孫鵬浩,王宸,常青

(東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院，江蘇 南京 210009)

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal-stem cells，BMSCs)是干細(xì)胞的一種，存在于骨髓中，它的存在是1976年由Friedenstein等[1]首次提出的。因為其在體外培養(yǎng)過程中容易貼壁并形成纖維樣的克隆，因此也被稱為成纖維細(xì)胞集落形成單位。多數(shù)的BMSCs在體內(nèi)處于休眠狀態(tài)，只有當(dāng)受到一定刺激因素作用時才進(jìn)入細(xì)胞周期，增殖并分化成骨或軟骨組織等之類的細(xì)胞集落。

1 BMSCs的分離培養(yǎng)

目前，體外分離培養(yǎng)BMSCs較為常用的方法有：(1) 全骨髓培養(yǎng)法：因BMSCs體外培養(yǎng)時有貼壁生長的特性，故在無菌獲得的骨髓中加入培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液直接置于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，原代培養(yǎng)時培養(yǎng)物中造血細(xì)胞占大多數(shù)。該方法的優(yōu)點在于操作簡單、細(xì)胞活性好，但所得細(xì)胞的雜質(zhì)細(xì)胞較多，純度不高[2- 3]；(2) 離心培養(yǎng)法：利用骨髓中各種細(xì)胞比重的不同，使用梯度離心法分離并提取BMSCsS后進(jìn)行培養(yǎng)。在骨髓中加入淋巴細(xì)胞分離液稀釋混勻后，以1 500～2 000 r·min-1的速度離心20～30 min，取交界處的單核細(xì)胞層，再用PBS沖洗2～3次，加入培養(yǎng)基中接種培養(yǎng)即可。這種方法優(yōu)點為所獲得細(xì)胞純度較高，但因為淋巴細(xì)胞分離液有一定的細(xì)胞毒性，且整個過程中進(jìn)行了數(shù)次的離心，故而使細(xì)胞的活力降低[2,4]；(3) 細(xì)胞表面分子標(biāo)記分選法：利用BMSCs的細(xì)胞表面標(biāo)記物進(jìn)行分離,這種方法一般利用流式細(xì)胞儀、免疫磁珠或者免疫沉積法。盡管通過此方法獲得的細(xì)胞純度很高，但由于如今研究仍未找到特異性的BMSCs表面標(biāo)記物，而且該方法步驟較多、過程長、成本較高、分選效率低，且對細(xì)胞活性有明顯影響，故較少采用[2,5]。

2 BMSCs的生物學(xué)特性

2.1 形態(tài)學(xué)特征

BMSCs體外培養(yǎng)時細(xì)胞形態(tài)主要表現(xiàn)為梭形、紡錘形，少數(shù)BMSCs為多角形。由于BMSCs細(xì)胞貼壁生長的特性，體外培養(yǎng)時其可以貼附于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶表面，并形成集落或融合層。原代細(xì)胞接種后約1 d就可見細(xì)胞貼壁生長，剛貼壁的細(xì)胞多為單個，形態(tài)多為圓形，首次換液后5～7 d可見集落形成，細(xì)胞形態(tài)呈長梭形、三角形或星形。原代細(xì)胞通常培養(yǎng)10 d左右，可見細(xì)胞增殖迅速，兩周后每個小集落即可形成由數(shù)百至上千個細(xì)胞組成的大集落。

2.2 增殖擴(kuò)增能力

由于骨髓中BMSCs的含量非常少，且數(shù)目隨著供體年齡的增長或身體情況的衰弱數(shù)量會逐漸減少，因此要獲得足量的BMSCs必須在體外進(jìn)行大量擴(kuò)增。而BMSCs增殖擴(kuò)增能力較強(qiáng)，故體外培養(yǎng)條件下可以滿足大量擴(kuò)增的需要。2000年Colter等[6]研究表明，BMSCs在低密度條件下培養(yǎng)仍能保持增殖能力。1999年Conget等[7]發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)約20%的BMSCs處于靜止?fàn)顟B(tài)，盡管如此，體內(nèi)的BMSCs仍能滿足增殖分化的需求。將BMSCs以7 000 cm-2的密度接種，4 d后P1代擴(kuò)增2.4倍，傳至第20～25代時BMSCs在細(xì)胞形態(tài)、生長速率及免疫表型等方面無明顯改變，同時每個BMSCs此時大約擴(kuò)增為5.5×108個細(xì)胞。

