徐增梅，丁偉偉，尹婷婷，童佳兵，楊 程，李澤庚

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)2012級碩士研究生，安徽 合肥 230038；2.安徽省中醫(yī)院呼吸內(nèi)科，安徽 合肥 230031）

論 著

麻芍平喘湯對支氣管哮喘大鼠氣道重塑及IL-5、IL-13影響研究

徐增梅1，丁偉偉1，尹婷婷1，童佳兵2，楊 程2，李澤庚2

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)2012級碩士研究生，安徽 合肥 230038；2.安徽省中醫(yī)院呼吸內(nèi)科，安徽 合肥 230031）

目的：探討麻芍平喘湯對支氣管哮喘大鼠氣道重塑及血清IL-5、IL-13的影響。方法：雄性SD大鼠70只隨機(jī)分為正常組、模型組、地塞米松組、陽和平喘組和麻芍平喘高、中、低劑量組，每組10只，造模28天后，正常組、模型組每天給予生理鹽水灌胃，其他各組給予相應(yīng)藥物灌胃，2周后解剖大鼠并取出肺組織。結(jié)果：模型組肺組織病理學(xué)改變明顯，對大鼠血清中IL-5和IL-13的影響麻芍平喘湯各劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），中藥組與地塞米松組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），麻芍平喘高劑量組與陽和平喘組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。結(jié)論：麻芍平喘湯具有減輕哮喘氣道炎癥，干預(yù)氣道重塑的作用。

大鼠；支氣管哮喘模型；麻芍平喘湯；氣道重塑

Asthma；Airway remodeling；Mashaopingchuan Decoction

支氣管哮喘（簡稱哮喘）是由多種氣道炎性細(xì)胞和結(jié)構(gòu)細(xì)胞及細(xì)胞組分參與的反復(fù)發(fā)作的氣道慢性炎癥性疾病，是最常見的慢性疾病之一［1］。氣道炎癥細(xì)胞釋放的各種活性物質(zhì)導(dǎo)致氣道損傷，隨之而來的是氣道的修復(fù)和重塑，哮喘癥狀的持續(xù)存在、嚴(yán)重程度及氣道高反應(yīng)性均與氣道重塑密切相關(guān)。我們觀察了麻芍平喘湯對支氣管哮喘模型大鼠血清中IL-5、IL-13水平及肺組織病理學(xué)的影響，探討了對哮喘慢性氣道炎癥及氣道重塑的作用，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

健康SD雄性大鼠70只，體質(zhì)量180～220g，由安徽省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。許可證號SCXK（皖）2011-002。隨機(jī)分為正常組、模型組、地塞米松組、陽和平喘組和麻芍平喘高、中、低劑量組，每組10只。

1.2 藥物制備

麻芍平喘湯（麻黃10g、細(xì)辛3g、五味子9g、鉤藤12g、赤芍7g）由安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房提供，按照濃度0.5g/L制成溶液。陽和平喘顆粒（麻黃、巴戟天、熟地、五味子、白芥子、葶藶子、桔梗）為安徽省中醫(yī)院院內(nèi)制劑（生產(chǎn)批號20130511），每克含生藥量3.1g；醋酸地塞米松片由浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H33020822，生產(chǎn)批號140218。

1.3 試劑及儀器

ELISA試劑盒、OVA為美國Sigma公司生產(chǎn)；甲醛為上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)許可編號XK13-011-00010，批號20131020，水合氯醛為天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所生產(chǎn)，規(guī)格HG3-1004076，402AI型超聲霧化器為江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司生產(chǎn)，RES3020動物呼吸機(jī)為北京貝蘭博科技有限公司生產(chǎn)，低溫冷凍離心機(jī)（KDC-2044）與-80℃低溫冰箱（NABILA175）為日本松下電器公司產(chǎn)品，80-2離心機(jī)為上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)，徠卡2135型切片機(jī)為德國徠卡公司生產(chǎn)，JEM-1230型透射電子顯微鏡為日本生產(chǎn)。

