熊勝利龍清孟楊昌芬

1.貴州省種畜禽種質(zhì)測(cè)定中心，貴陽(yáng) 550018；2.貴州省東南州凱里市龍場(chǎng)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州凱里 556007

規(guī)模豬場(chǎng)O型口蹄疫春秋兩防免疫抗體監(jiān)測(cè)及野毒檢測(cè)

熊勝利1龍清孟1楊昌芬2

1.貴州省種畜禽種質(zhì)測(cè)定中心，貴陽(yáng) 550018；2.貴州省東南州凱里市龍場(chǎng)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州凱里 556007

貴州省某規(guī)模豬場(chǎng)2013年春秋季兩防后，對(duì)基礎(chǔ)母豬群、基礎(chǔ)公豬群和育成豬群（保育豬群、哺乳仔豬群均按滾動(dòng)免疫程序執(zhí)行免疫，不參與春秋兩防）3個(gè)豬群進(jìn)行隨機(jī)抽樣采集血清樣本，O型口蹄疫春防滿4個(gè)月時(shí)采樣345頭份、滿6個(gè)月時(shí)采樣295頭份，秋防滿3個(gè)月時(shí)采樣318頭份，共計(jì)958頭份；采用間接血凝試驗(yàn)進(jìn)行口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)，用NS單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)口蹄疫野毒感染抗體。結(jié)果表明該場(chǎng)口蹄疫秋防滿3個(gè)月時(shí)口蹄疫免疫抗體合格率為75.2%，其中母豬群合格率為83.0%、公豬群合格率為86.7%、育成群合格率為70.4%，只有公豬群與母豬群的抗體合格率達(dá)到了農(nóng)業(yè)部要求的標(biāo)準(zhǔn)（大于等于75%）。而春防口蹄疫疫苗免疫后4個(gè)月時(shí)，抗體水平已下降，抗體合格率低于60%；到6個(gè)月時(shí)，抗體合格率低于40%，均未達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。所有血清樣品中均未檢測(cè)出口蹄疫野毒感染。

O型口蹄疫疫苗；春秋兩防；免疫抗體；野毒感染；檢測(cè)分析

養(yǎng)豬主要疾病有口蹄疫、豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬丹毒、豬肺疫、豬傳染性胸膜肺炎、豬萎縮性鼻炎等，其中豬瘟和口蹄疫被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類傳染病，被我國(guó)農(nóng)業(yè)部列為一類動(dòng)物疫病，是養(yǎng)豬場(chǎng)的強(qiáng)制免疫項(xiàng)目?？谔阋撸╢oot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床上以口腔黏膜、舌

面、鼻鏡、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和潰爛為特征。由于該病的發(fā)生會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失和政治影響，因此受到世界各國(guó)政府的高度重視。貴州省某規(guī)模豬場(chǎng)在春秋兩防時(shí)跟蹤抽樣檢測(cè)口蹄疫抗體水平及野毒感染情況，監(jiān)測(cè)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

春防豬O型口蹄疫時(shí)間為2013年3月4日，7月4日抽樣采血345頭份，7月5日做抗體及野毒檢測(cè)；9月4日抽樣采血298頭份，9月5日做抗體及野毒檢測(cè)。秋防豬O型口蹄疫時(shí)間為2013年9月10日，12月10日抽樣采血318頭份，12月11日做抗體及野毒檢測(cè)。

試驗(yàn)地點(diǎn)為貴州省某規(guī)模豬場(chǎng)。

1.2 檢測(cè)試劑

豬口蹄疫NS單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心；豬O型口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 儀器設(shè)備

微量移液器（0.1～10.0 μL、10～100 μL、100～1 000 μL），購(gòu)自芬蘭；八道微量移液器（100 μL、300 μL），購(gòu)自芬蘭；37℃避光孵育箱、自動(dòng)蒸餾水器（SYZ-A型）、自動(dòng)洗板系統(tǒng)及酶標(biāo)儀（AC100-120），購(gòu)自上海亞榮生化儀器廠；微量振蕩器（MM-1型），購(gòu)自江蘇醫(yī)療儀器廠；高速冷凍離心機(jī)，購(gòu)自德國(guó)Sigma公司。

1.4 免疫接種

認(rèn)知行為護(hù)理作為一種新型的護(hù)理模式，以患者為中心，對(duì)患者的日常行為進(jìn)行評(píng)估，針對(duì)患者的飲食和生活行為進(jìn)行糾正和干預(yù)。進(jìn)而提高患者的治療依從性，保障治療效果，降低疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)通過(guò)改變患者錯(cuò)誤理念，糾正負(fù)面情緒，醫(yī)患間建立相互信任、相互支持的良好關(guān)系，提高協(xié)作有效性，讓患者在心理上對(duì)健康的生活方式加以肯定。

1）接種疫苗。豬O型口蹄疫滅活疫苗（濃縮苗，政府采購(gòu)苗），購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

2）免疫劑量及方式。后備母豬及種母豬接種劑量為4.0～4.5 mL/頭；后備公豬及種公豬接種劑量為4.5～5.5 mL/頭，育成豬接種劑量為3.5～4.0 mL/頭。免疫方式為頸部肌肉注射。

1.5 制備待檢血清

采用前腔靜脈法隨機(jī)抽樣采血，高速冷凍離心機(jī)分離制備血清，放入冰箱1～4℃保鮮層過(guò)夜，次日進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室抗體及野毒檢測(cè)。