2.3 表面標(biāo)記

目前研究表明，BMSCs可以表達(dá)許多種細(xì)胞表面標(biāo)記物，如內(nèi)皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及表皮細(xì)胞等的表面標(biāo)記物。目前已知的BMSCs表達(dá)的表面標(biāo)記物有CD166、CD106、CD102、CD54、CD44、 IL- 1R 、IL- 3R、IL- 4R、IL- 6R、IL- 7R、 IFN- CR、TNF- A、CD49a、CD49b、CD49c、CD104、CD29等。但BMSCs并不表達(dá)造血細(xì)胞類的表面標(biāo)記物，如CD3、CD4、CD8、CD14、CD31、CD34、CD45、CD117等，也不表達(dá)HLA- DR等。目前，關(guān)于BMSCs特異性的表面標(biāo)記物的結(jié)論尚不一致，暫時仍沒有標(biāo)準(zhǔn)的表面標(biāo)記物[8- 11]。

2.4 免疫調(diào)節(jié)

一般組織器官或細(xì)胞移植術(shù)后受體可識別移植物抗原發(fā)生免疫應(yīng)答使得移植物的破壞，從而喪失原有功能。但目前大量相關(guān)試驗發(fā)現(xiàn)，BMSCs用于體內(nèi)治療時很少出現(xiàn)此類免疫排斥反應(yīng)。對于BMSCs如何進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，目前研究主要傾向以下說法[12]。

2.4.1 低免疫原性 BMSCs由于缺少T淋巴細(xì)胞活化所需的第1、2信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，因此無法表達(dá)共刺激分子B71、B72、HLA- Ⅱ類分子及FASL，也不表達(dá)CD40和CD41，所以不能誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的增殖。BMSCs分化成各種細(xì)胞后始終不表達(dá)HLA- Ⅱ類分子，因此也不發(fā)生免疫應(yīng)答。

2.4.2 對免疫細(xì)胞的作用 (1) 對T細(xì)胞的抑制：Krampera等[13]實驗發(fā)現(xiàn)BMSCs可以抑制特異性的記憶T細(xì)胞與幼稚型T細(xì)胞的增殖，但不能抑制抗原反應(yīng)性T細(xì)胞。相關(guān)實驗證明，BMSCs可分泌IL- 2、IL- 6、IL- 7、IL- 8、IL- 10、IL- 11～15、IFN-γ、TNF-α、TGF-β等細(xì)胞因子[14]，而其中的IFN-γ、IL- 10、TNF-α、TGF-β和IL- 2可抑制T細(xì)胞增殖；(2) 對B細(xì)胞的抑制：BMSCs可通過抑制B細(xì)胞的增殖、活化及IgG的分泌，從而起到對B細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用[15- 16]。(3) 對抗原遞呈細(xì)胞的作用：在抗原的遞呈、T細(xì)胞增殖的誘導(dǎo)及B細(xì)胞向漿細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程中，樹突狀細(xì)胞(DC)，且只有成熟的DC發(fā)揮著重要的作用。另外，BMSCs可以通過抑制MHC- Ⅱ及T細(xì)胞共刺激因子的表達(dá)而抑制DC的成熟，最終抑制T細(xì)胞的增殖和活性。

2.5 多分化潛能

BMSCs具有多向分化的潛能，在不同的誘導(dǎo)條件下BMSCs可以分化為不同譜系的細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等[17],其中BMSCs向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌腱細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究及應(yīng)用在骨關(guān)節(jié)領(lǐng)域有著重要的意義。

