劉 科, 劉盛來(lái), 楊 林, 邱毅文, 鄺少松, 王 剛

(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 佛山 528248)

不同性別BALB/c裸小鼠血液學(xué)及臟器系數(shù)觀測(cè)

劉 科, 劉盛來(lái), 楊 林, 邱毅文, 鄺少松, 王 剛

(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 佛山 528248)

目的 測(cè)定SPF級(jí)BALB/c裸小鼠血液學(xué)參數(shù)，臟器重量、臟器系數(shù)，并進(jìn)行性別間比較。方法 選取10周齡SPF級(jí)BALB/c裸小鼠80只，雌雄各半。40只采集血液，運(yùn)用血液分析儀測(cè)定血液常規(guī)指標(biāo)；40只活體稱重，采集血液，運(yùn)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血生化指標(biāo)，并采集臟器測(cè)定臟器重量，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果 雌雄裸小鼠測(cè)定項(xiàng)目比較，①雄性白細(xì)胞數(shù)、平均血紅蛋白量、血小板、淋巴細(xì)胞顯著高于雌性、紅細(xì)胞顯著低于雌性(P＜0.01)，紅細(xì)胞平均體積、血小板壓積與雌性差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。②雄性堿性磷酸酶、肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶顯著高于雌性(P＜0.01)，白蛋白顯著高于雌性(P＜0.05)。③雄性體質(zhì)量、腎、膀胱臟器重量顯著高于雌性，差異達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)，肝臟器重量顯著高于雌性，差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)；雌雄裸小鼠臟器系數(shù)相比較，雄性裸鼠的心、脾臟器系數(shù)顯著低于雌性，差異達(dá)極到顯著水平(P＜0.01)，雄性腎的臟器系數(shù)顯著高于雌性，肺、腎上腺的臟器系數(shù)顯著低于雌性(P＜0.05)。結(jié)論 性別對(duì)SPF級(jí)BALB/c裸小鼠血液學(xué)參數(shù)、臟器重量和臟器系數(shù)有一定的影響。

裸小鼠; 血液學(xué)參數(shù); 臟器重量; 臟器系數(shù)

裸小鼠是先天性的免疫缺陷動(dòng)物，目前已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)研究領(lǐng)域不可缺少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，特別在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥品與生物制品的安全性評(píng)價(jià)及有效藥品的篩選等實(shí)驗(yàn)方面，有重要的應(yīng)用價(jià)值[1，2]。BALB/c裸小鼠發(fā)現(xiàn)較早，使用量較多的小鼠品系，也是我國(guó)使用最廣泛的裸小鼠品系。本中心2007年從國(guó)家嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種子中心上海分中心引進(jìn)BALB/c裸小鼠，通過(guò)保種和擴(kuò)群繁育，已建立裸小鼠規(guī)?；a(chǎn)種群，并向科研、企事業(yè)單位規(guī)?；a(chǎn)和供應(yīng)。目前，有關(guān)SPF級(jí)BALB/c裸小鼠血液學(xué)指標(biāo)和臟器系數(shù)報(bào)道較少。為建立成年SPF級(jí)BALB/c裸小鼠生物特性數(shù)據(jù)，本研究測(cè)定了10周齡不同性別裸小鼠的血液學(xué)指標(biāo)、臟器重量、臟器系數(shù)，并進(jìn)行了比較分析，以供醫(yī)學(xué)、生物學(xué)研究時(shí)參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)BALB/c 裸小鼠80只，10周齡，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[SCXK(粵) 2008-0002]。飼養(yǎng)在屏障設(shè)施中，空氣潔凈度7級(jí),室溫20℃～25℃, 濕度40%～70%, 每日光照12 h,動(dòng)物自由采食和飲水。飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分: 粗蛋白23.5%, 粗纖維3.8%, 粗灰分7.3%, 粗脂肪5.4%，鈣1.2%，磷0.85%，鈉0.25%。飼料60Co輻照滅菌、墊料經(jīng)高壓消毒處理，飲用水是凈化水系統(tǒng)制備的純凈水(RO水)，添加鹽酸酸化處理，pH=2～3。

