣品，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)水平，免疫印跡(Western-blot)法檢測(cè)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)、磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(pERK1/2)的蛋白表達(dá)水平。各組其余8只大鼠進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。結(jié)果 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、海馬組織BDNF的ELISA檢測(cè)、pERK1/2及ERK1/2蛋白定量及水迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)象限停留時(shí)間百分比結(jié)果D組與A、B、C組比較均存在顯著差異(P＜0．05)，F(xiàn)組與D組存在顯著差異(P＜0．05)，而E組與 D、F組之間無(wú)顯著差異(P ＞0．05)，A、B、C 組之間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。結(jié)論 CUS模型大鼠會(huì)表現(xiàn)出類似于抑郁癥患者的抑郁樣行為，而一定劑量的RA干預(yù)能改善這一行為，其機(jī)制可能為RA通過(guò)上調(diào)抑郁大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞中ERK1/2的磷酸化，促進(jìn)其釋放BDNF，進(jìn)而發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)。

迷迭香酸;抑郁;行為學(xué)科和活動(dòng);大鼠，Sprague-Dawley

抑郁癥是目前臨床最常見(jiàn)的精神疾患，中藥用于抗抑郁治療取得了較好的效果［1-4］。臨床用于改善抑郁情緒的香蘇散主要成分是紫蘇草，已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)紫蘇草具有良好的抗抑郁作用［5-6］。迷迭香酸(Rosmarinic acid，RA)是紫蘇草內(nèi)天然存在的多酚類化合物，是紫蘇草的主要活性成分，具有多種生物活性。有研究證實(shí)，紫蘇草及其主要代謝產(chǎn)物咖啡酸可以通過(guò)誘導(dǎo)小鼠海馬齒狀回細(xì)胞的增殖從而減輕抑郁模型小鼠的抑郁癥狀。本研究通過(guò)構(gòu)建慢性不可預(yù)見(jiàn)應(yīng)激(chronic unpredictable stress，CUS)抑郁大鼠模型，觀察不同劑量RA對(duì)大鼠抑郁樣行為的作用。在行為學(xué)結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察RA對(duì)海馬細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK1/2)、磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases，pERK1/2)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)表達(dá)的影響，探討RA抗抑郁的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為雄性SD大鼠96只，鼠齡6周，體重180～230 g，購(gòu)自中科院動(dòng)物所(合格證號(hào):20120174)。所有大鼠在干預(yù)前均常規(guī)飼養(yǎng)1周，無(wú)食水限制，飼養(yǎng)條件:12 h光暗循環(huán);溫度(23．0±1．1)℃;濕度40% ～60%。RA 購(gòu)自Sigma-Aldrich公司;抗 ERK1/2兔多克隆抗體、抗pERK1/2鼠單克隆抗體購(gòu)自Cell Signaling公司;大鼠酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)檢測(cè)BDNF試劑盒購(gòu)自Sun Red公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組 將大鼠隨機(jī)分為6組，每組16只。A組:生理鹽水組;B組:低劑量RA組;C組:高劑量RA組;D組:CUS+生理鹽水組;E組:CUS+低劑量RA組;F組:CUS+高劑量RA組。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟 D、E、F組接受為期21 d的CUS造模，A、B、C組不接受CUS造模，從同一天開(kāi)始計(jì)時(shí)。從第15天開(kāi)始，A、D組每天腹腔注射生理鹽水(1 ml/kg)，B、E 組每天腹腔注射 RA 5 mg/kg，C、F組每天腹腔注射RA 10 mg/kg，均持續(xù)14 d。RA經(jīng)生理鹽水溶解后，每天上午9:00～10:00給藥。

隨后，每組隨機(jī)抽取8只大鼠通過(guò)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)測(cè)試檢測(cè)習(xí)性無(wú)助和探索行為，在測(cè)試結(jié)束后處死大鼠，分離海馬組織，通過(guò)免疫印跡(Western-blot)法檢測(cè)海馬組織ERK1/2和pERK1/2的表達(dá)情況，并使用ELISA試劑盒檢測(cè)BDNF的水平。每組剩余的8只大鼠進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試，以檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)記憶行為。

