李 紅, 施嘉琛, 楊 奕, 丁曉靜

(北京市疾病預(yù)防控制中心, 北京 100013)

大鼠不同部位采血血清肌酸激酶及其同工酶檢測(cè)結(jié)果

李 紅, 施嘉琛, 楊 奕, 丁曉靜

(北京市疾病預(yù)防控制中心, 北京 100013)

目的 比較大鼠不同部位血清肌酸激酶(CK)及其同工酶(CK-MB)檢測(cè)結(jié)果是否存在差異。方法 用免疫抑制法檢測(cè)大鼠不同部位采集的血清中CK和CK-MB活性，并進(jìn)行比較。結(jié)果大鼠不同部位采集的血液其血清CK和CK-MB檢測(cè)結(jié)果均差異極顯著。結(jié)論 毒理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后采血部位應(yīng)統(tǒng)一，在檢測(cè)結(jié)果未達(dá)到互認(rèn)時(shí)，使用各自動(dòng)物模型的空白組和實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較。

肌酸激酶; 肌酸激酶同工酶; 免疫抑制法; 大鼠血清

肌酸激酶(Creatine kinase，CK)主要存在于骨骼肌、心肌和腦組織中，有三種形式的同工酶(Creatine kinase isoenzyme)，其中混合單體的肌酸激酶同工酶（CK-MB）主要來(lái)源于心肌[1]。當(dāng)骨骼肌、心肌和腦組織發(fā)生損傷時(shí)，CK和CK-MB活性會(huì)有不同程度的升高。在橫紋肌溶解癥(Habdomyolysis，RM)時(shí), CK升高超過(guò)參考區(qū)間上限10倍[2]。急性心肌梗死(A cute m yocard ia l infarction, AM I)后2～4 h CK活性開始增高, 3～6 h CK-MB活性開始增高[1]。CK和CK-MB的升高對(duì)診斷AM I具有很高的價(jià)值[3]。AM I死亡率高, 嚴(yán)重危害人類健康。如能及早確診并介入治療, 對(duì)挽救瀕死心肌、改善預(yù)后、降低急性期病死率等具有重要意義, 利用大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行相關(guān)研究的文獻(xiàn)已有報(bào)道[4～8]。本實(shí)驗(yàn)比較不同部位采集的大鼠血樣其血清中CK和CK-MB活性的差異, 旨在獲得客觀、真實(shí)及準(zhǔn)確的大鼠血清CK和CK-MB檢測(cè)結(jié)果, 以確保RM和AM I相關(guān)研究的大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒ⅰ?/p>

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

日立全自動(dòng)樣品處理生化分析系統(tǒng)(包括離心、開蓋、在線分柱、7600生化分析儀模塊)(日立高新技術(shù)有限公司, 日本)。

1.2 試劑、Trucal U復(fù)合校準(zhǔn)品和TruLab質(zhì)控血清

Diasys為德國(guó)診斷系統(tǒng)(上海)有限公司產(chǎn)品。CK和CK-MB測(cè)定試劑盒使用國(guó)際臨床化學(xué)學(xué)會(huì)(IFCC)和德國(guó)臨床化學(xué)學(xué)會(huì)(DGKC)推薦的連續(xù)監(jiān)測(cè)法。試劑盒購(gòu)自北京日新興業(yè)儀器有限公司。CK貨號(hào): 14116002101，CK-MB貨號(hào): 14116502101，Trucal U復(fù)合校準(zhǔn)品貨號(hào): 591009910064, Trulab N (正常值)質(zhì)控血清貨號(hào): 590009910061, Trulab P(高值)質(zhì)控血清貨號(hào): 590509910061。

1.3 血樣

來(lái)源于正常健康體檢人肘前靜脈血清238例;清潔級(jí)6～8周齡W istar大鼠[SCXK(軍)2007-004]由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，其中大鼠眼內(nèi)眥血清97例(雌性大鼠48只，雄性大鼠49只), 大鼠腹主動(dòng)脈血清76例(雌雄各半), 大鼠股靜脈血清105例(雌性大鼠52只, 雄性大鼠53只)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

在7600生化分析儀上進(jìn)行校準(zhǔn)，質(zhì)控合格后首先進(jìn)行健康人血樣檢測(cè)，確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)室建立的CK和CK-MB檢測(cè)方法。采集大鼠眼內(nèi)眥靜脈、腹主動(dòng)脈、大鼠股靜脈血樣，同條件檢測(cè)血清中CK和CK-MB活性。使用5 m l黃帽分離膠真空采血管進(jìn)行血樣采集，真空采血管由積水醫(yī)療(中國(guó))有限公司提供。預(yù)制條碼，由全自動(dòng)樣品處理系統(tǒng)直接進(jìn)入生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。已剔除溶血、乳糜血的標(biāo)本。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