1.2 主要儀器

德國(guó)賽多利斯電子分析天平(BS223S), 上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)的低速大容量離心機(jī)(TDL-5-A),日本光電公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血液分析儀(CelltacEMEK-7222K)和意大利愛(ài)康公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血液生化分析儀(ECHO)，用激光計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)。

1.3 測(cè)定方法

血液生化值測(cè)定: SPF級(jí)BALB/c裸小鼠40只，10周齡，雌雄各半，空腹12 h，麻醉后摘眼球采血，靜置0.5 h，然后3 000 r/m in離心10 m in，取血清，測(cè)定血液生化指標(biāo); 血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定: SPF級(jí)BALB/c 裸小鼠40只，10周齡，雌雄各半，空腹12 h，然后活體稱重，麻醉后摘眼球采血，放入EDTA 抗凝管，立即測(cè)定血常規(guī)參數(shù)值; 體質(zhì)量和臟器系數(shù)測(cè)定: 血液學(xué)指標(biāo)采集裸小鼠頸椎脫臼處死，迅速解剖取出主要臟器(心、肝、脾、肺、胃、腎、腎上腺、膀胱、睪丸、子宮、卵巢)，剔除脂肪和筋膜，用濾紙吸干表面的液體，心臟需剪開(kāi)，用濾紙吸干血液，稱重并計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)(%)=臟器重量(g)/體質(zhì)量(g)×100。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

所有測(cè)定值均以(x-± s)表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，取α=0.05作為檢驗(yàn)水平。

2 結(jié)果

2.1 血液常規(guī)值

血液常規(guī)值測(cè)定結(jié)果如表1和表2所示，22個(gè)測(cè)定項(xiàng)目，雄性裸鼠的白細(xì)胞數(shù)(WBC)、平均血紅蛋白量(MCH)、血小板(PLT)、淋巴細(xì)胞(LY)顯著高于同齡雌性，紅細(xì)胞顯著低于雌性，差異達(dá)到極顯著水平( P＜0.01)，雄性裸鼠的紅細(xì)胞平均體積(MCV)、血小板壓積(PCT)于雌性差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)，其余差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

2.2 血液生化值

血液常規(guī)值測(cè)定結(jié)果如表3所示, 12個(gè)測(cè)定項(xiàng)目, 雄性裸鼠的堿性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)顯著高于雌性，差異達(dá)到極顯著水平(P＜0.01), 雄性裸鼠的白蛋白(ALB)顯著高于雌性，差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05), 其余8項(xiàng)生化指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

2.3 臟器重量和臟器系數(shù)

裸小鼠臟器重量、臟器系數(shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，雌雄裸小鼠體質(zhì)量相比較，雄性裸小鼠體質(zhì)量顯著高于雌性, 差異達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)。雌雄裸小鼠臟器重量相比較, 雄性裸鼠的腎、膀胱顯著高于雌性, 差異達(dá)極到極顯著水平(P＜0.01), 雄性裸鼠的肝顯著高于雌性, (P＜0.05), 其他臟器差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。雌雄裸小鼠臟器系數(shù)相比較, 雄性裸鼠的心、脾顯著低于雌性(P＜0.01), 雄性裸鼠的腎顯著高于雌性, 肺、腎上腺顯著低于雌性。差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05), 其他臟器系數(shù)差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

