黃珍，陳敏，曾煒煒，李原

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院、育英兒童醫(yī)院 兒童血液科，浙江 溫州 325027）

溫州地區(qū)急性白血病兒童CYP3A5基因多態(tài)性研究

黃珍，陳敏，曾煒煒，李原

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院、育英兒童醫(yī)院 兒童血液科，浙江 溫州 325027）

目的：探討溫州地區(qū)漢族人群細(xì)胞色素P450-3A5（CYP3A5）基因多態(tài)性與兒童急性白血?。ˋL）易感性的關(guān)系。方法：采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RFLP）技術(shù)和PCR產(chǎn)物測序方法，檢測119例AL患兒（病例組）和106例對照兒童（對照組）的CYP3A5-6986位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率，并結(jié)合既往發(fā)表的文獻(xiàn)進(jìn)行溫州與蘇州不同地區(qū)間的比較。結(jié)果：①對照組與急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）組、急性髓細(xì)胞白血病（AML）組的基因型分布差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。②病例組G位點(diǎn)的基因頻率高于對照組（P＜0.05）。③按性別因素分層分析，兒童白血病的遺傳易感性存在性別差異。④溫州、蘇州兩個地區(qū)AL患兒的基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：CYP3A5基因6986位點(diǎn)AG多態(tài)性可能與中國南方漢族人群男性白血病患兒的遺傳易感性相關(guān)聯(lián)。

白血病；兒童；基因多態(tài)性；易感性；細(xì)胞色素P450-3A5

急性白血?。╝cute leukemia，AL）是兒童癌癥中最常見的疾病。研究顯示，白血病是一種遺傳與環(huán)境因素相互作用且共同參與發(fā)病的多因子疾病，存在一定的遺傳易感性。而體內(nèi)代謝酶系統(tǒng)的差異與白血病易感性密切相關(guān)[1-2]。細(xì)胞色素P450-3A5（CYP3A5）是CYP450中的一個亞家族成員，參與多種臨床常用化療藥物及環(huán)境毒素的代謝反應(yīng)。研究表明，CYP3A5個體基因水平的差異與藥物代謝之間存在密切的聯(lián)系，既影響腫瘤的易感性也影響其對藥物的反應(yīng)。我們對119例溫州地區(qū)漢族AL患兒進(jìn)行CYP3A5基因6986位點(diǎn)的多態(tài)性檢測，探討溫州地區(qū)漢族人群CYP3A5基因多態(tài)性與兒童AL易感性的關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 研究對象 病例組選自2009年1月至2013年7月在本院住院的AL患者119例，其中男72例，女47例，平均年齡（4.9±3.7）歲。所有患兒均參照中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會血液學(xué)組制定的診治指南[3]予確診。其中急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）81例，急性髓細(xì)胞白血?。╝cutemyelocytic leukemia，AML）38例；初治病例36例，復(fù)治病例83例。對照組來自同期我院健康體檢兒童，共106例，其中男78例，女28例，平均年齡（5.7±3.2）歲。病例組與對照組的年齡、性別均衡可比。所有入組的AL患兒及對照組均為中國溫州地區(qū)漢族人。所有患兒家屬均已簽署知情同意書，并報(bào)醫(yī)院倫理委員會同意批準(zhǔn)。

1.2 方法 應(yīng)用聚合酶鏈-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)及PCR產(chǎn)物測序法，檢測患兒的CYP3A5-6986位點(diǎn)基因型分布[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理所有數(shù)據(jù)。x2檢驗(yàn)比較各基因型頻率在病例組與對照組之間的差異。用比值比（odds ratio，OR）及其95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）表示各基因型發(fā)生AL的風(fēng)險(xiǎn)度。溫州、蘇州兩個地區(qū)間CYP3A5基因各亞型頻率的比較采用Kruskl-Wallis檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CYP3A5基因6986位點(diǎn)測序結(jié)果 119例AL患兒中有73例表現(xiàn)為CYP3A5 GG，29例為CYP3A5 AG，17例為CYP3A5 AA基因型。CYP3A5-6986 GG、AG、AA基因型測序分析見圖1-3。

