張 穩(wěn) 謝奉軍 金 敏 周歧存* 黎 明 韓昌茂

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)廣泛分布于我國(guó)沿海，具有肉質(zhì)好、生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，頗受廣大消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶的青睞，是我國(guó)重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)蟹類，在海洋捕撈和海水養(yǎng)殖業(yè)中占有極其重要的地位。據(jù)農(nóng)業(yè)部漁業(yè)局統(tǒng)計(jì)，2009年全國(guó)三疣梭子蟹的養(yǎng)殖面積為3.18 萬(wàn) hm2，產(chǎn)量達(dá)到 9.58 萬(wàn) t，年增幅達(dá)14.3%。長(zhǎng)期以來，三疣梭子蟹養(yǎng)殖過程中多采用低值小雜魚和貝類直接投喂，這些生物餌料不僅營(yíng)養(yǎng)不平衡，而且還會(huì)破壞海洋漁業(yè)資源、污染水域環(huán)境、誘發(fā)梭子蟹養(yǎng)殖病害。因此，研制營(yíng)養(yǎng)全面、優(yōu)質(zhì)高效的人工全價(jià)配合飼料已成為該產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展的迫切需要。目前有關(guān)蟹類的少量研究主要集中在蛋白質(zhì)、脂肪、粗纖維營(yíng)養(yǎng)等［1－3］方面，且這些研究通常采用群體養(yǎng)殖方式，導(dǎo)致個(gè)體間差異較大、殘殺現(xiàn)象嚴(yán)重、成活率和增重率低等［4］，使得試驗(yàn)結(jié)論的準(zhǔn)確性難以保證。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，將蟹個(gè)體分開單獨(dú)飼養(yǎng)，不僅可以防止蟹在蛻殼期間因相互殘殺而獲得飼料外的營(yíng)養(yǎng)源，而且可以降低群體養(yǎng)殖試驗(yàn)中易出現(xiàn)的相互殘殺及個(gè)體大小分化嚴(yán)重等現(xiàn)象［5－6］，從而可以對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行更準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)。

研究認(rèn)為，海水養(yǎng)殖動(dòng)物的必需脂肪酸(EFA)主要包括 C22 ∶6n－3(DHA)、C20 ∶5n－3(EPA)和C20∶4n－6(ARA)3種高不飽和脂肪酸(HUFA)。對(duì)海水魚魚卵的脂肪酸組成分析發(fā)現(xiàn)，DHA和EPA在總脂肪酸中所占比重非常高，并且這種高水平一直持續(xù)于胚胎發(fā)育的全過程中，說明這2種脂肪酸在胚胎發(fā)育的過程中發(fā)揮著重要的作用。Tandler等［7］發(fā)現(xiàn)，在饑餓條件下大部分脂肪酸被消耗掉，而 DHA、EPA、ARA(特別是DHA)卻被大量保存下來，說明這3種脂肪酸對(duì)海水魚類的生長(zhǎng)發(fā)育發(fā)揮著不可替代的作用。由于海水動(dòng)物自身不能合成DHA、EPA或合成速度不能滿足其需要［8］，因此餌料來源的 DHA、EPA對(duì)海水動(dòng)物有著重要的意義。DHA和EPA作為脂類重要的組成成分可以為機(jī)體提供能量，特別是在消化系統(tǒng)發(fā)育不完善的早期階段，脂肪酸作為能量提供者的作用更加顯著［9］。DHA和EPA還是細(xì)胞膜磷脂的重要組成成分，在維持細(xì)胞膜通透性、細(xì)胞識(shí)別、信號(hào)傳遞、纖維素合成和微纖絲的組裝等方面發(fā)揮著重要作用。此外，DHA和EPA對(duì)海水動(dòng)物的免疫調(diào)節(jié)有著重要作用［10－11］。目前，研究人員已在海水魚類、甲殼類中開展了DHA 和 EPA 生理功能和需求量的研究［12－23］，但尚未有關(guān)于三疣梭子蟹飼料n－3 HUFA營(yíng)養(yǎng)需求的報(bào)道。

綜上所述，本試驗(yàn)擬以三疣梭子蟹幼蟹為研究對(duì)象，采用單體養(yǎng)殖的方式，探討飼料中 n－3 HUFA含量對(duì)其生長(zhǎng)性能及脂肪酸組成的影響，為三疣梭子蟹高效配合飼料的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