表1 10周齡SPF級(jí)BALB/c 裸小鼠血液學(xué)常規(guī)數(shù)值測(cè)定結(jié)果

表2 10周齡SPF級(jí)BALB/c裸小鼠白細(xì)胞分類測(cè)定結(jié)果

表3 10周齡SPF級(jí)BALB/c裸小鼠血液生化值測(cè)定結(jié)果

表4 10周齡SPF級(jí)BALB/c 裸小鼠臟器重量、臟器系數(shù)測(cè)定結(jié)果

3 討論

目前，國(guó)內(nèi)報(bào)道有關(guān)SPF級(jí)BALB/c裸小鼠的主要臟器系數(shù)，血液及血生化等指標(biāo)正常值的文獻(xiàn)報(bào)道較少，而這些指標(biāo)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重要的生物特性，是實(shí)驗(yàn)所需的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)及科學(xué)研究與應(yīng)用的重要依據(jù)，對(duì)病理、毒理、藥理等相關(guān)實(shí)驗(yàn)有重要的參考意義[3～4]。其中血液生理生化指標(biāo)與代謝、營(yíng)養(yǎng)及健康狀況有著密切的聯(lián)系，能反映動(dòng)物機(jī)體生理機(jī)能，健康狀況[5]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同性別成年SPF級(jí)裸小鼠血液生理生化值測(cè)定結(jié)果顯示，雌、雄裸小鼠之間大多血液學(xué)指標(biāo)趨于一致，但有一些指標(biāo)差異有顯著性。其中雄性裸小鼠的白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞、平均血紅蛋白量、血小板顯著高于雌性(P＜0.01), 這可能與雌雄裸小鼠生長(zhǎng)快慢，生理狀態(tài)有關(guān)。3周齡后, 雄性增長(zhǎng)速度高于雌性, 10周齡時(shí)雄性體質(zhì)量顯著高于雌性，差異達(dá)到顯著水平。生化指標(biāo)堿性磷酸酶、肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、白蛋白差異有顯著性，且雌性均值低于雄性，可能與雌雄裸小鼠營(yíng)養(yǎng)水平差異或測(cè)定樣本個(gè)數(shù)偏少有關(guān)。張修彥等[6]對(duì)6～8周SPF級(jí)BALB/c小鼠血常規(guī)和血生化測(cè)定結(jié)果也表明，雌雄白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞、血紅蛋白、白蛋白差異達(dá)到極顯著水平。以上結(jié)果說(shuō)明，性別對(duì)裸小鼠血液學(xué)指標(biāo)有一定的影響。

動(dòng)物臟器重量及臟器系數(shù)可衡量動(dòng)物功能狀態(tài)，并能反映動(dòng)物發(fā)育狀況[7～8]。本實(shí)驗(yàn)10周齡雌性裸小鼠體質(zhì)量顯著小于雄性，差異達(dá)到極顯著水平，雌性心、肝、肺、胃、腎、膀胱臟器重量小于雄性臟器重量，雌雄臟器重量與體質(zhì)量大小之間相一致，一些研究也表明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)量與主要臟器存在線性關(guān)系[9～10]。雌雄裸鼠臟器系數(shù)心、脾差異達(dá)到極顯著水平，腎、肺、腎上腺差異達(dá)到顯著水平。練有文等[11]報(bào)道, 5～6周齡SPF級(jí)BALB/c裸小鼠雌雄臟器重量體質(zhì)量、心、肝、腎差異達(dá)到顯著水平，臟器系數(shù)腎、腎上腺差異達(dá)到顯著水平, 與本文一致, 臟器重量和臟器系數(shù)其他差異指標(biāo)變化與本文有所不同，可能是動(dòng)物年齡、飼養(yǎng)方式、動(dòng)物數(shù)量、檢測(cè)方法不同有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定10周齡雌雄SPF級(jí)裸小鼠血液生理生化值、臟器重量、臟器系數(shù), 并進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 不同性別對(duì)血液生理生化值、臟器重量、臟器系數(shù)有一定的影響。實(shí)驗(yàn)實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)及差異比較結(jié)果提供給科研人員參閱、參考。而動(dòng)物血液生理生化值、臟器重量、臟器系數(shù)除受性別的影響, 還受年齡、營(yíng)養(yǎng)水平、生活環(huán)境、生理狀況等影響[12], 這些影響因素有待進(jìn)一步研究。

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Q95-33

B

1674-5817(2014)01-0065-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.015

2013-06-13

廣東省科委嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種子中心-華南分中心的建設(shè)(2008A060202002)

劉 科(1981-), 男, 畜牧師, 碩士, 現(xiàn)從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究工作, E-mail: kygene123@126.com

王 剛, 高級(jí)獸醫(yī)師, E-mail: wangzhy2005@21cm.com