自動(dòng)化系統(tǒng)輸出的所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直接使用SPSS16.0軟件包進(jìn)行方差分析統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 健康人血清CK 和CK-MB

健康人靜脈血清CK: 104.35±74.73 U/L, CK-MB: 13.00±5.63 U/L。

2.2 大鼠血清CK 和CK-MB

大鼠眼內(nèi)眥靜脈、腹主動(dòng)脈、股靜脈不同部位取血的血清CK和CK-MB相互比較差異均極顯著(表1)。

表1 大鼠不同部位采集的血清中CK和CK-M B的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 健康人血清的檢測(cè)，確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

CK是由M和B兩種亞單位組成的二聚體, 在細(xì)胞質(zhì)中有3種同工酶的形式存在: 2個(gè)B單體(CK-BB), 2個(gè)MM的單體(CK-MM)，M B的單體混合體(CK-MB)。在細(xì)胞線粒體內(nèi)還有另一種CK-M t同工酶。雖然這幾種同工酶分子量相同，催化相同的化學(xué)反應(yīng)。但其分子結(jié)構(gòu)和來(lái)源不同，骨骼肌中CK-MM占絕大部分，CK-BB來(lái)源于大腦和消化道，而CK-MB來(lái)源于心肌[1]。Diasys試劑盒提供的健康人參考范圍，男性CK值＜171U/L、女性＜145 U/L，CK-MB＜24U/L。健康人血清的檢測(cè)符合理論CK＞CK-MB。確認(rèn)了本實(shí)驗(yàn)室建立的CK和CK-MB檢測(cè)方法。

3.2 大鼠不同部位取血的血清檢測(cè)

大鼠不同部位取血的血清CK和CK-MB檢測(cè)結(jié)果差異很大，王沛[9]的研究從頸總動(dòng)脈取血，檢測(cè)結(jié)果CK為1022.50±266.82 U/L，CK-MB為343. 15±102.11 U/L。詹皓等[10]報(bào)道, 斷頭處死取血, CK檢測(cè)結(jié)果為2267.8±563.1 U/L, CK-MB為3827.6 ±819.8 U/L。這些研究表明與本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果均有較大差異，原因可能是動(dòng)脈血、靜脈血與混合血(股靜脈取血、斷頭取血取到的是混合血)存在較大差異。另外實(shí)驗(yàn)室不是互認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，存在實(shí)驗(yàn)室間的檢測(cè)差異。

從大鼠眼內(nèi)眥靜脈和腹主動(dòng)脈取血的血清，檢測(cè)結(jié)果CK-MB大于CK。Diasys是檢測(cè)人血清CK和CK-MB的專用試劑, 原理屬于免疫抑制法測(cè)定。CK-MB采用多克隆抗體將M亞基抑制, 測(cè)定B亞基的活力, 其結(jié)果乘以2, 即為CK-MB活性。檢測(cè)人血清也會(huì)出現(xiàn)CK-MB＞CK的異常情況[11～13], 當(dāng)人血清中出現(xiàn)的巨CK 或CK -BB 及其他成份時(shí), 由于它們不受抗M 亞基抗體抑制, 其活性已完全測(cè)出, 再乘以系數(shù)2, 就可能出現(xiàn)CK-MB升高或高于總CK 的現(xiàn)象。趙利軍等[14]檢測(cè)結(jié)果, CK為(0.42±0.6) ×103U/L，CK-MB為0.55±0.12×103U/L。詹皓等[10]的檢測(cè)結(jié)果都同樣出現(xiàn)CK-MB大于CK情況。

目前在國(guó)內(nèi)尚未有大鼠專用檢測(cè)試劑情況下，造成大鼠眼內(nèi)眥靜脈和腹主動(dòng)脈取血的血清檢測(cè)結(jié)果CK-MB大于CK，干擾物是否和造成人血清檢測(cè)干擾物一致，真正的原因還應(yīng)做進(jìn)一步探討。

檢測(cè)動(dòng)物血樣的實(shí)驗(yàn)室所用試劑、生化分析儀、反應(yīng)溫度和采血部位以及麻醉劑都存在較大差異。因此，在毒理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前后血樣采集部位應(yīng)一致。在檢測(cè)結(jié)果未達(dá)到互認(rèn)時(shí)，使用各自動(dòng)物模型的空白組和實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較，建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部參考范圍。

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Q95-33

B

1674-5817(2014)01-0068-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.016

2013-06-24

李 紅(1968-), 女 ,本科, 主管檢驗(yàn)師。主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com