李 薇，黃春梅，吳 衛(wèi)，胡瑩瑩，陳 倩，郭 野，張玉娟，崔 巍

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科， 北京 100730

·論 著·

糖化血紅蛋白濃度的短期生物學(xué)變異

李 薇，黃春梅，吳 衛(wèi)，胡瑩瑩，陳 倩，郭 野，張玉娟，崔 巍

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科， 北京 100730

目的 研究糖化血紅蛋白(glycated hemoglobin-A1c,HbA1c)濃度短期內(nèi)的生物學(xué)變異。 方法 30名健康志愿者在第1天、第3天和第5天的上午8∶00、中午12∶00和下午4∶00分別采集靜脈血，進(jìn)行HbA1c濃度的測定。分析計(jì)算HbA1c濃度的個(gè)體內(nèi)變異(within-subject coefficient of variations, CVI)、個(gè)體間變異(between-subject coefficient of variations, CVG)、分析變異(analytical coefficient of variations, CVA)、個(gè)體指數(shù)(index of individuality，II)和參考變化值(reference change value，RCV)。結(jié)果 總體、女性及男性CVI分別為1.39%、1.49%和1.32%；CVG分別為2.65%、2.33%和2.90%；CVA均為0.6%；II分別為0.5、0.6和0.5；95% RCV分別為4.22%、4.45%和4.02%；99% RCV分別為5.19%、5.86%和5.29%。HbA1c上午8∶00、中午12∶00和下午4∶00的日內(nèi)變異差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.28)；第1天、第3天和第5天的周內(nèi)日間變異差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.31)；男女性別間差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.18)。結(jié)論HbA1c濃度的日內(nèi)和周內(nèi)日間生物學(xué)變異很小，結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定，男性和女性之間亦無明顯差異。

糖化血紅蛋白；生物學(xué)變異

MedJPUMCH,2014,5(3):270-272

糖化血紅蛋白(glycated hemoglobin-A1c,HbA1c)是血紅蛋白與糖類經(jīng)非酶促反應(yīng)而形成的結(jié)合產(chǎn)物，其合成過程是緩慢而不可逆的，與血糖濃度成正比，且不受一次偶爾血糖升高或降低的影響。HbA1c的這一特點(diǎn)決定其在糖尿病監(jiān)測中的重要意義，它可以反映測定前2～3個(gè)月內(nèi)機(jī)體平均血糖水平，是糖尿病患者血糖總體控制的監(jiān)測指標(biāo)，可以指導(dǎo)對(duì)血糖的調(diào)整。因此，近年來美國糖尿病協(xié)會(huì)(American Diabetes Association, ADA)和世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO)都已經(jīng)建議將HbA1c作為優(yōu)于糖耐量的糖尿病診斷指標(biāo)。

目前研究證實(shí)HbA1c可以穩(wěn)定可靠地反映出檢測前一段時(shí)間內(nèi)人體的平均血糖水平，但有關(guān)HbA1c濃度在一天內(nèi)不同時(shí)間甚至一周內(nèi)的變化幅度，尚罕見報(bào)道。隨著HbA1c在糖尿病監(jiān)測中的意義日益突出，有必要了解HbA1c的生物學(xué)變異情況，為更好地運(yùn)用HbA1c監(jiān)測血糖提供更多的實(shí)驗(yàn)室參考數(shù)據(jù)。本研究旨在對(duì)HbA1c濃度的短期生物學(xué)變異進(jìn)行分析。

對(duì)象和方法

對(duì)象

2013年8月至9月招募在北京協(xié)和醫(yī)院工作的健康志愿者30名，其中男性17名，女性13名，年齡23～34歲，中位年齡24歲。通過面談和健康問卷調(diào)查，確定所有入選志愿者均未服用任何藥物，無吸煙、飲酒等不良習(xí)慣；并通過血常規(guī)、血糖、腎功能、肝功能等常規(guī)生理常數(shù)檢查，確定入選志愿者為表觀健康者。志愿者抽血當(dāng)日無劇烈運(yùn)動(dòng)，女性未在月經(jīng)期和妊娠期，研究期間保持規(guī)律的生活習(xí)慣。所有入選志愿者均簽署知情同意書。

樣本采集和處理

研究對(duì)象每次采血前靜坐10～15 min后，抽取靜脈血2 ml于EDTA-K3抗凝的真空采血管中。采血時(shí)間點(diǎn)分別為研究第1天、第3天和第5天的上午8∶00(空腹)、中午12∶00、下午4∶00，每名對(duì)象一共被采集9次樣本。標(biāo)本采集后于室溫保存，2～4 h內(nèi)測定。

