路 云，黃國英，田俊梅，張 健

（山東齊都藥業(yè)有限公司，山東淄博255400）

HPLC法測定消旋卡多曲分散片的有關物質

路 云，黃國英，田俊梅，張 健

（山東齊都藥業(yè)有限公司，山東淄博255400）

目的建立高效液相色譜法測定消旋卡多曲分散片的有關物質。方法采用C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈－磷酸二氫鉀（取磷酸二氫鉀1 g與磷酸1 mL，加水溶解并稀釋至1 000 mL）為流動相，梯度洗脫；檢測波長為210 nm。結果各雜質在0.5～16μg·mL－1范圍內呈良好的線性關系，平均回收率均在90%～110%之間。結論本方法穩(wěn)定，操作簡單，重現(xiàn)性好，可以有效控制消旋卡多曲分散片中有關物質的量。

高效液相色譜法；消旋卡多曲；有關物質

消旋卡多曲是一種新的作用機制的抗腹瀉藥［1］，幾乎沒有以往抗腹瀉藥物普遍存在的副作用［2］，而治療效果與臨床常規(guī)用藥洛派丁胺相當。它是一種腦啡肽酶的抑制劑［3～5］，具有較高的特異性抗分泌作用。它通過抑制腦啡肽酶活性，進而抑制水和電解質過度分泌來發(fā)揮其抗腹瀉作用。它的特點是：高效、作用迅速、治療指數(shù)高，對中樞神經系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)無明顯作用，不引起便秘，是一種安全、有效地抗腹瀉藥。

消旋卡多曲分散片用藥人群為成人［6］和兒童急性腹瀉患者［7］。分散片作為一種固體速釋制劑與普通片相比，具有以下優(yōu)點：分散狀態(tài)佳、崩解時間短、藥物溶出迅速；吸收快、生物利用度高；服用方便，可吞服、咀嚼含吮或用水分散后服用，尤其適合老、幼和吞服固體困難的患者。本品制成分散片，在急性腹瀉發(fā)作時服用可以迅速起效，有效地控制病情，迅速減輕患者的痛苦。

消旋卡多曲國內標準［8］只對未知單一雜質和總雜質進行了控制；歐洲藥典委員會消旋卡多曲標準中對已知雜質A、C、E、F、未知單一雜質及總雜質進行了控制；為了更好地控制產品質量，我們參照歐洲藥典委員會消旋卡多曲質量標準對原有質量標準進行了提高和改進，除未知單一雜質和總雜質外，控制了A、C、E、F、G五個已知雜質。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－20A高效液相色譜儀，CPA－225D電子天平。

1.2 試藥 對照品：雜質A：生產單位：歐洲藥典委員會；批號：2.0；雜質C：生產單位：TLC Pharmachem；批號：1469－011A2；雜質E：生產單位：Toronto Research Chemicals Inc；批號：7－RCD－20－1；雜質F：生產單位：Cato Research Chemicals Inc；批號：R121128－06；雜質G：生產單位：歐洲藥典委員會；批號：1.0；供試品：130501、130502、130503。乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）；流動相：以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1 g與磷酸1 mL，加水溶解并稀釋至1 000 mL）為流動相A，以乙腈為流動相B，照下表進行梯度洗脫；流速為1.0 mL·min－1，檢測波長為210 nm，柱溫為30℃，進樣量10μL。

時間（min） 流動相A（%） 流動相B（%）0～5 60 40 5～20 60→20 40→80 20～45 20 80 45～54 60 40

2.2 檢測波長的選擇 精密稱取消旋卡多曲對照品適量，用混合溶劑（流動相A∶流動相B＝1∶1）制成每1 mL中含約50μg的溶液，精密稱取雜質A、C、E、F、G各適量，分別加混合溶劑制成每1 mL中各含約15μg的溶液，照紫外－可見分光光度法，在200～400 nm的波長范圍內掃描，在210 nm波長處有較大吸收，且結合本品的破壞試驗，其產生的雜質在210 nm均能被檢出，而輔料不干擾測定，所以選用210 nm作為有關物質的測定波長，見圖1～5。