3 BMSCs的分化機(jī)制及影響因素

BMSCs向不同譜系細(xì)胞的分化過程受到諸多因素的影響，在不同刺激因素的作用下，BMSCs的分化種類有有著很大的區(qū)別。

3.1 成骨細(xì)胞分化

Friedenstein等于1976年時實驗發(fā)現(xiàn)，BMSCs在體外經(jīng)過數(shù)代培養(yǎng)后，部分BMSCs可分化成類似骨或軟骨組織的沉積物[18]。1999年時Pittenger等[19]在培養(yǎng)基中加入地塞米松、抗壞血酸及β- 磷酸甘油等，并用培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)BMSCs，發(fā)現(xiàn)BMSCs可分化為成骨細(xì)胞。后來，Ouyang等[20]利用加有抗壞血酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSCs，然后將其置入受損部位，3周后觀察顯示植入物的結(jié)構(gòu)與正常骨膜相似，且BMSCs向成骨、軟骨分化。目前研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)BMSCs成骨分化的因素很多，研究較多的有地塞米松、轉(zhuǎn)化生長因子、維生素C、D3。實驗證明，地塞米松可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化成熟，同時提高堿性磷酸酶活性[21- 22]。同時，地塞米松可以促進(jìn)BMSCs的礦化作用。除地塞米松以外，研究表明適宜濃度的轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)也能有效促進(jìn)BMSCs的成骨分化，目前TGF-β1也是誘導(dǎo)BMScs分化的首選生長因子之一，其在BMSCs的細(xì)胞生長、成骨分化、骨基質(zhì)合成和骨重建等過程中起著不可或缺的調(diào)控作用。另外，骨形成蛋白也是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族成員的一員，不過體外骨形成蛋白的作用存在種特異性，其可以促進(jìn)大鼠和小鼠的成骨分化，但骨形成蛋白2不能誘導(dǎo)人BMSCs的成骨分化。

3.2 成軟骨細(xì)胞分化

實驗證明，利用加入TGF-β、BMP及整合素的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSCs，BMSCs可向軟骨細(xì)胞分化。在體外培養(yǎng)情況下，BMSCs能分泌軟骨細(xì)胞特征性細(xì)胞外基質(zhì)，如Ⅱ型膠原、氨基多糖等，這進(jìn)一步為BMSCs作為軟骨組織工程的種子細(xì)胞來源提供可能性。除了TGF-β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)可以參與調(diào)控BMSCs成軟骨分化外，還有如地塞米松、維生素C、FGF等，其中地塞米松、TGF-β以及維生素C在其過程中起著重要作用。地塞米松可以增強(qiáng)相關(guān)基因的表達(dá)，提高軟骨細(xì)胞外基質(zhì)標(biāo)記分子的蛋白質(zhì)水平，尤其是Ⅱ型膠原的水平。維生素C本身不能誘導(dǎo)BMSCs成軟骨分化，卻可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的組成與排列促進(jìn)細(xì)胞的自分泌與旁分泌作用，從而使細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化生長因子(如TGF-β1、β2、β3等)能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化，同時可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成分泌。另外，BMP具有誘導(dǎo)BMSCs成軟骨分化的能力。實驗證明，TGF-β1與BMP2聯(lián)合時可以更有效地促進(jìn)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化[23]。

3.3 肌腱細(xì)胞分化

實驗證明BMSCs具有向肌腱細(xì)胞增殖分化的潛能，而BMSCs向肌腱細(xì)胞的分化過程離不開多種細(xì)胞生長因子的共同參與、生物力學(xué)環(huán)境的影響等綜合因素。參與BMSCs成肌腱分化過程的細(xì)胞因子很多，目前已知的有堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、胰島素樣生長因子- 1(IGF- 1)、轉(zhuǎn)化生長因子- D、骨形態(tài)發(fā)生蛋白12(BMPl2)等。bFGF是一種重要的有絲分裂因子，它可以刺激血管形成，加快細(xì)胞的分化增殖并抑制凋亡。IGF- 1可以加快mRNA的轉(zhuǎn)錄及蛋白的合成，促進(jìn)細(xì)胞增殖。bFGF和IGF- 1不僅具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和膠原分泌的能力，也具有促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化的能力[23- 24]。