檢測方法

儀器與試劑：Variant Ⅱ Yurbo糖化血紅蛋白分析儀及其原裝試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均為美國Bio-Rad公司產(chǎn)品。

HbA1c測定：嚴(yán)格按照儀器和試劑標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢測標(biāo)本，所用儀器的性能指標(biāo)、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)均符合臨床檢測需求。標(biāo)本均采用同一臺(tái)儀器使用同批號(hào)試劑且在相同時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行檢測。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件中的巢式方差分析計(jì)算HbA1c濃度的個(gè)體內(nèi)變異(within-subject coefficient of variations, CVI)和個(gè)體間變異(between-subject coefficient of variations, CVG)。采用Excel 2003計(jì)算分析變異(analytical coefficient of variations, CVA)、個(gè)體指數(shù)(index of individuality，II)、參考變化值(reference change value，RCV)。CVA通過分別計(jì)算高值和低值質(zhì)控品的10個(gè)獨(dú)立檢測值而獲得。II計(jì)算公式為II=CVI/CVG。RCV計(jì)算公式為RCV=21/2×Z×(CVA2+CVI2)1/2，當(dāng)Z值為1.96和2.58時(shí)，分別代表95%和99%的概率。均值之間的兩兩比較采用One-way ANOVA檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

CVI、CVG、CVA、II和RCV

本研究總體、女性及男性的CVI分別為1.39%、1.49%和1.32%；CVG分別為2.65%、2.33%和2.90%；CVA值均為0.6%；II值分別為0.5、0.6和0.5；95% RCV分別為4.22%、4.45%和4.02%；99% RCV分別為5.19%、5.86%和5.29%。提示CVI、CVG和CVA的變化不大，差異較小。

日內(nèi)變異、日間變異及性別間差異

HbA1c的日內(nèi)變異：上午8∶00所測HbA1c均值為(5.35±0.15)%，中午12∶00為(5.35±0.16)%，下午4∶00為(5.32±0.16)%，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的檢測值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.28)。提示HbA1c濃度的日內(nèi)變異很小，結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。

HbA1c的日間變異：研究第1天所測HbA1c均值為(5.36±0.17)%，第3天為(5.34±0.16)%，第5天為(5.32±0.15)%，3日間的檢測值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.31)。提示HbA1c濃度的日間變異很小，結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。

HbA1c的性別間差異：男性HbA1c均值為(5.37±0.17)%，女性為(5.32±0.14)%，男女間的檢測值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.18)。提示HbA1c濃度的性別間差異很小。

討 論

個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異是決定實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的重要因素之一。本研究通過嚴(yán)格控制分析前和分析中的各項(xiàng)影響因素，在確保分析前變異和分析變異最小化的前提下，分析了HbA1c的短期生物學(xué)變異。本研究參考了Fraser等[1]和Harris[2]的計(jì)算方法，通過研究健康人群日內(nèi)和周內(nèi)的HbA1cCVI、CVG和CVA，并計(jì)算Ⅱ和RCV，從而確定參考區(qū)間的實(shí)用性和判斷連續(xù)檢測結(jié)果之間是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，探討短期生物學(xué)變異對(duì)HbA1c檢測及結(jié)果的影響。目前關(guān)于HbA1c生物學(xué)變異的研究罕見報(bào)道[3- 5]，而關(guān)于中國人群的HbA1c生物學(xué)變異研究尚未見報(bào)道。Ucar等[3]研究的是相對(duì)長期的生物學(xué)變異，即每個(gè)月進(jìn)行一次樣本采集，連續(xù)監(jiān)測3個(gè)月。該研究總體、女性及男性的CVI分別為1.17%、1.23%和1.04%；CVG分別為5.58%、5.75%和4.75%；CVA分別為1.60%、1.68%、1.43%；Ⅱ值分別為0.35、0.36和0.37；95% RCV分別為5.45%、5.76%和4.87%。本研究與之相比，HbA1c濃度的總體、女性及男性的CVI略高，而總體、女性及男性的CVG均較低，這可能與觀察時(shí)限和人種不同有關(guān)。本研究HbA1c濃度的Ⅱ值和Ucar等[3]報(bào)道的Ⅱ值差異較大，這可能與所采用的統(tǒng)計(jì)方法不同有關(guān)，后者Ⅱ的計(jì)算公式為 (CVA2+CVI2)1/2/CVG，而本研究采用的是目前常用的計(jì)算方法(Ⅱ=CVI/CVG)。當(dāng)Ⅱ值小于0.6時(shí)，提示認(rèn)為傳統(tǒng)以正常人群為基礎(chǔ)的參考范圍對(duì)個(gè)體檢測值異常與否的判斷能力非常有限；在這種情況下，連續(xù)隨訪患者的結(jié)果可能比使用參考范圍判斷更有效。相反地，當(dāng)Ⅱ大于1.4時(shí)，則認(rèn)為使用以正常人群為基礎(chǔ)的參考范圍判斷個(gè)體檢測值的異常與否很有效[2]。盡管本研究與Ucar等[3]報(bào)道的Ⅱ值存在差異，但均小于0.6，說明當(dāng)個(gè)體的指標(biāo)發(fā)生變化時(shí)，均不能用HbA1c的參考范圍來判斷相應(yīng)變化有無臨床意義。RCV是用來判斷某一個(gè)體指標(biāo)連續(xù)兩次檢測結(jié)果之間的差異(升高或降低)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)。根據(jù)RCV的計(jì)算公式，筆者計(jì)算出了HbA1c的RCV，95%(P<0.05)和99%(P<0.01)水平的概率分別代表差異具有顯著性和高度顯著性[6]。如果計(jì)算兩次結(jié)果之間的變異值落在相應(yīng)范圍內(nèi)，可認(rèn)為差異是由固有分析變異和個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異造成，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RCV是通過CVA和CVI計(jì)算得到，本研究RCV小于Ucar等[3]的報(bào)道，原因可能是本研究的CVA明顯小于該研究的CVA所致。