圖1 雜質A紫外掃描圖譜

圖2 雜質C紫外掃描圖譜

圖3 雜質E紫外掃描圖譜

圖4 雜質G紫外掃描圖譜

圖5 雜質F紫外掃描圖譜

2.3 專屬性試驗

2.3.1 空白輔料干擾試驗 稱取本品處方量的空白混合輔料，用混合溶劑制成約相當于消旋卡多曲2 mg·mL－1的溶液，濾過，作為空白輔料溶液，記錄色譜圖?？瞻纵o料不干擾測定，見圖6。

2.3.2 酸破壞試驗 精密稱取本品細粉適量（約相當于消旋卡多曲50mg），加入1mL 1mol·L－1鹽酸溶液，水浴加熱10 min，放冷至室溫，加入氫氧化鈉溶液中和，用混合溶劑定容至25 mL，濾過，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜峰之間分離度良好，見圖7。

2.3.3 堿破壞試驗 精密稱取本品細粉適量（約相當于消旋卡多曲50mg），加入0.2 mL 1 mol·L－1氫氧化鈉溶液，水浴加熱5 min，放冷至室溫，加入鹽酸溶液中和，用混合溶劑定容至25 mL，濾過，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜峰之間分離度良好，見圖8。

2.3.4 氧化破壞試驗 精密稱取本品細粉適量（約相當于消旋卡多曲50 mg），加入2 mL 30%過氧化氫溶液，置水浴中加熱20 min，放冷至室溫，用混合溶劑定容至25 mL，濾過，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜峰之間分離度良好，見圖9。

2.3.5 光照破壞試驗 精密稱取本品細粉適量（約相當于消旋卡多曲50 mg），置4 500 Lx光照強度下放置40 h，用混合溶劑定容至25 mL，濾過，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜峰之間分離度良好，見圖10。

2.3.6 高溫破壞試驗 精密稱取本品細粉適量（約相當于消旋卡多曲50 mg），置25 mL量瓶中，置100℃烘箱中加熱8 h，放冷至室溫，用混合溶劑定容至25 mL，濾過，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜峰之間分離度良好，見圖11。

綜上所述，破壞產生的新雜質與消旋卡多曲主峰均能夠完全分離，表明本方法專屬性較強，能夠對消旋卡多曲分散片進行雜質檢查。

2.4 溶液穩(wěn)定性試驗 精密制成含消旋卡多曲2mg·mL－1，雜質A、C、E、F、G 10μg·mL－1的溶液。于室溫暗處放置，分別于0、3、6、9、12 h，精密量取10μL，記錄色譜圖。12 h內消旋卡多曲及各雜質峰面積的RSD%均小于5.0%，結果表明本品溶液于室溫暗處放置12 h內相對穩(wěn)定。

圖6 空白輔料試驗圖譜

圖7 酸破壞試驗圖譜

圖8 堿破壞試驗圖譜

圖9 氧化破壞試驗圖譜

圖10 光照破壞試驗圖譜

圖11 高溫破壞試驗圖譜

2.5 定量限試驗 雜質E、F定量限：精密量取雜質E、F對照品約13.5 mg，加混合溶劑稀釋制成0.27μg·mL－1的溶液；雜質A、C、G定量限：精密量取雜質A、C、G雜質對照品約13 mg，加混合溶劑稀釋制成0.65μg·mL－1的溶液；精密量取上述溶液10μL，記錄色譜圖，圖譜中各已知雜質的信噪比約為10∶1，計算得各已知雜質的定量限分別為0.65、0.65、0.27、0.27、0.65μg·mL－1。

2.6 檢測限試驗 雜質E、F檢測限：精密量取雜質E、F定量限試驗用溶液3 mL，置10 mL量瓶中，制成0.08μg·mL－1的溶液；雜質A、C、G檢測限：精密量取雜質A、C、G定量限試驗用溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加混合溶劑制成0.20μg·mL－1的溶液；精密量取上述溶液各10μL，記錄色譜圖，圖譜中各已知雜質的信噪比均約為3∶1，計算得各已知雜質的檢測限分別為0.20、0.20、0.08、0.08、0.20μg·mL－1。

2.7 線性關系試驗 精密稱取雜質A、C、E、F、G各適量，制成每1 mL中約含20μg的混合溶液，作為線性關系試驗貯備溶液，精密量取貯備液適量，制成濃度分別為16、8、4、2、1、0.5μg·mL－1的系列線性試驗溶液。結論：雜質A、C、E、F、G在0.5～16 μg·mL－1的濃度范圍內，峰面積與濃度呈良好的線性關系。見表1。