圖1 CYP3A5 AA基因型測序圖（箭頭處只有A一個峰）

圖2 CYP3A5 GG基因型測序圖（箭頭處只有G一個峰）

圖3 CYP3A5 AG基因型測序圖（同時(shí)出現(xiàn)二個峰，見箭頭處）

2.2 CYP3A5-6986多態(tài)性位點(diǎn)各基因型、等位基因在病例組和對照組中的分布 CYP3A5-6986位點(diǎn)AA基因型的比例在ALL和AML組中均明顯較低，與對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ALL、AML組中G位點(diǎn)的等位基因頻率與對照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 溫州地區(qū)CYP3A5基因6986位點(diǎn)多態(tài)性基因型分布及等位基因頻率

2.3 CYP3A5基因多態(tài)性與兒童AL發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

攜帶CYP3A5-6986 G等位基因使兒童ALL和AML發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)分別升高至對照組的2.06和2.37倍（見表2）。

表2 CYP3A5-6986位點(diǎn)基因多態(tài)性與兒童白血病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系 n（%）

2.4 按性別分層分析基因多態(tài)性與兒童白血病遺傳易感性的關(guān)系 按性別分層后，攜帶CYP3A5-6986 G等位基因的男性患兒發(fā)生白血病的風(fēng)險(xiǎn)為不攜帶者的4.09倍（P＜0.05），見表3。

表3 按性別分層分析CYP3A5-6986位點(diǎn)基因多態(tài)性與兒童白血病的關(guān)系

2.5 溫州與蘇州兩個地區(qū)AL患兒CYP3A5-6986位點(diǎn)基因多態(tài)性的比較 筆者曾對蘇州地區(qū)120例AL患兒的CYP3A5基因多態(tài)性進(jìn)行研究[4]。對表1和表4進(jìn)行對比后發(fā)現(xiàn)，溫州、蘇州白血病患兒的AA基因型比例均較對照組降低，兩個地區(qū)的基因型分布、G位點(diǎn)等位基因頻率在ALL組和AML組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 蘇州地區(qū)CYP3A5基因6986 G/A多態(tài)性基因型分布及等位基因頻率

3 討論

隨著白血病患者發(fā)病率的逐年上升，藥物代謝酶基因多態(tài)性對環(huán)境致癌的影響日益引起人們的關(guān)注[3]。CYP3A5是人體內(nèi)最主要的CYP450酶，參與苯、黃曲霉素等多種致癌劑、化學(xué)毒性物質(zhì)的代謝。研究[5-6]發(fā)現(xiàn)，CYP3A5酶活性存在顯著的個體差異，位于CYP3A5基因第3號內(nèi)含子的6986密碼子是決定CYP3A5表達(dá)及其活性的關(guān)鍵因素。

對于CYP3A5基因多態(tài)性的研究，目前國內(nèi)主要集中于肝臟、腎臟疾病患者移植后免疫抑制劑的使用方面，以及成人骨肉瘤、小細(xì)胞性肺癌等疾病。而在兒童白血病中，該基因型的多態(tài)性研究相對較少，該基因多態(tài)性是否具有地域差異目前尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)對照組兒童的CYP3A5 G等位基因頻率為56.1%，同Li等[7]在漢族人群中所進(jìn)行的研究結(jié)果近似，但明顯低于荷蘭高加索人（為91.7%）[8]，高于非洲裔美國人（為47.5%），符合CYP3A5*3等位基因頻率具有種群分布的特點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)ALL、AML組的CYP3A5-6986位點(diǎn)AA基因型比例分別為14.8%和13.2%，較對照組（為26.4%）明顯低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ALL和AML中G等位基因攜帶頻率均高于對照組，與Pakakasama等[9]報(bào)道的結(jié)果一致。因此我們推測CYP3A5-6986 G多態(tài)性可能與AL的易感性相關(guān)，攜帶G等位基因型將增加AL的易感性。原因考慮與下列因素有關(guān)：攜帶CYP3A5 G等位基因?qū)笴YP3A5的表達(dá)降低，CYP3A5酶活性相應(yīng)降低，導(dǎo)致對外界環(huán)境毒性物質(zhì)的解毒能力下降，從而誘發(fā)白血病。但也有不同的觀點(diǎn)，如Liu等[10]研究了188例AML患者CYP3A5的基因多態(tài)性，認(rèn)為基因多態(tài)性不會增加AML的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；沈莉菁等[11]認(rèn)為CYP3A5-6986 G基因突變與AL易感性可能無關(guān)。分析其原因考慮可能與下列因素有關(guān)：①Liu等進(jìn)行的該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中CYP3A5 GG基因頻率為45.2%，低于本次實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)[12]報(bào)道的漢族人群CYP3A5 GG的基因頻率。②沈莉菁、Liu等的研究對象均為成人，而本實(shí)驗(yàn)的研究對象為兒童。兒童的生長激素水平較高，生長激素對CYP3A5的表達(dá)會產(chǎn)生影響。Sinues等[13]研究報(bào)道，生長激素缺乏的兒童CYP3A5活性明顯高于對照組。用重組人生長激素替代治療后，CYP3A5的活性較前明顯降低（P=0.003）。因此與成人相比，即使兩者基因型相同，兒童的CYP3A5活性較成人低，因此對環(huán)境致癌物也更為敏感，從而成為白血病的易感人群。