1.4 哮喘造模及給藥

復(fù)制動物造模方法并改進(jìn)［2］：除正常對照組外，其余各組于實(shí)驗(yàn)的第0天、第7天和第14天，以10%卵白蛋白加氫氧化鋁干粉10mg，分3次腹腔注射0.5mL及兩側(cè)腹股溝皮下各0.25mL3點(diǎn)注射致敏。正常對照組用生理鹽水1mL替代。第3次致敏1周后將大鼠放入不完全封閉的玻璃霧化箱內(nèi)，除正常對照組外的各組每日任動物自行吸入1%卵白蛋白生理鹽水20min左右，每日激發(fā)1次，共激發(fā)3周，誘發(fā)其哮喘發(fā)作，直至霧化過程中大鼠出現(xiàn)煩躁不安、打噴嚏、咳嗽、呼吸困難和喘息，以及大小便失禁、抓耳朵、紫紺等癥狀為激發(fā)成功。正常對照組以吸入生理鹽水來替代。各組均從激發(fā)階段的第7天開始給藥，每次激發(fā)前30min灌胃。麻芍平喘高、中、低劑量組分別灌胃14.76g/kg、7.38g/kg、3.69g/kg，分別相當(dāng)于成人日常治療量的4、2、1倍。地塞米松組用地塞米松片0.5mg/（kg·d）灌胃，陽和平喘組用6.4g/（kg·d）灌胃，正常組和模型組0.01mL生理鹽水灌胃，各組灌胃連續(xù)14天。

1.5 標(biāo)本采集

末次激發(fā)24h后，予以6%水合氯醛6mL/kg腹腔麻醉。迅速打開腹腔，分離出腹主動脈，采血管抽取3mL動脈血，于3000r/min離心10min后取上清，采用ELISA法測定IL-5、IL-13，按試劑盒說明操作。再打開胸腔，游離氣管，取出右肺中葉，于10%甲醛固定，酒精脫水石蠟包埋切片，行蘇木精伊紅（HE）染色，鏡下觀察肺組織病理變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均重復(fù)3次，以SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以（±s ）表示，用One-way ANOVA和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況觀察

實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)正常對照組基本保持常態(tài)，無死亡。模型組霧化吸入出現(xiàn)典型的哮喘癥狀，如呼吸困難、喘息、打噴嚏、抓耳撓腮、躁動不安、大小便失禁等。中藥組大鼠霧化吸入后開始出現(xiàn)較明顯的抓耳朵，呼吸加快、安靜少動、弓背、前肢縮抬、個別嚴(yán)重者可聞及哮鳴音，取出動物后可見遺留較多屎尿。西藥組大鼠偶見抓耳撓腮，偶見打噴嚏，無明顯呼吸困難表現(xiàn)，精神狀態(tài)優(yōu)于較其他各組，取出后屎尿較少。

2.2 HE染色

光鏡下觀察；正常對照組無滲出表現(xiàn)、肺泡結(jié)構(gòu)未見明顯異常，無特殊病理改變；哮喘模型組明顯氣道管腔狹窄，氣道上皮細(xì)胞脫落，杯狀細(xì)胞增多，基底膜、管壁平滑肌增厚，管壁內(nèi)有肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤，可見局部肺泡擴(kuò)張，肺氣腫現(xiàn)象明顯。中藥組和地塞米松組大鼠氣道壁黏膜及周圍組織僅見少量炎性細(xì)胞浸潤，氣道上皮細(xì)胞增生不明顯，管腔內(nèi)黏液分泌物減少。

2.3 IL-5、IL-13檢測及結(jié)果

用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測大鼠血清中IL-5、IL-13含量水平。具體實(shí)驗(yàn)方法參照試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清中IL-5、IL-13含量比較 （ng/L ，±s）

表1 各組大鼠血清中IL-5、IL-13含量比較 （ng/L ，±s）

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05；與地塞米松組比較，#P＜0.05。

Group n IL-5 IL-13正常組 10 47.67±6.39 28.51±15.60模型組 10 79.24±18.07△△54.13±10.96△△地塞米松組 10 63.46±3.75*34.48±2.93*麻芍平喘高劑量組 10 37.05±3.32*#23.37±12.40*#麻芍平喘中劑量組 10 41.94±9.57*#24.61±+7.11*#麻芍平喘低劑量組 10 45.85±5.44*29.83±7.23*陽和平喘組 10 37.33±6.14*22.71±3.32*

3 討 論

支氣管哮喘屬于中醫(yī)“哮病”范疇，肺氣不足，陽虛陰盛，氣不化津，痰飲內(nèi)生，或陰虛陽盛，熱蒸液聚，痰熱膠固，均可致哮［3］。麻芍平喘湯具有祛痰利氣、宣肺平喘功效，方中麻黃發(fā)汗散寒、宣肺平喘，可顯著抑制支氣管痙攣［4］。細(xì)辛解表散寒、溫肺化飲，所含揮發(fā)油、水及醇提取物分別具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)靜作用。五味子收斂肺氣，滋腎陰，對呼吸系統(tǒng)有興奮作用，有鎮(zhèn)咳和祛痰作用。鉤藤清熱透邪。赤芍清熱涼血，所含芍藥苷具有鎮(zhèn)靜、抗炎止痛作用。諸藥合用，共奏化痰止咳、宣肺理氣平喘之功。