綜上所述，HbA1c的日內(nèi)和周內(nèi)的生物學(xué)變異較小，血液濃度相對(duì)穩(wěn)定，男性和女性之間也不存在差異。說明HbA1c與抽血時(shí)間、抽血時(shí)是否空腹沒有關(guān)系，不受進(jìn)餐時(shí)間以及短期生活方式改變的影響，所反映的血糖狀況相對(duì)穩(wěn)定，對(duì)于糖尿病控制是一個(gè)良好的監(jiān)測指標(biāo)。

[1]Fraser CG, Harris EK. Generation and application of data on biological variation in clinical chemistry[J]. Crit Rev Clin Lab Sci,1989,27:409- 437.

[2]Harris KH. Effects of intra- and interindividual variation on the appropriate use of normal ranges[J]. Clin Chem,1974,20:1535- 1542.

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[5]Rohlfing C, Wiedmeyer HM, Little R, et al. Biological variation of glycohemoglobin[J]. Clin Chem,2002,48:1116- 1118.

[6]Fraser CG. Biological variation: from principles to practice[M]. Washington DC: AACC Press, 2001.

Short-term Biological Variation of Glycated Hemoglobin-A1c

LI Wei, HUANG Chun-mei, WU Wei, HU Ying-ying, CHEN Qian, GUO ye, ZHANG Yu-juan, CUI Wei

Department of Clinical Laboratory, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences &Peking Union Medical College, Beijing 100730, China

CUI Wei Tel: 010-69159713, E-mail:cuiw@pumch.cn

Objective To study the short-term biological variation of glycated hemoglobin-A1c (HbA1c). Methods Blood samples from 30 healthy volunteers [17 men and 13 women; aged 23-34 years (median, 24 years)] were drawn at 8∶00 am, 12∶00 pm， and 4∶00 pm each day for 3 days (days 1, 3 and 5), and HbA1cvalues were measured in duplicate by high performance liquid chromatography (Variant Ⅱ Yurbo Analyser, Bio-Rad). Results The within-subject coefficient of variations (CVI) of total, male, and female subjects in this study were 1.39%, 1.49%, and 1.32%, respectively. The between-subject coefficient of variations (CVG) of the three groups mentioned above were 2.65%, 2.33%, and 2.90%, respectively. The analytical coefficient of variations (CVA) of these three groups were all 0.6%. The index of individuality (II) of the three groups were 0.5, 0.6, and 0.5, respectively. The 95% probabilities of reference change value (RCV) of the three groups were 4.22%, 4.45%, and 4.02%, respectively. The 99% probabilities of RCV were 5.19%, 5.86%, and 5.29%, respectively. Furthermore, intra- and inter-day biological variations of HbA1cwere fairly constant among the population examined(P=0.28,0.31), and no significant difference was observed between the male and female participants(P=0.18). Conclusions The short-term CVIand CVGof HbA1cin healthy individuals are minimal. The laboratory findings are quite constant and homogeneous for HbA1cin short term and between genders.

glycated hemoglobin-A1c; biological variation

崔 巍 電話：010-69159713，E-mail：cuiw@pumch.cn

R446

A

1674-9081(2014)03-0270-03

10.3969/j.issn.1674-9081.2014.03.005

2014- 04- 30)