1.6 口蹄疫抗體檢測(cè)

1）在凝集試驗(yàn)反應(yīng)板中，每孔加入稀釋液50 μL，每個(gè)樣品加至第10孔。

2）在每排第一孔加入相應(yīng)的待檢血清50 μL，然后依次作倍比稀釋，最后一孔棄去50 μL。每板均設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照及空白對(duì)照。

3）將診斷液搖勻，每孔加入25 μL，加液完畢后將反應(yīng)板置振蕩器上2～4 min，取下反應(yīng)板，蓋上一塊玻璃板，置30℃作用2 h后觀察結(jié)果。

結(jié)果判定：在滿足陽(yáng)性對(duì)照血清效價(jià)不低于10log2、陰性對(duì)照血清和空白對(duì)照均為“—”的條件下，對(duì)待檢血清作出判定?？贵w滴度≥7log2（或1∶27）時(shí)，判為合格；抗體滴度＜7log2時(shí)，判為不合格。為避免判斷誤差，對(duì)抗體滴度處于臨界值的血樣，均重復(fù)檢測(cè)1次。

1.7 用NS單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)口蹄疫野毒感染

1）操作步驟。取包被ELISA板記錄陰、陽(yáng)性對(duì)照；加入陰性對(duì)照樣本原液（2孔）、陽(yáng)性對(duì)照樣本原液（3孔）和已作處理的待檢血清各100 μL，混勻后貼膜，置37℃溫箱孵育30 min；用緩沖液重復(fù)洗滌5次后，分別加入酶結(jié)合物液100 μL，貼膜后置37℃溫箱孵育30 min；再重復(fù)洗滌5次，加入底物液A 50 μL，再加底物液B 50 μL，輕振混勻，置37℃溫箱避光顯色10 min，加入1.25 mol/L H2SO4終止液50 μL，輕振混勻后于酶標(biāo)儀中在450 nm處進(jìn)行檢測(cè)并記錄。

2）成立條件。陰性對(duì)照OD450平均值與陽(yáng)性對(duì)照OD450平均值的差應(yīng)大于等于0.6，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照阻斷率均大于等于55%。阻斷率（lnh%）=（陰性對(duì)照OD450均值-待檢樣品OD450值）÷陰性對(duì)照OD450均值×100%。

3）結(jié)果判定。待檢樣品lnh%≥30%，判為FMDV-NS抗體陽(yáng)性；20%≤待檢樣品lnh%＜30%，判為FMDV-NS抗體可疑；待檢樣品lnh%＜20%，判為FMDV-NS抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

從表1可知，春防O型口蹄疫疫苗免疫4個(gè)月及6個(gè)月時(shí)，所檢測(cè)豬群的O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為59.4%、39.7%，達(dá)不到農(nóng)業(yè)部要求的合格標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性率≥75%）。秋防O型口蹄疫疫苗免疫3個(gè)月時(shí)，母豬群、公豬群的抗體合格率均在80.0%及以上；而育成豬群的抗體合格率為70.4%，未達(dá)到農(nóng)業(yè)部的要求，因此建議口蹄疫疫苗每間隔3個(gè)月免疫1次。

表1 該豬場(chǎng)春、秋兩防O型口蹄疫疫苗免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 該豬場(chǎng)豬口蹄疫感染抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 口蹄疫野毒感染檢測(cè)結(jié)果

從表2可知，在該規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)的基礎(chǔ)母豬群、基礎(chǔ)公豬群和育成豬群中，均未檢測(cè)到口蹄疫野毒感染。

3 討論

預(yù)防口蹄疫的最有效手段是根據(jù)免疫程序定期進(jìn)行免疫接種，因此規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)結(jié)合本場(chǎng)的實(shí)際情況科學(xué)合理地制定一套免疫程序是做好口蹄疫預(yù)防的關(guān)鍵。豬場(chǎng)科學(xué)免疫程序制定的有力依據(jù)是定期跟蹤不同豬群作抗體動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及口蹄疫野毒感染檢測(cè)，及時(shí)掌握不同時(shí)期不同豬群的抗體水平及健康狀況。對(duì)口蹄疫野毒攜帶者及時(shí)采取淘汰凈化處理；對(duì)抗體水平偏低的豬只，采取補(bǔ)免措施；對(duì)補(bǔ)免仍然不產(chǎn)生理想抗體水平的豬只，考慮先天感染或者出現(xiàn)免疫耐受，及時(shí)淘汰處理。另外，對(duì)豬群跟蹤做抗體動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)，還可作為豬場(chǎng)調(diào)整免疫程序的重要依據(jù)。

從該場(chǎng)抗體檢測(cè)的結(jié)果可知，該場(chǎng)豬群在免疫口蹄疫疫苗滿4個(gè)月時(shí)，其抗體水平已下降，總體合格率59.4%，已達(dá)不到農(nóng)業(yè)部要求標(biāo)準(zhǔn)?？梢?jiàn)，該場(chǎng)對(duì)O型口蹄疫疫苗采用每年春秋兩防各免疫一次的方案已經(jīng)不適用。因此，建議基礎(chǔ)母豬群、基礎(chǔ)公豬群及育成豬群的口蹄疫疫苗每間隔3個(gè)月免疫1次。

2014-02-23

貴州省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目（黔科合NY字[2012]3061號(hào)）

龍清孟

熊勝利，男，1967年生，本科，高級(jí)畜牧師。