1.4 CUS模型構(gòu)建 CUS模型的建立參考等Koo［7］的方法。造模大鼠稱重，按每籠5或6只飼養(yǎng)，在21 d內(nèi)接受慢性、不可預(yù)知的溫和刺激，模擬人類日常生活中接受的慢性低強(qiáng)度應(yīng)激。每天從日間、夜間刺激中各挑選一種對(duì)大鼠進(jìn)行處理，順序隨機(jī)，連續(xù)不重復(fù)，使大鼠不能夠預(yù)計(jì)刺激的出現(xiàn)。日間刺激包括:①在強(qiáng)迫游泳桶中加入4℃冰水，每桶中1只大鼠，游泳5 min;②每只大鼠單獨(dú)接受足底電擊2 mA，間隔10 s，電擊4 s，重復(fù)2次;③搖晃鼠籠10 min，強(qiáng)度沒(méi)有明確要求，以大鼠不能站穩(wěn)為指標(biāo)，方向不定;④大鼠放于束縛罐中束縛2 h;⑤單籠隔離所有大鼠，孤獨(dú)3 h;⑥將大鼠放入狹窄的桶中，擁擠3 h。夜間刺激包括:①持續(xù)電燈光照;②在鼠籠墊料上噴灑水，潮濕處理;③將鼠籠傾斜45度;④彩燈置于鼠籠上方，持續(xù)閃爍;⑤禁水、禁食12 h。

1.5 動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)檢測(cè)方法

1.5.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn):強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是用來(lái)研究應(yīng)激狀態(tài)下動(dòng)物的反應(yīng)能力，大鼠在強(qiáng)迫游泳過(guò)程中，會(huì)呈現(xiàn)以下幾種狀態(tài):①漂浮不動(dòng);②攀爬容器壁;③游泳。其中漂浮不動(dòng)時(shí)間是用來(lái)反映動(dòng)物抑郁樣行為的指標(biāo)。將大鼠放入內(nèi)徑18 cm、高40 cm的圓柱形玻璃瓶中，水溫25～27℃，水深25 cm，以確保大鼠不會(huì)觸到瓶底并且不會(huì)爬到瓶外，每桶1只大鼠。實(shí)驗(yàn)第1天，每只大鼠預(yù)游泳15 min，隨后取出擦干放入籠中。24 h之后再次將大鼠放入水中即開(kāi)始計(jì)時(shí)，連續(xù)觀察5 min，累計(jì)大鼠漂浮不動(dòng)的時(shí)間，并計(jì)算其占總時(shí)間的百分比，百分比越高，大鼠的抑郁狀態(tài)越重。

1.5.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是用來(lái)檢測(cè)動(dòng)物的自主活動(dòng)以及抑郁、焦慮樣行為，自主活動(dòng)包括大鼠在10 min的水平運(yùn)動(dòng)總距離和在曠場(chǎng)中心區(qū)進(jìn)入的時(shí)間等指標(biāo)。本研究以大鼠運(yùn)動(dòng)距離作為評(píng)判大鼠抑郁、焦慮狀態(tài)的指標(biāo)。每只大鼠單獨(dú)放于曠場(chǎng)行為觀察箱(47 cm×47 cm×47 cm)中，10 s適應(yīng)期后開(kāi)始記錄大鼠行為10 min，測(cè)定大鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離，運(yùn)動(dòng)距離越長(zhǎng)，抑郁、焦慮狀態(tài)越輕。

1.5.3 水迷宮實(shí)驗(yàn):將水池均等分為4個(gè)象限，將大鼠站臺(tái)固定在第3象限，站臺(tái)高度低于水平面2 cm，進(jìn)行空間學(xué)習(xí)訓(xùn)練，將每只大鼠頭朝池壁放入水中，放入位置為隨機(jī)取4個(gè)象限之一。記錄大鼠找到水下平臺(tái)的時(shí)間。在前幾次訓(xùn)練中，如果這個(gè)時(shí)間超過(guò)60 s，則引導(dǎo)大鼠到平臺(tái)，讓大鼠在平臺(tái)上停留10 s。隨后將大鼠移開(kāi)、擦干。必要時(shí)將大鼠放在150W的白熾燈下烤5 min，放回籠內(nèi)。每只大鼠每天訓(xùn)練4次，兩次訓(xùn)練間隔15～20 min，連續(xù)訓(xùn)練5 d。最后一次獲得性訓(xùn)練結(jié)束后第2天，將平臺(tái)撤除，開(kāi)始60 s的探查訓(xùn)練。將大鼠由原先平臺(tái)象限的對(duì)側(cè)放入水中。記錄大鼠在目標(biāo)象限停留的時(shí)間，并計(jì)算其占總時(shí)間百分比，百分比越高，大鼠的抑郁狀態(tài)越輕。

