董昕欣，劉 偉，邴國(guó)霞，張劭俁，李文京，王傳彬，原 霖，韓 雪，張 碩，李雁冰，郭建宏

（1.中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽(yáng)100125；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江 哈爾濱150001；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州730046）

獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室是指隸屬于各級(jí)獸醫(yī)主管部門，承擔(dān)動(dòng)物疫病檢測(cè)、診斷和監(jiān)測(cè)等任務(wù)的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。按照《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》[1]，獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室作為動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)的組成部分，主要承擔(dān)動(dòng)物疫病診斷和檢測(cè)、動(dòng)物疫情和免疫狀況監(jiān)測(cè)、動(dòng)物疫病防控科學(xué)研究等工作，對(duì)動(dòng)物疫病防控發(fā)揮著重要支撐作用。開展獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)，是評(píng)價(jià)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)水平的重要手段，也是加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的有效方法[2]。為提高全國(guó)各省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和技術(shù)水平，按農(nóng)業(yè)部要求，中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組織實(shí)施了2014年省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)，全國(guó)32個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室全部參加，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成了比對(duì)樣品制備、分發(fā)、檢測(cè)和結(jié)果回收。比對(duì)結(jié)果客觀反映了實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和技術(shù)水平，對(duì)該結(jié)果進(jìn)行分析討論有利于進(jìn)一步做好獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理工作。報(bào)告如下。

1 比對(duì)計(jì)劃

本次比對(duì)依據(jù)農(nóng)業(yè)部辦公廳和中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心有關(guān)2014年獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)的文件[3-4]要求，共設(shè)置4個(gè)比對(duì)項(xiàng)目，分別是H7N9亞型禽流感抗體（H7N9-AIAb）檢測(cè)、口蹄疫病毒（FMDV）檢測(cè)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）檢測(cè)、禽白血病病毒（ALV）檢測(cè)。全國(guó)共有32個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室（含新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)）參加此次比對(duì)。

2 比對(duì)方法

2.1 試驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn) 針對(duì)4個(gè)檢測(cè)能力比對(duì)項(xiàng)目，采用國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室或?qū)I(yè)實(shí)驗(yàn)室推薦的方法和試劑，其中部分試劑由參加比對(duì)的省級(jí)實(shí)驗(yàn)室自行準(zhǔn)備，見表1。

表1 比對(duì)試驗(yàn)的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑

2.2 比對(duì)樣品制備

2.2.1 制備方式 各國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)實(shí)驗(yàn)室分別完成相應(yīng)樣品的制備、標(biāo)定、分裝和編號(hào)，并將樣品和標(biāo)定值送交中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一保存，作為盲樣下發(fā)使用。

2.2.2 H7N9-AIAb樣品 雞血清抗體樣品5份，由參考值分別為＜1、4、7的3組樣品中各抽取1～2份樣品組成。

2.2.3 FMDV樣品 口蹄疫病毒樣品5份，參考值分別為陰性、O型陽(yáng)性、O型陽(yáng)性、A型陽(yáng)性、A型陽(yáng)性。

2.2.4 PRRSV樣品 豬繁殖與呼吸綜合征病毒樣品5份，參考值分別為陰性、弱陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性。

2.2.5 ALV樣品 禽白血病病毒樣品5份，由參考值分別為陰性、弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性3組樣品中各抽取1-2份樣品組成。

2.3 比對(duì)樣品傳遞 比對(duì)樣品為具有生物學(xué)活性的血清、尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)物，為保持其良好的生物學(xué)活性，樣品存放在-20℃以下冰柜中。分發(fā)時(shí)將樣品和試劑放入裝有冰袋的保溫箱中保存，由參加比對(duì)的省級(jí)實(shí)驗(yàn)室派專人在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取，并在12 h之內(nèi)送達(dá)參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室。

2.4 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 H7N9-AI檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 檢測(cè)值與參考值的偏差不超過1個(gè)滴度，判為結(jié)果準(zhǔn)確。

2.4.2 FMDV檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) O型陽(yáng)性和A型陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”；陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.3 PRRSV檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”；陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.4 ALV檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陽(yáng)性”；陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

3 比對(duì)結(jié)果

3.1 總體結(jié)果 根據(jù)比對(duì)結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，在32個(gè)參加省級(jí)實(shí)驗(yàn)室中，有29個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)所有項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果全部準(zhǔn)確，有3個(gè)實(shí)驗(yàn)室部分比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)值存在較大偏差。出現(xiàn)較大偏差的主要是H7N9亞型禽流感抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)項(xiàng)目，見表2。

表2 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3.2 H7N9-AIAb檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 30個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果全部正確，說明大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在血凝抑制技術(shù)方面較為成熟。1個(gè)實(shí)驗(yàn)室（第23號(hào)）對(duì)參考值4log2樣品的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)錯(cuò)誤，高于參考值兩個(gè)滴度。1個(gè)實(shí)驗(yàn)室（第28號(hào)）對(duì)參考值4log2樣品的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)錯(cuò)誤，低于參考值兩個(gè)滴度。

