張 珺，程月發(fā)

（河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院，河北唐山063300）

關(guān)于丹參及其制劑高效液相色譜指紋圖譜參照物的選擇研究概況

張 珺，程月發(fā)

（河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院，河北唐山063300）

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在丹參及其制劑的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜的建立上進(jìn)行了大量研究。參照物的選擇是指紋圖譜研究過(guò)程中必不可少的內(nèi)容，在圖譜的建立與譜峰鑒別方面具有重要的意義。以丹參、HPLC指紋圖譜和參照物為關(guān)鍵詞，通過(guò)CNKI、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)和Elsevier等專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，有參考價(jià)值的文獻(xiàn)近40篇，本文綜述了近十年來(lái)丹參及其制劑的HPLC指紋圖譜參照物選擇的情況，期望今后能夠更好地為丹參HPLC指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)化研究提供參考和依據(jù)。

丹參；高效液相色譜指紋圖譜；參照物

高效液相色譜指紋圖譜是針對(duì)中藥化學(xué)成分的多樣性與復(fù)雜性而提出的有效控制中藥材及其制劑質(zhì)量的一種技術(shù)方法，主要用來(lái)全面反映中藥所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而反映中藥的內(nèi)在質(zhì)量［1］。而制訂指紋圖譜就必須設(shè)立參照物，參照物是根據(jù)中藥理論及有關(guān)化學(xué)和藥理資料來(lái)確定選擇對(duì)象，首先應(yīng)選有對(duì)照品提供的君藥中的主要有效成分，其次是其他有效成分，再次是大量存在的指標(biāo)成分，最后才選一定的內(nèi)標(biāo)物作為參照物［2］。一般選取原則是選相對(duì)含量高并且性質(zhì)穩(wěn)定的藥效成分的色譜峰作為參照峰，并且所選擇的色譜峰應(yīng)該保留時(shí)間適中、峰形對(duì)稱性好且與相鄰色譜峰均達(dá)到基線分離。丹參及其制劑中的有效成分主要分為兩大類，分別為水溶性的酚酸類成分和脂溶性的二萜醌類成分，其指紋圖譜的建立要求盡可能多地反映其中的有效成分，達(dá)到全面、系統(tǒng)評(píng)價(jià)丹參質(zhì)量的目的［3］，但是各種研究所選擇的指紋圖譜的參照物并不一致。鑒于現(xiàn)版藥典中所規(guī)定的評(píng)價(jià)丹參及其制劑質(zhì)量的指標(biāo)成分——丹酚酸B在提取過(guò)程中易分解，目前較多研究則選取非藥典指標(biāo)成分，例如原兒茶醛或隱丹參酮作為參照物。另外，由于指紋圖譜評(píng)價(jià)方法的不斷改進(jìn)，采用雙參照物的方法也將成為趨勢(shì)。以丹參、HPLC指紋圖譜和參照物為關(guān)鍵詞，通過(guò)

CNKI、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)和Elsevier等專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，本文總結(jié)了近十年來(lái)關(guān)于丹參及其制劑指紋圖譜研究的參照物的選擇，以期為丹參及其制劑指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)化研究提供參考依據(jù)。

1 丹參及其制劑HPLC指紋圖譜參照物選擇的類別與依據(jù)