BMSCs在向不同譜系分化的過程中，除了生長因子還受著諸多影響因素的影響和調(diào)控，如培養(yǎng)方法、微環(huán)境、支架材料及基因等等，其中微環(huán)境包括BMSCs細(xì)胞培養(yǎng)過程中的物理因素、共培養(yǎng)、生物反應(yīng)器等。研究證明，體外培養(yǎng)時低氧條件下BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的能力更強(qiáng)。關(guān)節(jié)軟骨所在的關(guān)節(jié)腔是一種低氧的環(huán)境，在體外低氧環(huán)境下誘導(dǎo)培養(yǎng)的BMSCs向軟骨細(xì)胞分化，與這種低氧環(huán)境模擬了關(guān)節(jié)腔的生理環(huán)境可能有一定的關(guān)系[25]。也有一些研究結(jié)果顯示適當(dāng)?shù)牧W(xué)因素刺激對于BMSCs的分化，尤其是成軟骨分化方面有一定的積極作用[26]。Mouw等[27]發(fā)現(xiàn)一定的力學(xué)刺激可以促進(jìn)TGF-β1的表達(dá)，而TGF-β1可以提高BMSCs對力學(xué)刺激的敏感性。隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)良好的支架材料不僅有利于細(xì)胞貼附生長，還可以誘導(dǎo)BMSCs的分化過程[27- 29]。許多實驗也證明，共培養(yǎng)可以刺激BMSCs的分化增殖，有人將馬的BMSCs與軟骨細(xì)胞以1∶1的比例混合在體外進(jìn)行細(xì)胞團(tuán)塊的培養(yǎng)，結(jié)果共培養(yǎng)組的Ⅱ型膠原、蛋白多糖以及SOX9基因的表達(dá)高于軟骨細(xì)胞對照組。其機(jī)理可能與共培養(yǎng)細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子和特異性細(xì)胞外基質(zhì)，以及共培養(yǎng)細(xì)胞與BMSCs間的信號傳導(dǎo)通路等因素有關(guān)。

4 BMSCs在骨外科的應(yīng)用

基于BMSCs強(qiáng)大的分化潛能及易于分離培養(yǎng)、遺傳相對穩(wěn)定等特性，BMSCs成為組織工程中理想的種子細(xì)胞之一，目前在組織工程、細(xì)胞治療等方面的應(yīng)用日益廣泛，尤其在骨科領(lǐng)域也顯示出了其不同于傳統(tǒng)治療方式的優(yōu)越性。

4.1 骨缺損修復(fù)

隨著組織工程學(xué)技術(shù)的發(fā)展，組織工程學(xué)技術(shù)在臨床上的應(yīng)用也為臨床疾病的治療提供新的方法。例如治療骨缺損時可以將BMSCs與支架材料組成的復(fù)合物移植到骨缺損部位，從而起到良好的治療作用。Borden等[30]在多聚微球基質(zhì)材料中加入BMP- 7及BMSCs并植入大段的骨缺損動物模型中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其可以誘導(dǎo)新骨的長入，且增強(qiáng)BMSCs的成骨活性。Quarto等[31]將BMSCs與羥基磷灰石構(gòu)建的組織工程骨植入動物長骨缺損處，結(jié)果表明實驗組均可完全恢復(fù)患肢肢體的功能。大量實驗結(jié)果表明，將BMSCs與支架材料形成的復(fù)合物或組織工程軟骨植入體內(nèi)骨缺損區(qū)域后，可直接增強(qiáng)病損局部細(xì)胞介導(dǎo)的骨再生能力，快速修復(fù)大段骨缺損。目前利用骨組織工程技術(shù)，BMSCs在治療骨缺損等疾病方面為今后臨床治療骨缺損提供了一種新的、有效的可能。

4.2 軟骨修復(fù)

