王 奔，鄭 偉，張宏玲

（1.吉林農業(yè)科技學院動物醫(yī)學學院，吉林 吉林132101；2.內蒙古赤峰市松山區(qū)農牧業(yè)局，內蒙古 赤峰024000）

寒冷是北方地區(qū)動物最普遍的應激原，寒冷應激所引起的動物生長緩慢、抗病性差、甚至死亡是制約北方畜牧業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要因素之一。維生素E具有抗應激、抗疲勞、抗氧化、增強免疫能力等功能，它作為一種飼料添加劑在畜牧業(yè)中已得到廣泛的應用。國內外眾多學者在冷應激對動物機體的影響方面進行了廣泛研究,已有的大量研究表明，冷應激可對機體免疫系統(tǒng)產生影響，可改變多種細胞功能和免疫參數(shù)。但關于維生素E的抗應激作用在禽類中的研究還比較少。本試驗以雛雞為試驗對象，通過冷應激處理，用含不同水平維生素E的日糧飼喂。對雛雞血清中抗氧化功能相關指標進行檢測，旨在探討維生素E對冷應激雛雞機體的保護作用，提高動物的抗寒能力和抗氧化功能，為更好提高禽類抗冷應激能力和抗病力提供科學的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組 本試驗以1日齡的伊莎公雞為研究對象，共250只，飼養(yǎng)至15日齡時隨機分為正常組、應激組、維生素E低劑量組、維生素E中劑量組、維生素E高劑量組5組，每組各50只。常規(guī)分籠飼養(yǎng)，自由采食飲水。正常組和應激組飼喂全價飼料，低、中、高劑量組分別在飼料中添加200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg的維生素E，除正常組在正常環(huán)境下飼養(yǎng)外，其余4組分別于12℃±1℃進行冷應激處理，應激時間分別為5、10、20 d，在各時間點每組隨機選取8只剖殺取樣[1]。

1.2 樣品采集與處理 在冷應激的第5天、10天、20天進行剖殺，將各組雛雞心臟采血，血液放入潔凈試管，置于室溫下，自行析出血清，用于NO和GSHPx的活性的檢測。

1.3 檢測項目與方法 （1）血清維生素E含量的檢測：用微量熒光法測定，單位μg/mL；（2）NO含量測定：硝酸還原酶法；（3）GSH-Px活性測定：用DTNB顯色法。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析，差異具有顯著性意義時再進行LSD檢驗。試驗結果列表中，a為P＜0.05，A為P＜0.01（各組與正常組相比）；b為P＜0.05，B為P＜0.01（各組與應激組相比）；c為P＜0.05，C為P＜0.01（各組與低劑量組相比）；d為P＜0.05，D為P＜0.01（各組與中劑量組相比）。

2 結果

2.1 血清維生素E含量的測定 由表1可以看出，不同組別隨著應激時間的延長，血清維生素E含量升高并呈波動變化。在各時間點，隨著維生素E添加劑量的增加，血清維生素E含量逐漸回升；應激組與正常組相比差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組與正常組相比除低劑量組與正常組差異極顯著（P＜0.01），10 d高劑量組與正常組差異顯著外（P＜0.05），其他各劑量組與正常組間差異均不顯著（P＞0.05）；各劑量組與應激組相比除10 d低劑量組與應激組差異顯著（P＜0.05），5 d、20 d低劑量組與應激組差異不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組與應激組間差異均極顯著（P＜0.01）。

表1 血清中維生素E含量 （n=8）單位：μg/mL

2.2 維生素E對冷應激雛雞血清NO含量的影響

由表2可以看出，不同組別隨著應激時間的延長，血清NO含量逐漸升高。在各時間點，隨著維生素E添加劑量的增加，血清NO含量逐漸下降；應激組與正常組相比差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組與正常組相比除10 d高劑量組與應激組差異不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組與正常組間差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）；各劑量組與應激組相比除5 d低劑量組與應激組差異不顯著（P＞0.05），10 d低劑量組與應激組差異顯著外（P＜0.05），其他各劑量組與應激組間差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組間比較差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）。

