楊少冉，高 菁，陳艷昆，潘海峰，趙勝男

(1．承德醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)系2011級，河北承德 067000;2．指導(dǎo)教師)

學(xué)生園地

紫外-可見分光光度法動態(tài)分析承德地區(qū)山楂葉總黃酮的含量

楊少冉1，高 菁1，陳艷昆1，潘海峰2，趙勝男2

(1．承德醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)系2011級，河北承德 067000;2．指導(dǎo)教師)

山楂葉;紫外-可見分光光度法;采收期;總黃酮

山楂葉為薔薇科植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge. Var. Major N. E. Br.)或山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥葉，夏、秋二季采收[1]。山楂葉中所含的黃酮類成分具有降壓、降糖、降脂、強(qiáng)心等多種藥理作用，尤其對缺血性心肌損傷有明顯的保護(hù)作用[2]。山楂葉早在東晉時代就有入藥治病的記載，本草綱目謂山楂葉煮汁治漆瘡，現(xiàn)在已經(jīng)被2010版《中華人民共和國藥典》收載[3]。山楂葉主產(chǎn)于河北承德、興隆以及遼寧、山東和山西等地[4]。不同產(chǎn)地、不同采收期的中藥材，所含有的化學(xué)組分以及含量可能會有所不同，因此，考察山楂葉的最佳采集期對提高山楂葉的利用具有重要的科學(xué)意義。本研究應(yīng)用楂葉的紫外-可見分光光度法測定不同采收期承德產(chǎn)山楂葉中總黃酮的含量，同時進(jìn)行動態(tài)分析，并確定了最佳采收期，為山楂葉的質(zhì)量評價提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

8453 紫外-可見分光光度儀，美國惠普公司;AG-245電子分析天平，瑞士梅特勒公司;KQ-700型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。蘆丁對照品(批號:100080-200707)，中國藥品生物制品檢定所;供試品山楂葉采自承德(5-11月每月采集一次，采摘后立即暴曬、晾干)由河北民族師范學(xué)院董建新教授鑒定為薔薇科山楂屬植物山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥葉;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱量在120℃干燥至恒重的蘆丁對照品25mg，置50ml量瓶中，加無水乙醇適量，超聲溶解，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻。精密量取上述溶液20ml，置50ml量瓶中，加純凈水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1ml含無水蘆丁0.2mg)。

2.2 供試品溶液的制備[1]精密稱量山楂葉粉末(過60目篩)1g，置索氏提取器中，加三氯甲烷45ml水浴回流提取至提取液無色(約6h)，棄去三氯甲烷，藥渣在通風(fēng)櫥中揮去三氯甲烷，加甲醇45ml繼續(xù)提取至溶液無色(約4h)，把提取液置于蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加50.0%稀乙醇溶解，所得溶液轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加50.0%稀乙醇稀釋至刻度，搖勻、濾過、取續(xù)濾液。精密量取續(xù)濾液5ml，移置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。所得溶液精密量取2ml，置25ml量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[1]精密量2.1中的對照品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置于25ml量瓶中，分別加純凈水至6ml;加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min;加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min;再加氫氧化鈉試液10ml，加水稀釋至刻度，搖勻后放置15min。以不加對照品溶液為空白液，采用紫外-可見分光光度法，在波長500nm處測定吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，Y=9.7083X-0.0082，r=0.9999。

2.4 精密度試驗 精密量2.1中對照品溶液2ml，6份，按2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“加水至6ml”起測定吸光度值，RSD值為1.9%，表明本方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗 取山楂葉粉末6份，按照2.2的方法制備供試品溶液，按2.3的方法，自“加水至6ml”起測定吸光度，RSD值為1.2%，表明本方法重復(fù)性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批山楂葉粉末，按2.2的方法制備供試品溶液，按2.3的方法，自“加水至6ml”起依法處理。分別于顯色后15、30、45、60min時測定吸光度值，RSD值為0.98%，表明樣品溶液在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 不同采收期山楂葉中總黃酮的含量 分別取承德產(chǎn)不同采收期的山楂葉粉末1g，每期山楂葉取3個樣本，按2.2的方法制備供試品溶液，按2.3的方法，自“加水至6ml”起測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算山楂葉中總黃酮的含量。5月-11月山楂葉中總黃酮的含量分別為6.28%、7.79%、6.93%、7.11%、5.77%、7.40%、6.69%。表明，總黃酮含量隨采收期的不同而變化，6月份的含量最高。

3 討論

目前，從山楂葉中分離出了多種黃酮類化合物、有機(jī)酸類化合物、微量元素、含氮化合物等。山楂葉總黃酮(又稱益心酮)是從山楂葉中提取的黃酮類化合物的總稱，是山楂葉中主要的有效成分，山楂葉總黃酮含有如槲皮素、蘆丁、金絲桃苷、金絲桃素、牡荊素、牡荊素鼠李糖苷、葡荊牡黃酮、山楂納新和去乙酰山楂納酰等[5]。黃酮類化合物是一類具有C6-C3-C6基本母核的天然有色成分，廣泛存在于中藥、天然產(chǎn)物和食物中，通過連接一些糖基以黃酮苷的形式存在，被稱為天然前體藥物[6-7]。

本研究所用山楂葉采集后立即暴曬、晾干，及時殺酶，防止黃酮酶解，保證了黃酮類成分的穩(wěn)定，且每次采樣都選取同一批山楂樹，使實(shí)驗結(jié)果具有可比性。本研究結(jié)果表明，不同采收期的山楂葉總黃酮含量有明顯不同，以承德6月產(chǎn)的山楂葉總黃酮含量為最高。因此，如果以提取山楂葉中的總黃酮類化合物為目的，應(yīng)該選擇6月的山楂葉。目前，關(guān)于不同采收期山楂葉的研究較少，有的研究認(rèn)為山楂葉最佳采收期為10月，可能原因是所選山楂葉的產(chǎn)地不同[8]。不同的產(chǎn)地，生長環(huán)境、海拔、溫度等因素都會對山楂葉中的成分及含量產(chǎn)生一定影響。

本研究以承德產(chǎn)不同采收期山楂葉中總黃酮含量為指標(biāo)，為山楂葉的合理的采收、利用以及深入研究提供了理論依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.30，372.

[2]李永杰,馬秀琴,冷愛晶,等.不同采收期山楂葉中總黃酮含量測定[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,13(1):54-55.

[3]許正斌,高奎斌,許雙貴.山楂葉綜述[J].中醫(yī)藥學(xué)報, 1985,(4):49-51.

[4]中國科學(xué)院.中國植物志(第36卷)[M].北京:科學(xué)出版社，1997.189.

[5]耿慧春,滿盈,趙志勇.山楂葉化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2009,47(26):12-13.

[6]馬國.山楂葉總黃酮吸收機(jī)理與吸收調(diào)控研究[D].成都:四川大學(xué)，2007.

[7]Nikolov N,Seligmann O,Wagner H,et al. New flavonoidglycosides from Crataegus monogyna and Crataegus pentagyna[J].Planta Med,1982,44(1):50-53.

[8]周元芬,劉江.山楂葉不同采集時間對總黃酮含量影響的研究[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2008,22(1):63.

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2013-06-13)