1.6 ERK1/2和pERK1/2的表達(dá)檢測(cè) 將大鼠斷頭處死后，迅速在冰上剝離大腦，置于冰浴的PBS中，分離兩側(cè)海馬組織，按組收集海馬組織，稱重。取部分海馬組織稱重后加入適當(dāng)體積的裂解液，勻漿裂解20 min，以12 000轉(zhuǎn)/min離心20 min，吸取上清液即為蛋白提取液。參照BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)行蛋白定量。經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、顯色，掃描各Western-blot條帶并分析，以目的條帶灰度與內(nèi)參條帶灰度的比值表示ERK1/2、pERK1/2的表達(dá)量。

1.7 BDNF水平檢測(cè) 將大鼠斷頭處死后，迅速在冰上剝離大腦，置于冰浴的PBS中，分離兩側(cè)海馬組織，按組收集海馬組織，稱重。取部分海馬組織按重量加入適量體積的PBS(1 ml/100 mg)，迅速勻漿，以2000～3000轉(zhuǎn)/min離心20 min，取上清為測(cè)試樣品，并進(jìn)行蛋白定量。參照ELISA檢測(cè)說(shuō)明書(shū)，逐步加入相應(yīng)試劑和樣品，并配置標(biāo)準(zhǔn)曲線。待加入終止液后，迅速在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值，檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm。將OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線核對(duì)，并與蛋白定量結(jié)果校準(zhǔn)，得到相應(yīng)樣品的BDNF含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11．5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。兩組以上數(shù)據(jù)采用單因素方差分析或多因素方差分析進(jìn)行比較，兩兩數(shù)據(jù)比較前進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊性則采用SNK檢驗(yàn)，方差不齊則采用 Dunnett T3檢驗(yàn)。α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 強(qiáng)迫游泳 漂浮不動(dòng)時(shí)間經(jīng)雙因素方差分析顯示，造模分組因素方差分析(F=9.987，P=0.003)、藥物劑量分組因素方差分析(F=4.142，P=0.023)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。漂浮不動(dòng)時(shí)間多重比較結(jié)果，D組與A、B、C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，F(xiàn)組與D組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而E組與D、F組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A、B、C組之間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 運(yùn)動(dòng)距離經(jīng)雙因素方差分析顯示，造模分組因素方差分析(F=12.184，P=0.001)、藥物劑量分組因素方差分析(F=3.287，P=0.047)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多重比較結(jié)果，D組與A、B、C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，F(xiàn)組與D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而E組與D組、F組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A、B、C組之間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

2.3 水迷宮實(shí)驗(yàn) 目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比經(jīng)雙因素方差分析顯示，造模分組因素方差分析(F=8.336，P=0.006)、藥物劑量分組因素方差分析(F=3.532，P=0.038)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多重比較結(jié)果，D組與A、B、C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，F(xiàn)組與D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而E組與D組、F組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A、B、C組之間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，見(jiàn)表1。

2.4 ERK1/2和pERK1/2的表達(dá) ERK1/2的造模分組因素方差分析(F=0.098，P=0.756)、藥物劑量分組因素方差分析(F=0.118，P=0.889)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。pERK1/2的造模分組因素方差分析(F=29.812，P=0.000)、藥物劑量分組因素方差分析(F=3.881，P=0.031)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。pERK1/2表達(dá)的多重比較結(jié)果，D組與A、B、C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，F(xiàn)組與D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而E組與D組、F組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A、B、C組之間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1、圖1。

表1 6組大鼠行為學(xué)指標(biāo)、海馬BDNF水平、ERK 1/2、pERK 1/2測(cè)定結(jié)果(±s)

表1 6組大鼠行為學(xué)指標(biāo)、海馬BDNF水平、ERK 1/2、pERK 1/2測(cè)定結(jié)果(±s)

注:BDNF:腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，ERK 1/2:細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶，pERK1/2:磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶;A組:生理鹽水組，B組:低劑量迷迭香酸(RA)組，C組:高劑量RA組，D組:CUS+生理鹽水組;E組:CUS+低劑量RA組，F(xiàn)組:CUS+高劑量RA 組;與 A 組比較，a P ＜0．05;與 B組比較，c P ＜0．05;與 C 組比較，e P ＜0．05;與 D 組比較，g P ＜0．05