目前丹參及其制劑HPLC指紋圖譜的研究中，關(guān)于參照物的選擇上主要有以下幾類：

1.1 選擇藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的丹參活性成分作為指紋圖譜的參照物 《中國(guó)藥典》2010年版（一部）規(guī)定評(píng)價(jià)丹參藥材質(zhì)量的定量指標(biāo)是丹參酮ⅡA和丹酚酸B，丹參片、復(fù)方丹參片和復(fù)方丹參顆粒等制劑品種也是以丹參酮ⅡA和丹酚酸B作為含量控制指標(biāo)，而復(fù)方丹參滴丸以丹參素的含量為指標(biāo)［4］。由此，相關(guān)文獻(xiàn)中大多采用這些指標(biāo)成分作為丹參HPLC指紋圖譜的參照物。王福剛等［5］建立了白花丹參藥材的HPLC指紋圖譜，在選定的色譜條件下，通過(guò)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A）確定14個(gè)色譜峰構(gòu)成白花丹參藥材指紋圖譜的特征峰，經(jīng)HPLC圖譜比較，丹酚酸B峰較大，為丹參的主要成分之一，故選擇丹酚酸B為參照峰。此外，一些關(guān)于丹參藥材指紋圖譜的研究中也大多采用了丹酚酸B作為指紋圖譜的參照峰［6～9］。丹參的單方或復(fù)方制劑，如丹參片、復(fù)方丹參片的指紋圖譜建立時(shí)也采用丹酚酸B的色譜峰作為參照峰［10～13］。其原因正如孫守國(guó)等［14］在建立復(fù)方丹參片HPLC指紋圖譜時(shí)所指出的：經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，丹酚酸B峰較大，為丹參的主要成分之一，且《中國(guó)藥典》2005年版（一部）丹參項(xiàng)下采用其含量為質(zhì)量控制指標(biāo)，故選擇丹酚酸B為參照峰，該研究以丹酚酸B為參照物，標(biāo)示出了20個(gè)共有峰。而復(fù)方丹參滴丸指紋圖譜的研究中則采用藥典規(guī)定的成分丹參素作為參照峰［4，15］。有一些研究選擇了丹參酮ⅡA作為丹參及其制劑指紋圖譜研究的參照物［16，17］，原因是丹參酮ⅡA色譜峰在指紋圖譜中峰位適中、峰形對(duì)稱性好，且相對(duì)穩(wěn)定。

1.2 選擇非藥典規(guī)定的丹參水溶性成分作為指紋圖譜的參照物 目前，已從丹參中分離出的水溶性化合物主要有丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、紫草酸、咖啡酸、異阿魏酸和丹酚酸A、B、C、D和E等［18］。其中，丹參素和原兒茶醛含量較高，活性較強(qiáng)，是丹參治療冠心病的主要有效成分［19，20］。而藥典規(guī)定的指標(biāo)成分丹酚酸B在藥材炮制加工過(guò)程性質(zhì)不穩(wěn)定，會(huì)發(fā)生分解反應(yīng)。因此，在一些關(guān)于丹參HPLC指紋圖譜的研究，常選用水溶性成分丹參素（丹參素鈉）或原兒茶醛作為指紋圖譜的參照物。

唐旭利等［21］建立丹參藥材水溶性成分HPLC指紋圖譜時(shí)，指認(rèn)了丹酚酸B、丹參素鈉、原兒茶醛3個(gè)特征峰，三者均為丹參水溶性的主要活性成分。在結(jié)構(gòu)上，丹參素鈉和丹酚酸B屬于α－羥基酚酸類成分，在水溶液中易失去一分子水生成穩(wěn)定的共軛酚酸結(jié)構(gòu)。原兒茶醛為高度共軛的酚醛類成分，化學(xué)性質(zhì)上較為穩(wěn)定，在色譜圖中分離度好且容易辨認(rèn)，因此選擇了原兒茶醛為丹參藥材指紋圖譜的參照物。李婧等［22］在建立丹參注射液HPLC指紋圖譜時(shí)，因原兒茶醛為主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占的比例較大且相對(duì)穩(wěn)定，所以選原兒茶醛作為參照物，并用此法建立了共有指紋圖譜，包含20個(gè)共有峰，每個(gè)峰分離度好，并指認(rèn)出5種特征水溶性有效成分。此外相當(dāng)一部分研究也是選用了原兒茶醛作為 HPLC指紋圖譜的參照峰［23～28］。

吳志軍等［29］則選擇了丹參素鈉作為丹參藥材HPLC指紋圖譜的參照峰。而黃敏等［30］在建立山東栽培丹參水溶性成分指紋圖譜時(shí)選擇了出峰時(shí)間適中且分離良好的咖啡酸色譜峰作為參照峰。Hu等［31］選擇了迷迭香酸為參照物，將其色譜峰作為丹參藥材指紋圖譜的參比峰。

1.3 選擇非藥典規(guī)定的丹參脂溶性成分作為指紋圖譜的參照物 丹參脂溶性成分是丹參的主要有效成分，有較強(qiáng)的生理活性，該類化合物主要有：丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮、丹參酸甲酯、丹參新酮、二氫丹參酮Ⅰ及丹參二醇等［18］。其中，除丹參酮ⅡA外，隱丹參酮是丹參治療冠心病的主要有效成分之一且抗菌活性較強(qiáng)［32］。因此，在研究丹參及其制劑HPLC指紋圖譜時(shí)，還常選用脂溶性成分隱丹參酮或二氫丹參酮作為指紋圖譜的參照物。