DHA微藻油(DHA含量為40.00%，EPA含量為2.44%)，由江蘇天凱生物科技有限公司提供;EPA精制油(EPA含量為45%，DHA含量為25%)，由河北海源康健生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)飼料

以秘魯紅魚粉、豆粕、小麥蛋白粉和磷蝦粉為主要蛋白質(zhì)源，以魚油、大豆油為主要脂肪源配制基礎(chǔ)飼料。分別在基礎(chǔ)飼料中添加 0、0.65%、1.30%、1.95%、2.60%和 3.25%(干物質(zhì)基礎(chǔ))的DHA+EPA并相應(yīng)降低豆油的添加量，配制成n－3 HUFA 含量分別為 0.74%、1.14%、1.55%、1.94%、2.35%和2.76%(干物質(zhì)基礎(chǔ))的6種等氮等能試驗(yàn)飼料(表1)，并使各試驗(yàn)飼料的DHA/EPA均為1.1。所有飼料原料過80目篩，混勻后添加油脂和水(原料混合物干重的40%)，以雙螺桿擠條機(jī)擠壓并經(jīng)飼料顆粒機(jī)制成2種規(guī)格的顆粒飼料(直徑3 mm，長(zhǎng)度 5 mm;直徑 5 mm，長(zhǎng)度7 mm)，飼料90℃熟化30 min，陰涼處風(fēng)干，用封口袋包裝后于－20℃下保存待用。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在寧波市象山縣東陳鄉(xiāng)鑫億梭子蟹水產(chǎn)公司進(jìn)行，試驗(yàn)用三疣梭子蟹幼蟹購(gòu)自寧波兢業(yè)育苗廠，幼蟹置于室外水泥池中暫養(yǎng)。本試驗(yàn)采用單體筐養(yǎng)的方式，塑料筐規(guī)格為80 cm×40 cm×40 cm，養(yǎng)殖筐中間設(shè)置一隔板，隔板兩邊各放一裝有沙子的沙盒，作為幼蟹的棲息場(chǎng)所，沙盒規(guī)格為25 cm×15 cm×10 cm。試驗(yàn)挑選360只初始體重在2.20 g左右的幼蟹，隨機(jī)分配于180只塑料筐中(2只/筐)，塑料筐隨機(jī)分組，每種試驗(yàn)飼料投喂60只幼蟹，每20只幼蟹作為1個(gè)重復(fù)。正式試驗(yàn)開始前，統(tǒng)一用基礎(chǔ)飼料(含0.74%的n－3 HUFA)馴化1周，正式試驗(yàn)開始后每種試驗(yàn)飼料每天投喂2次(07:00和17:00)，投喂量控制在幼蟹體重的6%～8%。每天早晨撈取殘餌和蛻殼，記錄死亡數(shù)、投餌量和蛻殼次數(shù)。所有試驗(yàn)用塑料筐置于1個(gè)水泥池(70 m×80 m×0.6 m)中，池底鋪設(shè)充氧管不間斷充氧，試驗(yàn)期間水溫26～30 ℃、溶解氧濃度 6.5～7.0 mg/L、氨氮濃度≤0.5 mg/L、pH 7.8～8.2、鹽度 26‰～28‰，2～3 d換水1次，每次換水量約為30%。試驗(yàn)期為8周。

1.4 取樣與分析

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，清點(diǎn)每組存活的幼蟹數(shù)量。停食24 h后取樣，每組幼蟹分別稱重，計(jì)算增重率和特定生長(zhǎng)率，然后每組隨機(jī)取4只幼蟹解剖取其肌肉和肝胰腺，肝胰腺稱重后立即放入離心管中，－20℃冰柜中保存，用于脂肪酸組成分析。每組另隨機(jī)取4只幼蟹進(jìn)行常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。

用于常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析的飼料和幼蟹樣品置于105℃烘箱中至恒重，測(cè)定方法參照AOAC(1995)。水分含量由烘干前后樣品的質(zhì)量計(jì)算而得;粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮儀(FOSS，Tecator，Hoganas，Sweden)測(cè)定樣品的總氮量，通過總氮量乘以6.25而得;粗脂肪含量采用索氏抽提儀(Soxtec System HT6，Tecator，Sweden)測(cè)定;粗灰分含量采用灼燒法測(cè)定，樣品置于馬福爐中550℃下灼燒8 h至恒重。所有指標(biāo)均重復(fù)測(cè)定2次，若同一樣品測(cè)定結(jié)果相對(duì)偏差大于2%，則增加重復(fù)數(shù)，采用相對(duì)偏差2%以內(nèi)的2個(gè)測(cè)定值的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis) %