表1 各雜質標準曲線及線性濃度范圍

2.8 回收率試驗 精密稱取雜質A、C、E、F、G各適量，制成每1 mL中各約含50μg的混合溶液，作為雜質對照品貯備液；分別取消旋卡多曲分散片細粉（約相當于消旋卡多曲50 mg），置25 mL量瓶中，共配制9份，其中3份精密加入雜質對照品貯備液2 mL，3份精密加入雜質對照品貯備液5 mL，3份精密加入雜質對照品貯備液6 mL，用混合溶劑定容，濾過，精密量取10μL，記錄色譜圖。各雜質的平均回收率均在90%～110%，準確度良好，見表2。

表2 回收率測定結果

2.9 耐用性試驗 精密稱取本品細粉適量（約相當于消旋卡多曲50 mg），置25 mL量瓶中，分別加入回收率試驗中雜質A、C、E、F、G貯備液各2.5 mL，用混合溶劑定容，濾過。分別考察柱溫、不同批次色譜柱、流速的微小變化，對雜質測定的影響。各測試條件下各雜質均達到基線分離，含量的RSD%均小于2.0%，可見該方法的耐用性試驗良好。

2.10 3 批樣品有關物質的測定結果 分別精密稱取雜質A、C、E、F、G對照品各適量，用混合溶劑溶解并稀釋制成每1 mL中各約含10μg的混合溶液作為對照品溶液。取消旋卡多曲分散片細粉制成含消旋卡多曲2 mg·mL－1的溶液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用混合溶劑定容，作為對照溶液。分別取上述三種溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分保留時間的兩倍，按外標法以峰面積計算，結果見表3、圖12。

表3 樣品有關物質檢查結果

圖12 樣品檢測試驗圖譜

3 討論

3.1 藥品的有關物質與藥品質量、安全性及效能密切相關，有關物質的控制越來越受到重視。因此，制定一個有效測定雜質的方法很重要。

3.2 國產消旋卡多曲標準（標準號：H20074072）雜質水平及質控標準評價：對本文中有關物質方法的定量分析表明，本方法雜質控制水平良好，符合藥典相關要求，但國產消旋卡多曲標準（標準號：H20074072）方法系統(tǒng)適用性要求低，色譜條件差，等度洗脫方法不能使雜質得到有效分離。采用本文梯度洗脫方法，可以使消旋卡多曲及其雜質得到很好的分離，見圖13～14。

圖13 采用等度洗脫方法圖譜

3.3 通過對消旋卡多曲原料雜質譜分析，雜質G為降解雜質，必須對其進行控制。因此，我們在歐洲藥典委員會消旋卡多曲標準的方法基礎上增加了對雜質G的控制。

3.4 在本文的色譜條件下消旋卡多曲分散片經光、熱、酸、堿、氧化破壞后，各降解產物色譜峰與主成分色譜峰均能達到基線分離，能有效地檢出消旋卡多曲分散片中各已知雜質?？疾旒皹悠返臏y定結果顯示，本法操作簡便快捷，專屬性強，結果準確可靠，可有效地控制本品的質量。

圖14 采用梯度洗脫方法圖譜

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Determ ination of the related substances in Racecadotril Dispersible Tablets by HPLC

LU Yun，HUANGGuo-ying，TIAN Jun-mei，ZHANG Jian
（Shandong Qidu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zibo 255400，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of related substances in Racecadotril Dispersible Tablets.MethodsThe isolation was executed by a ODS column（4.6 mm×250 mm，5μm）and mobile phase was acetonitrile－potassium dihydrogen phosphate，gradient elution；The detection wavelength was 210 nm.ResultsEach impurity showed a good linear relationship within 0.5～16μg·mL－1.The average recovery was between 90%to 110%.ConclusionThemethod was stable，simple and repeatable，and can be used for the quality control of the related substances in Racecadotril Dispersible Tablets.

HPLC；Racecadotril；Related substances

R927.1

A

2095－5375（2014）08－0449－005

路云，女，研究方向：藥物分析，E－mail：qdrdluyun＠163.com