組別 鼠數(shù) 漂浮不動(dòng)時(shí)間百分比(%)運(yùn)動(dòng)距離(mm)目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比(%)ERK1/2表達(dá)比率pERK1/2表達(dá)比率BDNF水平(ng/mg)A 組 8 18．62 ±2．43 2909．18 ±242．45 23．81 ±3．25 0．81±0．08 1．25 ±0．08 0．87 ±0．07 B 組 8 16．98 ±2．27 2676．07 ±226．66 21．98 ±3．41 0．78 ±0．07 1．18 ±0．07 0．82 ±0．08 C 組 8 17．92 ±2．36 3033．90 ±238．28 24．38 ±3．19 0．79 ±0．08 1．19 ±0．08 0．90 ±0．07 D 組 8 28．89 ±2．42ace 1808．93 ±240．89ace 11．51 ±3．36ace 0．77 ±0．08 0．64 ±0．08ace 0．52 ±0．07ace E 組 8 24．45 ±2．35 2098．68 ±242．45 18．24 ±3．29 0．78 ±0．10 0．76 ±0．10 0．67 ±0．08 F 組 8 18．23 ±2．33g 2737．46 ±236．64g 20．47 ±2．32g 0．79 ±0．09 0．86 ±0．09g 0．77 ±0．08g

圖1 不同處理組對(duì)海馬ERK1/2和pERK1/2表達(dá)水平的影響

2.5 ELISA檢測(cè)BDNF水平

造模分組因素方差分析(F=12．322，P=0．001)，藥物劑量分組因素方差分析(F=3．580，P=0．037)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BDNF水平多重比較結(jié)果，D組與A、B、C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，F(xiàn)組與D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，而E組與D、F組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，A、B、C組之間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，見(jiàn)表1。

3 討論

RA是一種水溶性的聚苯化合物，存在于許多植物提取物中。目前研究發(fā)現(xiàn)，RA除了具有抗氧化效應(yīng)［8］和抗炎活性［9］以外，還可以部分緩解動(dòng)物的抑郁樣行為［10］。但是，這一抗抑郁效應(yīng)尚缺乏更有力的證據(jù)，而且其作用機(jī)制還不清楚。相對(duì)于急性應(yīng)激如強(qiáng)迫游泳抑郁動(dòng)物模型而言，CUS抑郁模型可以更好地模擬抑郁發(fā)生的社會(huì)和環(huán)境應(yīng)激，而且可以更好地篩查抗抑郁藥及其作用機(jī)制［11-12］。本實(shí)驗(yàn)初步觀察了RA對(duì)CUS抑郁模型大鼠的抑郁樣行為及對(duì)海馬的ERK信號(hào)通路磷酸化和BDNF表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)提示CUS可以導(dǎo)致大鼠漂浮時(shí)間的延長(zhǎng)，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)提示CUS可以導(dǎo)致大鼠運(yùn)動(dòng)能力受損，而水迷宮實(shí)驗(yàn)提示CUS可以導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損。這些結(jié)果都表明CUS大鼠在經(jīng)歷了一系列持續(xù)、隨機(jī)的應(yīng)激事件后表現(xiàn)出了相應(yīng)的抑郁樣行為，進(jìn)而表明CUS抑郁模型作為一個(gè)已經(jīng)成熟建立起來(lái)的動(dòng)物模型，很好地模擬了與抑郁癥相關(guān)的核心癥狀。與之相對(duì)應(yīng)的，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)提示高劑量RA(10 mg/kg)可以緩解CUS所致漂浮時(shí)間延長(zhǎng)的現(xiàn)象，而低劑量無(wú)明顯作用;曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)提示高劑量RA可以緩解CUS所致運(yùn)動(dòng)距離減少的現(xiàn)象，而低劑量無(wú)明顯作用;而水迷宮實(shí)驗(yàn)提示高劑量RA可以緩解CUS所致記憶能力減弱的現(xiàn)象，而低劑量無(wú)明顯作用。上述結(jié)果提示高劑量RA具有明確抗抑郁效應(yīng)，而低劑量RA無(wú)顯著抗抑郁效應(yīng)。