用作脂肪酸組成分析的飼料和幼蟹樣品均在避光的條件下－57℃冷凍干燥至恒重，取0.1 g左右冷凍干燥好的樣品，用 Bligh－Dyer法［24］提取總脂，向總脂中加入2 mL 5%～6%氫氧化鉀－甲醇(4 ∶1，體積比)溶液，充氮?dú)? min，60 ℃水浴2 h，冷卻，移入離心管，加飽和氯化鈉溶液1 mL，混勻，用1∶1(體積比)的鹽酸調(diào)至pH＜1，用氯仿－正己烷(1∶4，體積比)溶液2 mL提取3次，提取液合并后用2 mL重蒸水洗1次，低溫真空干燥得脂肪酸。向脂肪酸樣品中加0.5 mL 14%三氟化硼甲醇液，充氮?dú)? min，60℃水浴1 h，冷卻，加1 mL飽和氯化鈉溶液，用2 mL正己烷提取2次，再用3 mL氯仿－正己烷(1∶4，體積比)溶液提取1次，合并提取液，加入3 g無(wú)水硫酸鈉吸水，取上層液蒸干，0.5 mL分析純正己烷定容，上機(jī)分析。

氣相色譜(GC)條件:進(jìn)樣口溫度250℃，載氣為純度 99.99%的高純氦氣，柱流速0.81 mL/min，柱 前 壓 73.0 kPa，柱 起 始 溫 度150 ℃，保持3.5 min，以20 ℃ /min升至200 ℃，再以5℃/min升至280℃，保持37 min。分流進(jìn)樣1μL，分流比50∶1。質(zhì)譜(MS)條件:離子源選用電子轟擊(electron impact，EI)源，電子能量為70 eV，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，選取全程離子碎片掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍為40～600，溶劑延遲 3.5 min。用化學(xué)電離(chemical ionization，CI)源分析時(shí)，反應(yīng)氣為甲烷。

脂肪酸的定性與定量:根據(jù)氣質(zhì)聯(lián)用總離子流(GC－CIMS－TIC)圖譜中各組分的質(zhì)譜，可以初步確定出各組分的分子質(zhì)量;再根據(jù)各組分的離子碎片質(zhì)量圖譜，通過查詢美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(NIST)數(shù)據(jù)庫(kù)并參考脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)圖譜定性出所有脂肪酸。用面積歸一法［25］求得各脂肪酸的相對(duì)百分含量。

1.5 計(jì)算公式

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 17.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one－way ANOVA)，若組間差異顯著(P＜0.05)，則進(jìn)行Tukey多重比較。結(jié)果均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長(zhǎng)性能

經(jīng)過8周的生長(zhǎng)試驗(yàn)，各組幼蟹均沒有發(fā)生死亡現(xiàn)象。結(jié)果(表2)顯示，增重率和特定生長(zhǎng)率均在2.35%組獲得最高值，并顯著高于0.74%、1.14%和 1.55%組(P＜0.05)，但與 1.94%和2.76%組沒有顯著差異(P＞0.05);2.35%組飼料效率最高，顯著高于其他各組(P＜0.05);2.35%組蛻殼率最高，顯著高于 0.74%、1.14%和1.94%組(P＜0.05)，但與 1.55%和 2.76%組沒有顯著差異(P＞0.05)。飼料中n－3 HUFA含量對(duì)肝胰腺指數(shù)沒有顯著影響(P＞0.05)。以特定生長(zhǎng)率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得折線回歸方程 y=0.074x+5.284(R2=0.995，x＜2.357)和 y= － 0.122x+5.746(R2=1.000，x＞2.357)，由此估測(cè)出三疣梭子蟹幼蟹飼料中 n－3 HUFA的適宜含量為2.357%(干物質(zhì)基礎(chǔ)，圖1)。

表2 飼料中n-3 HUFA含量對(duì)三疣梭子蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary n－3 HUFA content on growth performance of juvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)(n=3)

圖1 飼料中n-3 HUFA含量與三疣梭子蟹幼蟹特定生長(zhǎng)率的關(guān)系Fig.1 Relationship between dietary n－3 HUFA content and SGR of juvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)