2.3 維生素E對冷應激雛雞血清GSH-Px活性的影響 由表3可以看出，不同組別隨著應激時間的延長，血清GSH-Px活性逐漸降低。在各時間點，隨著維生素E添加劑量的增加，血清GSH-Px活性逐漸回升；應激組與正常組相比差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組與正常組相比除低劑量組與正常組、10 d中劑量組與正常組差異極顯著外（P＜0.01），其他各劑量組與正常組間差異均不顯著（P＞0.05）；各劑量組與應激組相比除低劑量組與應激組不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組與應激組間差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組間除中劑量組與高劑量組差異不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組間相比較差異均極顯著（P＜0.01）。

表2 維生素E對冷應激雛雞血清NO含量的影響（n=8）單位：U/mL

表3 維生素E對冷應激雛雞血清GSH-Px活性影響（U/mL，n=8）

3 討論

冷應激對機體的氧化損傷一直是冷應激研究的熱點，自由基尤其是氧自由基在生物體內的含量改變時，可能會導致氧化應激及細胞損傷，已有報道表明，冷應激能夠引起氧自由基含量的改變。當機體受到過度刺激時，會誘導NO的大量產生，可與體內超氧陰離子（0-2）等活性氧反應生成過氧亞硝酸鹽（ONOO-）介導細胞毒作用[2]。過量的超氧陰離子自由基可誘發(fā)機體內不飽和脂肪酶的一系列脂質氧化連鎖反應，造成生物膜結構和功能損傷，使機體抗病力下降、生產力降低，引發(fā)各種疾病。谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是機體內廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，它特異催化還原型GSH對過氧化物的還原反應。一般認為它在細胞內能清除有害的過氧化代謝產物，阻止脂質過氧連鎖反應，從而起到保護細胞膜結構和功能的作用[3]。楊鳳微等[4]研究表明，冷應激能引起雛雞血清NO含量升高、GSH-Px活性降低，使機體抗氧化系統(tǒng)遭到破壞。Gumuslu等[5]研究證明，慢性冷應激可使鼠紅細胞CuZn-SOD活性下降，GSH-Px活性升高。Sahin等[6]研究表明，冷應激可以破壞氧化與抗氧化系統(tǒng)的平衡，通過改變酶與非酶的抗氧化系統(tǒng)，蛋白質氧化以及脂質氧化等對鼠機體組織器官造成氧化損傷。

維生素E能消除和對抗體內脂質過氧化物酶的形成，使自由基減少，從而起到抗氧化作用。在寒冷狀態(tài)下機體代謝增強，脂質過氧化產物蓄積，維生素E可清除過剩的脂質過氧化物，從而保護生物膜及亞細胞結構的完整性。宋志宏等[7]研究表明，大鼠冷暴露后血及肝臟組織中GSH-Px和SOD的活性明顯下降，而飼料中加入一定量的維生素E可使上述指標的變化明顯改善，接近于室溫下正常對照組水平。也有研究表明，在應激前補充維生素C和維生素E有助于改善由低體溫引起的人尺神經(jīng)傳導的損傷，維生素E可通過抗脂質過氧化作用，提高機體的耐寒力[8]。

本試驗結果中應激組NO含量升高，GSH-Px活性降低，總體趨勢與所報道的研究結果基本一致，提示在冷應激時機體的氧化-抗氧化平衡失調、氧自由基生成增多，造成機體組織細胞的損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，補充外源性維生素E能夠增加體內GSH合成，增加機體抗氧化能力。Ozkan S等[9]研究表明，在低溫下飼喂無機硒加維生素E飼料可增加雛雞肝中GSH-Px和谷光甘肽的含量，增加家禽在低溫下的抗氧化能力。本試驗觀察到添加維生素E組，尤其是中劑量組和高劑量組血清中NO含量、GSH-Px活性均接近于正常水平，說明維生素E可促進細胞的新陳代謝，增加機體中NO含量和GSH-Px的活力，發(fā)揮其抗氧化和清除自由基作用。提示適量的維生素E對冷應激引起的雛雞氧化損傷有保護作用，可以明顯抑制氧自由基含量增高，可減輕氧自由基對機體的損傷作用。

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