宋敏等［33］在研究丹參藥材脂溶性成分指紋圖譜時(shí)就選擇了含量較高且與其他色譜峰能達(dá)到完全分離的隱丹參酮作為參比峰。王立萍等［34］采用HPLC法研究山東丹參脂溶性成分指紋圖譜時(shí)也選用了隱丹參酮作為參照物，確定了12個(gè)色譜峰作為共有峰，并指認(rèn)了丹參酮Ⅱ、丹參酮、丹參酮Ⅰ的色譜峰。劉剛等［35］在建立丹參藥材乙醇提取物的指紋圖譜時(shí)，以隱丹參酮為參照物，得出了主要共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，作為丹參指紋圖譜相關(guān)技術(shù)參數(shù)。

宋平順等［36］在建立評(píng)價(jià)甘肅丹參質(zhì)量?jī)?yōu)劣的指紋圖譜分析方法是選擇的指紋圖譜參照峰為二氫丹參酮，因?yàn)槠渖V峰分離度良好，保留時(shí)間居中，峰面積穩(wěn)定。

1.4 選擇丹參的兩個(gè)活性成分作為參照物 目前，在一些研究中也有選用兩個(gè)成分作為HPLC指紋圖譜的參照物。孫國(guó)祥等［37］就以丹酚酸B和原兒茶醛為雙參照峰，建立了丹參水溶性成分HPLC數(shù)字化指紋圖譜的雙參照物峰指紋系統(tǒng)標(biāo)定方法。

1.5 選擇內(nèi)標(biāo)物作為丹參及其制劑指紋圖譜的參照峰 應(yīng)用此種方法在已公開(kāi)的文獻(xiàn)中相對(duì)較少。閻正等［38］采用蒽作為內(nèi)標(biāo)物建立了丹參藥材的HPLC指紋圖譜。

2 總結(jié)與展望

綜上所述，丹參及其制劑指紋圖譜選擇的參照物是不盡相同的，并沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)定。其原因在于丹參藥材因不同種類或產(chǎn)地及氣候等因素的影響而引起的成分間的差異，而不同劑型的制劑則會(huì)受原料藥及加工炮制方法等因素的影響，故很難用選取一種固定的指紋圖譜參照物做研究。而目前大多數(shù)研究都是圍繞著丹參及其制劑HPLC指紋圖譜的建立及應(yīng)用于質(zhì)量控制而進(jìn)行的，關(guān)于HPLC指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)化研究相對(duì)較少。隨著中藥指紋圖譜技術(shù)逐步被收入到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)化將成為今后研究的重點(diǎn)。只有實(shí)現(xiàn)指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)化才能使其成為丹參及其制劑質(zhì)量控制的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。事實(shí)上，絕對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)化很難實(shí)現(xiàn)，但對(duì)不同廠家的相同或者相似的品種，或者提取工藝相同的提取物，在采用HPLC指紋圖譜監(jiān)控其質(zhì)量時(shí)采用同一參照物，不但具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，而且對(duì)于指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)化工作也具有十分重要的意義。

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The selection of reference involved in HPLC fingerprint analysis of salvia miltiorrhiza and its preparations

ZHANG Jun，CHENG Yue-fa
（Jitang College of Hebei United University，Tangshan 063300，China）

Many researches in the establishmentof the HPLC fingerprintof salviamiltiorrhiza and its preparations have been finished in recent years.In order to build the accurate fingerprints，the selection of reference should be paid more attention because it played an important role in establishing the HPLC fingerprints and identifying the peaks in the process of these tests.By using salvia miltiorrhiza，HPLC fingerprint and reference as keywords，about40 references were retrieved in CNKI，Wanfang and Elsevier databases.This paper reviewed the referencematerials in the studies of HPLC fingerprintabout salvia miltiorrhiza and its preparations in the past ten years，expected to provide some basic guides for the HPLC fingerprint standardized research in the future.

Salviamiltiorrhiza；HPLC fingerprint；Reference

R284.1

A

2095－5375（2014）11－0664－004

2013年唐山市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃基金項(xiàng)目（No.13130298z）；河北聯(lián)合大學(xué)2012年青年科學(xué)研究基金項(xiàng)目（No.z201242）

張珺，女，講師，研究方向：藥物分析，E－mail：zhangjun_2402＠163.com

程月發(fā)，男，博士研究生，副教授，研究方向：藥理學(xué)，Tel：0315－8114108，E－mail：arthurcyf＠163.com