2.2 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分

幼蟹常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果(表3)顯示，水分、粗灰分和粗蛋白質(zhì)含量各組之間沒有顯著差異(P＞0.05);粗脂肪含量隨著飼料中n－3HUFA含量的增加基本呈先升高后降低的趨勢(shì)，以1.55%組含量最高，顯著高于 0.74%、1.14%、1.94%和2.76%組(P＜0.05)，與 2.35%組沒有顯著差異(P＞0.05)。

2.3 肌肉和肝胰腺脂肪酸組成

脂肪酸組成檢測(cè)結(jié)果(表4、表5)顯示，幼蟹肌肉及肝胰腺中的脂肪酸組成受到飼料中n－3 HUFA含量的影響。

幼蟹肌肉中DHA和EPA含量均在2.76%組達(dá)到最高值，顯著高于其他各組(P＜0.05)，二者在0.74%組的含量均最低，顯著低于其他各組(P＜0.05);肌肉中多不飽和脂肪酸(PUFA)和n－3 HUFA含量均在2.76%組達(dá)到最高值，顯著高于其他各組(P＜0.05)，二者在 0.74%組的含量均最低，顯著低于其他各組(P＜0.05)。此外，肌肉中n－3 HUFA含量與飼料中n－3 HUFA含量存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系(y=9.178x－7.736，R2=0.822，P＜0.01，圖 2)。

表3 飼料中n-3 HUFA含量對(duì)三疣梭子蟹幼蟹常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響Table 3 Effects of dietary n－3 HUFA content on common nutrient components of juvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)(n=3) %

幼蟹肝胰腺中DHA和EPA含量均在2.76%組達(dá)到最高值，顯著高于其他各組(P＜0.05);肝胰腺中n－3 HUFA含量在2.76%組達(dá)到最高值，顯著高于其他各組(P＜0.05)。此外，肝胰腺中n－3 HUFA含量與飼料中n－3 HUFA含量存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系(y=2.354x－0.853，R2=0.847，P＜0.01，圖 3)。幼蟹肝胰腺中 DHA、EPA 和 n－3 HUFA 含量在 0.74%、1.14%和 1.55%組之間沒有顯著差異(P＞0.05)。

比較肌肉和肝胰腺中脂肪酸組成可以看出，除0.74%組外，肝胰腺中的 C16 ∶0、C18 ∶0、C18 ∶1n－9、C18 ∶2n－6、飽和脂肪酸(SFA)含量高于肌肉中相應(yīng)脂肪酸的含量，而肌肉中的EPA、DHA、n－3 HUFA含量則高于肝胰腺中相應(yīng)脂肪酸的含量。

3 討論

目前，大量的研究已證實(shí)飼料中的脂肪酸，特別是EPA和DHA等長(zhǎng)鏈PUFA是蟹類的必需脂肪酸，對(duì)蟹類的蛻殼、生長(zhǎng)和生殖均具有重要作用［26］。但在對(duì)海洋蟹類的研究中發(fā)現(xiàn)，亞油酸(LA，即 C18 ∶2n－6)、亞麻酸(LNA，即 C18 ∶3n－3)并不是它們的必需脂肪酸，海水蟹類缺乏將C18不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化成HUFA(如EPA、DHA)的能力［23，27］。Takeuchi等［23］分別以淡水小球藻、玉米油及EPA和DHA油強(qiáng)化的輪蟲投喂三疣梭子蟹仔蟹，研究發(fā)現(xiàn)淡水小球藻和玉米油強(qiáng)化組仔蟹的存活率和生長(zhǎng)速度均較低，而EPA、DHA油強(qiáng)化組仔蟹的存活率及生長(zhǎng)速度均顯著高于前2個(gè)組，因此認(rèn)為EPA、DHA是三疣梭子蟹仔蟹的必需脂肪酸，并得出飼料中n－3 HUFA的適宜含量為 0.9%～1.7%(干物質(zhì)基礎(chǔ))。Suprayudi等［27］分別以油酸(OA，即 C18 ∶1n－9)、LA、LNA 以及EPA和DHA強(qiáng)化的輪蟲投喂溞狀幼體Ⅰ期(Z1)和溞狀幼體Ⅱ期(Z2)的青蟹仔蟹，研究發(fā)現(xiàn)OA、LA和LNA強(qiáng)化后仔蟹體脂肪酸中EPA含量由1.2%下降到 0.4%～0.8%、DHA 含量由 0.5%下降到0.1%～0.2%，且出現(xiàn)存活率降低、蛻殼周期延長(zhǎng)、生長(zhǎng)緩慢等現(xiàn)象，說明OA、LA和LNA并非青蟹仔蟹的必需脂肪酸，推測(cè)青蟹缺乏將C18脂肪酸轉(zhuǎn)化成HUFA的能力，或者此能力較低。本試驗(yàn)中，將飼料中 n－3 HUFA含量由0.74%增加到2.35%后提高了三疣梭子蟹幼蟹的生長(zhǎng)速度和飼料效率，但進(jìn)一步提高n－3 HUFA含量到2.76%則生長(zhǎng)速度和飼料效率反而有所下降，這與之前在中華絨螯蟹［28－29］、鋸緣青蟹［2，27，30］上的研究結(jié)果相一致。另外，Suprayudi等［27］研究發(fā)現(xiàn)，飼喂未營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化鹵蟲幼體的青蟹發(fā)育到Ⅰ期時(shí)表現(xiàn)出蛻殼周期延長(zhǎng)和甲殼寬狹窄的現(xiàn)象，認(rèn)為餌料中的DHA對(duì)于幼蟹的蛻殼發(fā)揮著重要的作用。甲殼動(dòng)物蛻殼是由蛻皮固醇調(diào)節(jié)的，蛻皮固醇是由Y器