關(guān)節(jié)軟骨由于缺乏血供且軟骨細(xì)胞自我增殖能力極弱，因此關(guān)節(jié)軟骨損傷時很難自愈，這也是臨床上關(guān)節(jié)軟骨損傷治療的一重大難題。Wakitani等[32]首次將體外純化培養(yǎng)的自體BMSCs復(fù)合Ⅰ型膠原凝膠植入兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損區(qū)域，2周后病灶處即形成透明軟骨，24周后關(guān)節(jié)軟骨缺損處得以修復(fù)，不過與正常關(guān)節(jié)軟骨相比修復(fù)后的軟骨更薄，且部分區(qū)域缺乏軟骨細(xì)胞分泌的蛋白多糖。Yoo等[33]將體外培養(yǎng)的BMSCs導(dǎo)入修飾基因，并將其與軟骨誘導(dǎo)因子一起注入軟骨損傷區(qū)域，結(jié)果發(fā)現(xiàn)受損的關(guān)節(jié)軟骨逐漸得到恢復(fù)。隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，人們將BMSCs嵌入支架材料后植入缺損部位，利用支架直接為細(xì)胞提供所需的生長因子而獲得透明軟骨，修復(fù)軟骨損傷，且修復(fù)的軟骨與周圍組織連接良好[34]。

4.3 肌腱損傷修復(fù)

與關(guān)節(jié)軟骨類似，肌腱組織也缺乏血供且修復(fù)能力弱，因而肌腱的治療也是臨床一大難題。有人將復(fù)合了BMSCs的膠原纖維移植到損傷的肌腱處，發(fā)現(xiàn)其可以促進(jìn)肌腱的修復(fù)。已有研究表明，相比于無BMSCs的膠原纖維，復(fù)合有BMSCs的膠原纖維修復(fù)后的肌腱更粗、膠原纖維束更加成熟，且生物力學(xué)性能也更為優(yōu)越。

5 展 望

隨著組織工程學(xué)技術(shù)的日益發(fā)展，人們對于BMSCs的研究已取得了很大的進(jìn)步，但目前對于BMSCs的研究僅僅剛開始而已，仍有許多難題需要我們進(jìn)一步的研究，如:(1) 進(jìn)一步明確BMSCs特異性的表面標(biāo)記物，建立明確標(biāo)準(zhǔn),這需要我們對BMSCs分化各階段的細(xì)胞表面標(biāo)志物進(jìn)行進(jìn)一步研究。(2) 找到更加理想的支架材料。(3) 轉(zhuǎn)基因技術(shù)的完善，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)染后靶細(xì)胞的更大生物學(xué)效應(yīng)[35]。

[1] FRIEDENSTEIN A J，GORSKAJA U，KULAGINA N N.Fiberoblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs[J].Exp Hematol，1976，4(5):267- 274.

[2] 潘欣宇，崔穎，馬林祥.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用前景[J].中國醫(yī)學(xué)工程,2011,19(5):173- 176.

[3] 張衛(wèi)東，史宏燦，章方彪.兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的比較[J].中華實驗外科雜志,2013,30(7):1360- 1363.

[4] 楊玉霞,鄭健樑,張平.密度梯度離心結(jié)合貼壁法培養(yǎng)成年大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2007,11(3):583- 586.

[5] 張蓉，沈開金，劉彥普.兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及多向誘導(dǎo)分化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2010,14(45):8382- 8385.

[6] COLTER D C，CLASS R，DIGIROLAMO C M，et al.Rapidexpan of recycling stemcells in cultures of plsstic adherent cells from human bone marrow[J].Proc Nat Acid Sci USA，2000，97(7):3213- 3218.

[7] CONGET P A，MINGUELL J J.Phenotypicaland functional properties of human bonemarrow mesenchymal progenitor cells[J].J Cell Physiol，1999，181(1):67- 73.

[8] 劉劍偉，肖增明.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨科組織工程中的應(yīng)用[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，11(46):9375- 9378.

[9] 郭峰，張翠.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].疑難病雜志,2010,9(5):393- 394.

[10] 王慶賢，張英澤，馬哲，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J].中華實驗外科雜志,2003,20(6):575- 576.

[11] 邱林，金先慶.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其臨床治療應(yīng)用[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2008,12(12):2347- 2350.

[12] 潘欣宇，崔穎，馬林祥，et al.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用前景[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2011,19(5):173- 176.