本研究按性別因素進(jìn)行分層分析，發(fā)現(xiàn)男性兒童CYP3A5-6986 G導(dǎo)致的AL的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)為4.09（2.37～7.16），而在女性兒童中未發(fā)現(xiàn)此相關(guān)性，提示兒童白血病的遺傳易感性方面可能存在性別差異。這可能與雄甾烷受體和孕烷X受體參與對CYP3A基因的調(diào)控有關(guān)。但與臨床上兒童AL男性發(fā)病率高于女性這一現(xiàn)象是否存在一定聯(lián)系，有待進(jìn)一步研究。

對溫州、蘇州這兩個地區(qū)的AL患兒CYP3A5-6986位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，基因型分布、G等位基因頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但有一點(diǎn)需注意的是，溫州地區(qū)雜合突變型（CYP3A5-A/G）比例相對偏高，雖經(jīng)檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但這種差別應(yīng)引起重視。使用同樣的化療方案，可能會影響溫州地區(qū)白血病患兒化療療效，必要時(shí)可監(jiān)測CYP3A5酶活性或化療藥物濃度，為制定兒童個體化給藥方案提供科學(xué)依據(jù)。

綜上所述，溫州地區(qū)漢族AL患兒CYP3A5-6986位點(diǎn)的基因多態(tài)性可能與AL發(fā)病相關(guān)。本研究病例數(shù)不多，僅是對CYP3A5基因與兒童AL易感性方面進(jìn)行初步探討。對于兒童AL的環(huán)境與基因交互作用，有待擴(kuò)大樣本量及延長觀察時(shí)間進(jìn)一步研究。

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（本文編輯：丁敏嬌）

The relationship between the CYP3A5 genetic polymorphisms and susceptibility to childhood acute leu-kemia

HUANG Zhen, CHEN Min, ZENG Weiwei, LI Yuan.
Department of Hematology, Yuying Children’s Hospital, the Second Affliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325027

Objective:To study the relationship of CYP3A5-6986A/G polymorphism and acute leukemia in Han population of southern Chinese.Methods:The methods of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism and PCR sequence were used, the polymorphism of the CYP3A5 gene was detected in both 119 acute leukemia patients and 106 control subjects.Results:①The differences in the distribution of genotype of CYP3A5-6986A/G between the patients and the controls were signifcant. ②The genetic frequency of G allele in ALL and in AML were all higher than that in controls. ③The results by gender stratifcation showed that the boy individuals with CYP3A5 variant genotype were more susceptible to childhood leukemia with a 2.65-fold increased risk compared to the individuals with wild genotype. ④There was no variation of CYP3A5-6986A/G polymorphism on acute leukemia patients between Wenzhou and Suzhou area.Conclusion:The CYP3A5 genetic polymorphism may be associated with the susceptibility of acute leukemia in Han population of male southern Chinese.

leukemia; children; genetic polymorphism; susceptibility; cytochrome P450-3A5

R725.5

A

1000-2138（2014）10-0733-04

2013-11-27

溫州市科技局科研基金資助項(xiàng)目（Y20080180）。

黃珍（1979-），女，浙江衢州人，主治醫(yī)師，碩士。