官分泌的，分泌后釋放到血淋巴中，直接調(diào)節(jié)蛻皮(殼)活動(dòng)［31］。［3H］－蛻皮酮在胚胎和幼體體內(nèi)能夠代謝轉(zhuǎn)化為3種不同的復(fù)合物，其中一種是C22共軛脂肪酸，因此推測(cè)C22脂肪酸(如DHA)可能通過調(diào)控蛻皮固醇代謝而調(diào)節(jié)青蟹幼體的蛻殼。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，飼料中 n－3 HUFA含量為2.35%時(shí)提高了三疣梭子蟹幼蟹的蛻殼率，進(jìn)一步提高飼料中n－3 HUFA含量至2.76%后三疣梭子蟹幼蟹的蛻殼率反而有所降低，這一趨勢(shì)與特定生長(zhǎng)率相似。本試驗(yàn)以特定生長(zhǎng)率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過折線回歸方程 y=0.074x+5.284(R2=0.995，x＜2.357)和y=－0.122x+5.746(R2=1.000，x＞2.357)，估測(cè)出三疣梭子蟹幼蟹飼料中n－3 HUFA的最適含量為2.357%(干物質(zhì)基礎(chǔ))。本研究結(jié)果高于在河蟹幼蟹［28］、河蟹仔蟹［29］、青蟹幼蟹［32］、青蟹仔蟹［27］及三疣梭子蟹仔蟹［23］中的研究結(jié)果，這可能與以下因素有關(guān):1)試驗(yàn)動(dòng)物品種不同;2)試驗(yàn)方法不同，本試驗(yàn)采用在配合飼料中添加n－3 HUFA，而目前對(duì)蟹類的研究大都采用強(qiáng)化生物餌料的方式;3)生長(zhǎng)階段不同，本試驗(yàn)采用體重為2.09～2.27 g的幼蟹，Takeuchi等［23］采用的是三疣梭子蟹仔蟹;4)養(yǎng)殖方式不同，本試驗(yàn)采用單體筐養(yǎng)方式，而目前對(duì)蟹類的研究大都采用群體養(yǎng)殖方式。

表4 飼料中n-3 HUFA含量對(duì)三疣梭子蟹幼蟹肌肉脂肪酸組成的影響Table 4 Effects of dietary n－3 HUFA content on muscle fatty acid composition of juvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)(n=3) %

表5 飼料中n-3 HUFA含量對(duì)三疣梭子蟹幼蟹肝胰腺脂肪酸組成的影響Table 5 Effects of dietary n－3 HUFA content on hepatopancreas fatty acid composition ofjuvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)(n=3) %

圖2 飼料中n-3 HUFA含量與三疣梭子蟹幼蟹肌肉中n-3 HUFA含量的關(guān)系Fig.2 Relationship between dietary n－3 HUFA content and muscle n－3 HUFA content of juvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)