[13] KRAMPERA M，GLENNIE S，DYSON J，et al.Bone marrow mesenchymal stem cells inhibit the response of naive and memory antigen- specific T cells to their cognate peptide[J].Blood，2003，101(9):3722- 3729.

[14] GUO J，LIN G S.Anti- inflammation role for mesenchymal stem cells transplantation in myocardial infarction[J].Inflammation，2007，30(3- 4):97- 104.

[15] AGGARWAL S，PITTENGER M F.Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses[J].Blood，2005，105:1815- 1822.

[16] DENG W，HAN Q，LIAO L，et al.Effects of allogeneic bone marrowderived mesenchymal stem cells on T and B lymphocytes from BXSB mice[J].DNA Cell Biol，2005，24:458- 463.

[17] 傅文玉，路艷蒙，樸英杰.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及多能性研究[J].中華血液學(xué)雜志,2002,23(4):202- 204.

[18] PROCKOP D J.Marrow stromal cell as stem eeUs for nonhematopoietie tissues[J].Science,1997,276(5309):71- 74.

[19] PITTENGER M F，MAEKAY A M，BECK S C，et a1.Multilineage potential adult human mesenchymal stem cells [J].Science,1999,284(54 11 1:143- 147.

[20] OUYANG H W,CAO T,ZOU X H.Mesenchymal stem cell sheets revitalize nonviable dense grafts:implications for repair of largebone and tendon defects[J].Transplantation 2006,82(2):170- 174.

[21] 吳軍，張燕燕.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2007，11(50):10134- 10137.

[22] 李彥林，韓睿，王福科.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨及軟骨組織工程中的應(yīng)用[J].中國臨床康復(fù),2006，10(5):121- 124.

[23] 艾自明，任慧霞，羅俊永.生長因子對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化的影響[J].生命的化學(xué),2010，30(1):33- 37.

[24] 倪明，王巖，李剛.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成肌腱分化促進(jìn)肌腱愈合的實驗研究[D].北京：軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院，2011.

[25] 李寧.低氧微環(huán)境對間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化影響的研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué),2010,39(8):897- 898.

[26] 張永強(qiáng)，楊自權(quán)，衛(wèi)小春.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的影響因素研究進(jìn)展[J].中華實驗外科雜志,2011，28(7):1193- 1194.

[27] MOUW J K,CONNELLY J T,WILSON C G.Dynamic compression regulates the expression and synthesis of chondrneyte- specific matrix molecules in bone marrow strnmal[J].Cells,2007,25:655- 663.

[28] OVIC L D,VARGA I,ZAMBOREKY′ R，et al.The tissue engineering of articular cartilage:cells,scaffolds and stimulating factors[J].Exp Biol Med,2012,237:10- 17.

[29] 張韜，祝少博，喻愛喜.hTGF-β1基因修飾BMSCs復(fù)合藻酸鈣凝膠三維培養(yǎng)構(gòu)建組織工程化軟骨[J].中華顯微外科雜志，2012,35(1):40- 45，97.

[30] BORDEN M，ATTAWIA M，KHAN Y，et al.Tissue- engineered bone formationinvivousing a novel sintered polymeric microsphere matrix[J].J Bone Joint Surg Br，2004，86(B):1200- 1208.

[31] QUARTO R，MASTROGIAEOMO M，CANEEDDA R，et al.Repair of large bone defects by autologous human bone marrow stromal cells[J].N EngI J Med，2001，344(5):385- 386.

[32] WAKITANI S,GOTO T,PINEDA S J.Mesenchymal cell- based repair of large, full thickness defects of articular cartilage[J]. J Bone Joint Surg Am,1994(4):579- 592.

[33] YOO J U，MANDEU L，ANGELE P，et al.Chondrogenitor cells and gene therapy[J].Clin Orthop，2000，379(suppl):64- 70.

[34] 譚洪波，楊柳.局部關(guān)節(jié)軟骨和骨軟骨損傷修復(fù)策略的研究進(jìn)展[J].中華關(guān)節(jié)外科雜志,2012,4(6):795- 802.

[35] 崔鳳鳴，朱海濤，包善華,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為胰腺癌基因治療載體的實驗研究[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2011,39(4):387- 392.