抑郁癥的主要表現(xiàn)為情緒以及認(rèn)知功能受損，因此，與情緒以及認(rèn)知相關(guān)的腦區(qū)一直是研究抑郁癥發(fā)病與治療機(jī)制所關(guān)注的熱點(diǎn)。海馬是調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)和記憶的重要腦區(qū)之一，其被包埋于復(fù)雜的神經(jīng)結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)中間，這些結(jié)構(gòu)(包括杏仁核、前扣帶回、眶額和背外側(cè)皮質(zhì)、紋狀體、內(nèi)側(cè)顳葉等)都與抑郁癥的發(fā)病有關(guān)［13-16］。根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型、抑郁癥患者大腦形態(tài)學(xué)和尸檢改變、影像學(xué)、抗抑郁藥物治療作用等方面的證據(jù)，以及抑郁癥發(fā)生和轉(zhuǎn)歸過(guò)程中海馬等大腦結(jié)構(gòu)出現(xiàn)的顯著形態(tài)變化(包括海馬等區(qū)域突觸的重塑、膠質(zhì)細(xì)胞的改變、神經(jīng)元興奮性改變、神經(jīng)元數(shù)量的變化以及神經(jīng)元苔蘚纖維發(fā)芽的變化等)，研究者認(rèn)為海馬的結(jié)構(gòu)及可塑性變化可能是抑郁癥發(fā)病及抗抑郁藥物作用的重要環(huán)節(jié)［17-21］。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察了海馬BDNF的表達(dá)水平和ERK的磷酸化程度，結(jié)果顯示，CUS可以導(dǎo)致大鼠海馬BDNF和pERK1/2表達(dá)減少。

高劑量 RA可以緩解 CUS所致 BDNF和pERK1/2表達(dá)減少的現(xiàn)象，而低劑量無(wú)明顯作用。此外，A、B、C組之間的行為學(xué)指標(biāo)和 BDNF、pERK1/2表達(dá)情況均無(wú)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明RA干預(yù)并未對(duì)正常對(duì)照大鼠造成行為學(xué)的影響，也未影響正常大鼠海馬的BDNF、pERK1/2表達(dá)。

綜上所述，RA對(duì)CUS抑郁模型大鼠有一定的抗抑郁效應(yīng)，這一作用可能與其調(diào)節(jié)抑郁大鼠海馬BDNF的水平和ERK1/2磷酸化程度有關(guān)。

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Effect and Mechanism of Rosmarinic Acid on Depressive-like Behaviors in Rats

JIN Xiang1a，LIU Peng1b，ZHANG Ya-hong2(1．Naval General Hospital，a．DepartmentofMedical Psychology，b．Department of Hepatobiliary Surgery，Beijing 100048，China;2，Department of Psychosomatic Medicine，Xijing Hospital，the Fourth Military Medical University，Xi＇an 710032，China)

ObjectiveTo explore the anti-depressive effects of Rosmarinic Acid(RA)and itsmechanisms on depressed ratswith chronic unpredictable stress(CUS)．MethodsThe ratswere randomly divided into six groups(n=16 for each group):group A(physiological saline)，group B(low-dose RA)，group C(high-dose RA)，group D(CUS+physiological saline)，group E(CUS+low-dose RA)and group F(CUS+high-dose RA)．After the interventions，part of the established ratmodels(n=8 for each group)underwent open-field and forced swimming tests，and then hippocampal tissue protein sampleswere taken out．Brain-derived neurotrophic factor(BDNF)levelswere detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)，and levels of extracellular regulated protein kinase(ERK1/2)and phosphorylation extracellular regulated protein kinase(pERK1/2)were detected byWestern-blotmethod．The remaining animals(n=8 for each group)underwent the Morriswatermaze(MWM)test．ResultsThe differences in results of ethology test，ELISA detection for hippocampal tissue，albumen quantitations of pERK1/2 and ERK1/2 and retention percentage of target quadrant in watermaze experiment in group D were statistically significant(P ＜0．05)，and the differenceswere also statistically significant between group F and D(P ＜0．05)，but there was no statistical significance between group E with group D and F(P ＞0．05)，and the differences between group A，B and C showed no statistical significances(P ＞0．05)．ConclusionCUS ratmodels have depression-like behaviors，and RA can have an antidepressant-like effect．The antidepressant-like effectof RAmay be achieved by increasing ERK1/2 phosphorylation level in hippocampus astroglia cells and improving BDNF releasing．

Rosmarinic acid;Depression;Behavioral disciplines and activities;Rat，sprague-dawley

R749．42;R-332

A

2095-140X(2014)05-0014-05

10．3969/j．issn．2095-140X．2014．05．004

100048北京，海軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)心理科(晉翔)，肝膽外科(劉鵬);710032西安，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院身心科(張雅紅)

劉鵬，E-mail:liupengmail100@163．com

2013-12-10 修回時(shí)間:2014-02-26)

·論著·