在常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分方面，隨飼料中n－3 HUFA含量的提高，幼蟹水分和粗灰分含量總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，粗蛋白質(zhì)含量則呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，但各組之間并沒有顯著性差異。Houlihan等［33］認(rèn)為，魚類的生長(zhǎng)主要體現(xiàn)在魚體蛋白質(zhì)沉積的增加，本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)三疣梭子蟹幼蟹粗蛋白質(zhì)含量與特定生長(zhǎng)率的變化趨勢(shì)相似。薛敏等［34］在牙鲆的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中EPA和DHA的存在使得肌肉脂肪總量有所增加，肌肉粗脂肪含量起初隨著EPA、DHA含量增加而增加，但更高含量的EPA、DHA并沒有進(jìn)一步增加牙鲆肌肉的粗脂肪含量。本試驗(yàn)結(jié)果與之類似，三疣梭子蟹幼蟹粗脂肪含量隨著飼料中n－3 HUFA含量的提高基本呈先升高后降低的趨勢(shì)，以1.55%組含量最高，顯著高 于 0.74%、1.14%、1.94% 和 2.76% 組，與2.35%組沒有顯著差異。這說明飼料中的n－3 HUFA含量可以影響三疣梭子蟹幼蟹機(jī)體的脂肪代謝，具體的影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

大量研究表明，飼料脂肪酸組成直接影響到養(yǎng)殖對(duì)象的脂肪酸組成［35－39］。相似地，本試驗(yàn)中三疣梭子蟹幼蟹肌肉及肝胰腺中的脂肪酸組成也受到飼料中脂肪酸組成的影響。三疣梭子蟹幼蟹肌肉及肝胰腺中 n－3 HUFA含量與飼料中 n－3 HUFA含量之間均存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系。Sargent等［9］認(rèn)為，魚類所有組織中的脂肪酸的一個(gè)重要的功能就是通過β氧化為機(jī)體提供三磷酸腺苷(ATP)，只是不同的脂肪酸的利用順序有所差異。大菱鲆(Scophthalmus maximus)和金頭鯛(Sparus aurata)等在胚胎發(fā)育階段和仔魚吸收卵黃內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)的發(fā)育階段，脂肪酸按照以下順序被先后利用:n－9 系列、n－6 系列、n－3 系列。在這一過程中，SFA和單不飽和脂肪酸(MUFA)作為內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)階段的重要能源被首先利用，而必需脂肪酸中的DHA、EPA、ARA則選擇性地被優(yōu)先保存下來［40］。本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步說明肝胰腺是甲殼動(dòng)物脂肪酸代謝的主要器官，比較肌肉和肝胰腺脂肪酸組成可以發(fā)現(xiàn)，C16 ∶0、C18 ∶0、C18 ∶1n－9、C18∶2n－6、SFA等供能脂肪酸主要集中在肝胰腺中，而DHA、EPA等必需脂肪酸則被優(yōu)先保存于肌肉中。此外，三疣梭子蟹幼蟹肝胰腺中DHA、EPA、n－3 HUFA 含 量 并非完全隨著飼 料 中 n－3 HUFA含量的增加而增加，0.74%、1.14%和1.55%組幼蟹肝胰腺中DHA、EPA、n－3 HUFA含量并沒有顯著差異，說明飼料中n－3 HUFA含量在一定范圍內(nèi)(0.74%～1.55%)時(shí)三疣梭子蟹幼蟹肝胰腺可能存在調(diào)控脂肪酸組成的機(jī)制，但當(dāng)飼料中n－3 HUFA含量超過這一范圍時(shí)，此調(diào)控能力可能不能滿足較高含量n－3 HUFA的代謝需求，此機(jī)制有待繼續(xù)研究。

圖3 飼料中n-3 HUFA含量與三疣梭子蟹幼蟹肝胰腺中n-3 HUFA含量的關(guān)系Fig.3 Relationship between dietary n－3 HUFA content and hepatopancreas n－3 HUFA content of juvenile swimming crab(Portunus trituberculatus)

4 結(jié)論

飼料中適宜的n－3 HUFA含量可以改善三疣梭子蟹幼蟹的生長(zhǎng)表現(xiàn)和飼料效率。以特定生長(zhǎng)率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過折線回歸分析估測(cè)出三疣梭子蟹幼蟹飼料中n－3 HUFA的最適含量為2.357%(干物質(zhì)基礎(chǔ))。

致謝:感謝王燕飛、鮑雪寧、黃繼、周東、張超等同學(xué)在整個(gè)試驗(yàn)過程中給予的幫助，也感謝寧波市象山縣東陳鄉(xiāng)鑫億梭子蟹水產(chǎn)公司給予我們學(xué)習(xí)和實(shí)踐的機(jī)會(huì)。

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