對(duì)于參考值相同的雙份重復(fù)樣品的檢測(cè)，大部分實(shí)驗(yàn)室（30/32）檢測(cè)結(jié)果自身重復(fù)性較好，說明絕大部分實(shí)驗(yàn)室的隨機(jī)誤差較小；而第23號(hào)、第25號(hào)2個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)于參考值相同的兩份樣品檢測(cè)值不一致，反映出這些實(shí)驗(yàn)室在質(zhì)控體系方面存在問題。結(jié)果見圖1。

3.3 FMDV檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)FMDV弱強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果全部正確，見表3。

圖1 各實(shí)驗(yàn)室H7N9-AI檢測(cè)值離散

表3 各實(shí)驗(yàn)室FMDV檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

3.4 PRRSV檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 31個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)PRRSV弱強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果全部正確，1個(gè)實(shí)驗(yàn)室1份弱陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為陰性。見表4。

表4 各實(shí)驗(yàn)室PRRSV檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

3.5 ALV檢測(cè)比對(duì)結(jié)果 32個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)ALV弱強(qiáng)陽(yáng)性和陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果全部正確，見表5。

表5 各實(shí)驗(yàn)室ALV檢測(cè)結(jié)果頻次與參考值對(duì)照

4 討論

從比對(duì)結(jié)果來看，在參加比對(duì)的32個(gè)省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室中，有29個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)所有項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果全部準(zhǔn)確，有3個(gè)實(shí)驗(yàn)室部分比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)值存在較大偏差，說明大部分省級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室具備相應(yīng)的檢測(cè)能力和技術(shù)水平。出現(xiàn)較大偏差的主要是H7N9亞型禽流感抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)項(xiàng)目，說明定量或半定量的血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目，其難度和要求大于定性的分子生物學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目；也說明這部分實(shí)驗(yàn)室在半定量的檢測(cè)技術(shù)方面還不夠穩(wěn)定。

本次實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)中設(shè)置了平行樣品，用以評(píng)估實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)體系的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，大部分實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果平行性好，僅少數(shù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)參考值相同的兩份樣品的檢測(cè)值不一致。這說明部分實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)中存在較多的隨機(jī)誤差，應(yīng)當(dāng)更加明確各個(gè)操作環(huán)節(jié)的細(xì)節(jié)要求，減少隨意性操作，增加實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性。

血清學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)是獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)檢測(cè)方法，本次比對(duì)的試驗(yàn)項(xiàng)目包含了血凝抑制試驗(yàn)、ELISA、PCR、熒光定量PCR等多種常用方法；檢測(cè)的疫病類別也涵蓋了當(dāng)前重點(diǎn)防控的幾個(gè)重大動(dòng)物疫病，因此比對(duì)結(jié)果能客觀地反映實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和技術(shù)水平。我國(guó)以前在獸醫(yī)領(lǐng)域開展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)相對(duì)較少，出入境檢疫系統(tǒng)曾開展過禽流感AGID抗體的定性檢測(cè)及H5、H9亞型HI抗體定量檢測(cè)的比對(duì)[7]，部分動(dòng)物疫控實(shí)驗(yàn)室參加過國(guó)際間或地方實(shí)驗(yàn)室自發(fā)組織的比對(duì)，而本次比對(duì)是全國(guó)范圍的省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室之間的比對(duì)，對(duì)于即將全面開展的全國(guó)各市、縣級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)具有一定的借鑒意義。

[1]國(guó)務(wù)院辦公廳.國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）的通知[Z].國(guó)辦發(fā)[2012]31號(hào).北京：國(guó)務(wù)院辦公廳，2012-05-20.

[2]王文，張繼紅，蘭玲，等.2010年新疆獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)試驗(yàn)的探討與建議[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2011，28（9）：19-21.

[3]農(nóng)業(yè)部辦公廳.農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于開展2014年獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作的通知[Z].農(nóng)辦醫(yī)[2014]13號(hào).北京：農(nóng)業(yè)部辦公廳，2014-03-28.

[4]中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心.關(guān)于印發(fā)《2014年省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)實(shí)施方案》的通知[Z].疫控（安）[2014]48號(hào).北京：中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，2014-04-03.

[5][農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核管理辦法》的通知[Z].農(nóng)醫(yī)發(fā)[2009]15號(hào).北京：農(nóng)業(yè)部，2009-08-11.

[6]李掌林.雛議實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)試驗(yàn)工作[J].現(xiàn)代測(cè)量與實(shí)驗(yàn)室管理，2004（2）：36-39.

[7]劉來福，張鶴曉，張利峰，等.家禽禽流感病毒AGID抗體定性檢測(cè)及H5、H9亞型HI抗體定量檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果分析[J].現(xiàn)代測(cè)量與實(shí)驗(yàn)室管理，2004（2）：29-32