氣道炎癥反復(fù)持續(xù)性發(fā)作易導(dǎo)致組織增生而發(fā)生重塑。氣道重塑是哮喘發(fā)病的重要特征，因嗜酸性粒細(xì)胞參與炎癥修復(fù)和肥大細(xì)胞釋放化學(xué)介質(zhì)，導(dǎo)致氣道性粒黏膜繼發(fā)性損傷，是難治性哮喘的病理基礎(chǔ)［5］。Th細(xì)胞能分泌多種細(xì)胞因子，參與哮喘發(fā)病的整個炎癥過程。研究證實(shí)T1亞群細(xì)胞/T2亞群細(xì)胞（Th1/Th2）平衡失調(diào)，Th2細(xì)胞活化亢進(jìn)在哮喘發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用［6］。IL-5、IL-13主要是由Th2細(xì)胞分泌的多效能細(xì)胞因子，可刺激B細(xì)胞的增殖和IgA的合成，后者通過與肥大細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞的作用而誘發(fā)哮喘的急性發(fā)作，在哮喘等過敏性炎癥的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。用SD大鼠予以卵蛋白腹腔注射并吸入霧化激發(fā)法，模擬哮喘發(fā)作和氣道重塑的發(fā)病過程，其主要表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤和腺體增生肥大、杯狀細(xì)胞化生、細(xì)胞外基質(zhì)沉積、基底膜增厚及氣道平滑肌增厚等。IL-5是哮喘中的主要調(diào)節(jié)因子，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示麻芍平喘湯可以阻止IL-5合成或拮抗IL-5受體活性，通過影響IL-5合成、分泌、抑制IL-5受體激活及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)環(huán)節(jié)來防治哮喘。而哮喘小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)IL-13在哮喘發(fā)病機(jī)制中的中樞作用，認(rèn)為IL-13 是依靠誘導(dǎo)B細(xì)胞合成IgE從而引發(fā)變應(yīng)性疾?。?］，IL-13可通過促使氣道纖維化和氣道上皮杯狀細(xì)胞化生，黏液分泌增多而導(dǎo)致氣道阻塞，進(jìn)而導(dǎo)致氣道重塑。麻芍平喘湯可抑制IL-13活性，緩解大鼠氣道炎癥，修復(fù)破壞的氣道結(jié)構(gòu)。麻芍平喘湯、陽和平喘顆粒、地塞米松均有抑制炎細(xì)胞浸潤，改善氣道重塑作用，但中藥效果明顯比西藥地塞米松效果好，其中麻芍平喘湯高劑量組療效最佳，表明麻芍平喘湯治療哮喘具有良好的應(yīng)用前景。

［1］ 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組．支氣管哮喘防治指南［J］．中華結(jié)核和呼吸雜志，2008，31（3）：177-185．

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［3］ 周仲瑛．中醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］．北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012：80．

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R256.126.225

B

1004-2814（2014）12-1074-02

2014-07-21

國家自然科學(xué)基金（81373598）

李澤庚

［Abstrac］Objective：Research on Mashaopingchuan decoction to airway remodelling and IL-5、IL-13 in asthmatic rats. Methods：70 male SD rats were randomLy divided into 7 groups：normal group，model group，hexadecadrol group；Yang HE learns group；Mashaopingchuan decoction high dose group，Mashaopingchuan decoction middle dose group；Mashaopingchuan decoction low dose group.After make model 28 days，normal group and model group were gived normal saline every day；others were gived relevant medicine.2 weeks anatomy rats and bring out lung tissue.Results：The model group of lung tissue pathology changed obviously；The influence of IL-5 and IL-13 in rats serum；Mashaopingchuan decoction groups compared with model group had significant difference（P＜0.05），Chinese medicine groups compared with model group had obviously difference（P＜0.05），Mashaopingchuan decoction high dose group compared with Yang HE learns group no difference（P＞0.05）. Conclusion：Mashaopingchuan Decoction could relieve asthma airway inflammation，intervention airway remodelling.