孟 慧，劉洋洋，楊 云

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所海南分所 海南省南藥資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南萬(wàn)寧571533；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京100093）

自由基及其誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)是導(dǎo)致生物衰老和某些疾病的重要因素，目前在醫(yī)療保健、美容化妝、食品等領(lǐng)域使用合成抗氧化劑已非常普遍，但近期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，某些合成抗氧化劑如對(duì)叔丁基苯甲醚（BHA）、對(duì)叔丁基苯甲醇（BHT）等有潛在的生物毒副作用。天然抗氧化劑廣泛存在于油料、大多數(shù)的香辛料和中草藥中，其中藥用芳香植物在芳香療法中的獨(dú)特功效與其作為抗氧化劑、高效清除體內(nèi)自由基作用密切相關(guān)，因此從天然中草藥中尋找抗氧化劑已成為研究熱點(diǎn)。

據(jù)報(bào)道，薰衣草精油、肉豆蔻精油［1－6］、沉香葉片提取物［7－8］、降香［9］均具有明顯的抗氧化作用。作者在此選取薰衣草、肉豆蔻、沉香、降香等幾種市場(chǎng)常見(jiàn)植物精油的藥用芳香植物，采用DPPH＋FRAP法研究其有效部位水蒸餾提取精油過(guò)程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物純露的抗氧化活性，擬為4種芳香植物的天然抗氧化能力研究提供理論依據(jù)，為開(kāi)發(fā)純露型抗氧化產(chǎn)品、提高資源利用率提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料

薰衣草（Lavandula angustifolia Mill.）、肉豆蔻（Myristica fragrans Houtt.）、沉香［Aquilaria sinen－sis（Lour.）Gilg］、降香（Dalbergia odorifera T.Chen），采自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所南藥園，經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所陳偉平研究員鑒定。

將4種植物材料分別置于50℃烘箱中烘干至恒質(zhì)量，用粉碎機(jī)粉碎，精密稱取500g，用水蒸餾法提取得純露25mL，備用。

1.2 試劑與儀器

1，1－二苯基－2－苦肼基（DPPH）自由基，日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社；三吡啶基三嗪（TPTZ），TCI化成工業(yè)發(fā)展有限公司；二甲基亞砜、無(wú)水乙醇、氯化鐵、醋酸鈉和冰醋酸均為國(guó)產(chǎn)分析純。

TPTZ工作液：先分別配制0.3mol·L－1醋酸鈉緩沖溶液（pH＝3.6）、10mmol·L－1TPTZ溶液、20 mmol·L－1氯化鐵溶液，再將上述3種溶液按體積比10∶1∶1新鮮配制。

96孔板，格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司；酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo公司；電子天平，梅特勒－托利多儀器有限公司。

1.3 DPPH自由基清除率的測(cè)定

將DPPH用乙醇溶解并稀釋至6.5×10－5mol· L－1，取100μL加入96孔板中，再加入100μL純露，使總體積達(dá)到200μL，混勻。用酶標(biāo)儀在517nm處每隔2min測(cè)定吸光度，重復(fù)5次取平均值，按下式計(jì)算清除率：

式中：A0為DPPH溶液100μL＋蒸餾水100μL的吸光度；A1為DPPH溶液100μL＋純露100μL的吸光度；A2為純露100μL＋無(wú)水乙醇100μL的吸光度。

1.4 純露抗氧化能力的測(cè)定

吸取20μL純露于96孔板中，再加入150μL TPTZ工作液，混勻，使最終反應(yīng)濃度為3.76g·L－1，每隔5min在酶標(biāo)儀上593nm處測(cè)定吸光度。以FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得回歸方程y＝0.0035x＋0.17131，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9987。

純露的抗氧化能力以FRAP值表示：1FRAP單位＝1μmol·L－1FeSO4，即純露的抗氧化能力相當(dāng)于FeSO4的μmol·L－1數(shù)。

圖1 純露的抗氧化能力標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The antioxidant activity standard curve of hydrolat

2 結(jié)果與討論

2.1 4種芳香植物純露對(duì)DPPH自由基的清除能力比較（圖2）

圖2 4種芳香植物純露對(duì)DPPH自由基的清除能力Fig.2 DPPH Free radical scavenging activity of hydrolats from four species of aromatic plants

從圖2可以看出：薰衣草純露對(duì)DPPH自由基的清除能力隨時(shí)間的推移而增強(qiáng)，最強(qiáng)出現(xiàn)在48min時(shí)的58.217%；肉豆蔻純露對(duì)DPPH自由基的清除能力隨時(shí)間的推移變化并不明顯，最強(qiáng)出現(xiàn)在12min時(shí)的52.098%；降香純露和沉香純露對(duì)DPPH自由基的清除能力均隨時(shí)間的推移而增強(qiáng)，降香純露最強(qiáng)出現(xiàn)在46min時(shí)的8.525%，沉香純露最強(qiáng)出現(xiàn)在50min時(shí)的9.016%。薰衣草純露和肉豆蔻純露對(duì)DPPH自由基的清除能力明顯強(qiáng)于降香純露和沉香純露。

2.2 4種芳香植物純露的抗氧化能力比較（圖3）

圖3 4種芳香植物純露的抗氧化能力Fig.3 Antioxidant activity of hydrolats from four species of aromatic plants

從圖3可以看出：薰衣草純露和肉豆蔻純露的抗氧化能力隨時(shí)間的推移而增強(qiáng)，且最強(qiáng)都出現(xiàn)在60 min時(shí)，F(xiàn)RAP值分別為458.3μmol·L－1和422.1 μmol·L－1；降香純露和沉香純露的抗氧化能力也隨時(shí)間的推移而增強(qiáng)，最強(qiáng)分別出現(xiàn)在50min和55min時(shí)，F(xiàn)RAP值分別為50.1μmol·L－1和56.1μmol· L－1。薰衣草純露和肉豆蔻純露的抗氧化能力明顯強(qiáng)于降香純露和沉香純露。

3 結(jié)論

采用DPPH＋FRAP法對(duì)薰衣草純露、肉豆蔻純露、沉香純露、降香純露的體外抗氧化活性進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)：對(duì)于DPPH自由基清除能力，薰衣草純露最強(qiáng)，肉豆蔻純露次之，沉香純露第三，降香純露最弱；對(duì)于抗氧化能力，薰衣草純露最強(qiáng)，肉豆蔻純露次之，沉香純露第三，降香純露最弱。表明薰衣草純露、肉豆蔻純露的抗氧化能力明顯優(yōu)于沉香純露、降香純露，可以作為潛在的天然抗氧化劑開(kāi)發(fā)利用。

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