初洪波，仇志凱，吳 迪，位 鴻，于秀華，段 青，黃曉巍*

（1.長春中醫(yī)藥大學，長春 130117;2.白城市醫(yī)院，吉林白城 137000;3.中國中醫(yī)科學院，北京 100700）

HPLC測定參紅補血顆粒中紅景天苷的含量

初洪波1，仇志凱1，吳 迪2，位 鴻1，于秀華1，段 青3，黃曉巍1*

（1.長春中醫(yī)藥大學，長春 130117;2.白城市醫(yī)院，吉林白城 137000;3.中國中醫(yī)科學院，北京 100700）

目的 利用高效液相色譜法測定參紅補血顆粒中紅景天苷的含量。方法 色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇∶水（15∶85），檢測器為紫外檢測器，檢測波長為275 nm。結(jié)果 HPLC測定紅景天苷在0.478～9.560 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率為97.74%，RSD為1.42%。結(jié)論 高效液相色譜法測定含量方法具有專屬性強，重復性好，無明顯干擾等特點，可作為參紅補血顆粒的含量測定方法。

參紅補血顆粒;紅景天苷;高效液相色譜法;含量測定

中醫(yī)血虛證是由失血過多、脾胃虛弱、血液生化之源不足或因瘀血阻滯新血不生等原因所致的血液不足或血液營養(yǎng)功能低下，臟腑組織器官失養(yǎng)的病理狀態(tài)，臨床以面色蒼白或萎黃、唇甲色淡、頭暈眼花、手足發(fā)麻等為主要表現(xiàn)的一組證候。見于現(xiàn)代醫(yī)學中的再生障礙性貧血，腫瘤放化療后的貧血以及慢性消耗性疾病等造血功能障礙性疾病［1-3］。參紅補血顆粒由紅景天、紅參、黃精、白術(shù)、麥冬組成，有益氣滋陰、補血活血的功效，是在中醫(yī)理論指導下經(jīng)多年臨床實踐總結(jié)的經(jīng)方，對血虛證治療有明顯的療效［4］。本研究采用高效液相法建立參紅補血顆粒中紅景天苷含量測定方法［5-6］，確定其質(zhì)量標準，保證臨床藥效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津），CLASS-VP工作站;KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;CP225D型雙量程電子分析天平（德國Sartoris公司）;Lambda 25型紫外可見分光光度計（美國PE公司）。

1.2 試藥 紅景天苷對照品（批號110774-200206），購自中國食品藥品檢定研究院;參紅補血顆粒（批號:20130901，20130902，20130903，均由長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中醫(yī)藥制劑中心生產(chǎn)提供）;甲醇為色譜純;水為超純水;其他試劑皆為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，島津 Wondasil C18（150 mm ×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（15∶85）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為275 nm，柱溫為25℃，進樣量為10 μL，理論塔板數(shù)按紅景天苷峰計算應不低于2 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取參紅補血顆粒適量，研細，取粉末（過三號篩）約0.5 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇10 mL，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例稱取除紅景天外的其他藥材按照制備工藝依法制得缺紅景天的陰性對照樣品。按“2.2.2”項下方法操作，制備紅景天陰性對照溶液，按照“2.1”項下的色譜條件進行試驗，所得陰性對照色譜圖中，在與供試品色譜圖中紅景天苷峰相同保留時間處無任何色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥材對紅景天苷的含量測定無影響。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項下紅景天苷對照品溶液 1，2，5，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀，依法測定，以測得峰面積為縱坐標，以紅景天苷對照品進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，進行線性回歸。得回歸方程Y=317 490.98X+651 4.09（r=0.999 97），結(jié)果表明紅景天苷在 0.478～9.560 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度考察 精密吸取“2.2.1”項下紅景天苷對照品溶液10 μL，“2.2.2”項下供試品溶液10 μL，分別注入高效液相色譜儀，連續(xù)重復進樣6次，依法測定，記錄峰面值，結(jié)果表明:對照品溶液和供試品溶液測定的RSD分別為1.65%，2.24%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性考察 精密吸取“2.2.1”項下紅景天苷對照品溶液10 μL，“2.2.2”項下供試品溶液10 μL，分別于 0，2，4，8，12，24 h，依法測定，記錄峰面積值，結(jié)果表明:對照品溶液和供試品溶液在24 h內(nèi)測定結(jié)果RSD分別為2.50%，2.35%（n=6），表明紅景天苷的穩(wěn)定性良好，24 h內(nèi)測定結(jié)果可靠。

2.3.4 重現(xiàn)性考察 精密稱取同一批次的樣品（批號20130901）6分，分別按“2.2.2”項下方法制備，分別精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，依法獨立測定，計算樣品含量，結(jié)果:平均含量為2.36 mg/g，RSD為1.85%（n=6），表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 取已知含量的供試品（批號20130901，含2.36 mg/g）6分，每分0.40 g，精密稱定。分別精密加入紅景天苷對照品溶液（濃度為0.478 mg/mL）2 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率，結(jié)果表明，平均回收率為97.74%，RSD為1.42%（n=6），結(jié)果表明該方法的回收率較好，準確度高。

2.3.6 樣品含量測定 按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，平行測定3批參紅補血顆粒中紅景天苷的含量。結(jié)果顯示，3批樣品中紅景天苷含量分別為2.32，2.28，2.32 mg/g，平均含量為 2.30 mg/g。

3 結(jié)論

3.1 流動相的選擇 《中國藥典》［7］“紅景天”項下收載的流動相為甲醇-水（15∶85），按此法操作，紅景天苷出峰的保留時間為20 min，分離效果良好，故選為本法的流動相。

3.2 測定波長選擇 取紅景天苷對照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，經(jīng)紫外可見分光光度計在200～400 nm間進行掃描，測得最大吸收波長為274.94 nm，結(jié)果與《中國藥典》“紅景天”項下收載的檢測波長275 nm相符合，故選擇檢測波長為275 nm。

3.3 供試品溶液制備方法的選擇 對超聲提取［8］和回流提取工藝方法［9］進行了比較，分別選擇超聲提取30 min、回流提取1 h進行研究，以紅景天苷含量作為考察指標，結(jié)果表明，超聲提取30 min比回流提取1 h的含量高，故選擇超聲提取30 min作為供試品溶液制備方法。

3.4 制劑中紅景天苷含量限度的規(guī)定 依據(jù)3批樣品的平均含量，下浮20%，制定參紅補血顆粒的含量限度，規(guī)定本品含有紅景天苷不得低于1.84 mg/g。

4 結(jié)論

方中君藥為紅景天，故在對制劑提取工藝的研究基礎(chǔ)上，建立了以高效液相色譜法測定參紅補血顆粒中紅景天苷含量的方法，該方法專屬性好，在精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率等方面均符合要求，適合測定紅景天苷的含量，本標準可以作為參紅補血顆粒質(zhì)量控制方法。

:

［1］高志芳，魯明源.血虛體質(zhì)研究概述［J］.山東中醫(yī)雜志，2010，29（12）:868-870.

［2］曾常春，梁毅，孔猛.血虛證的本質(zhì)初探［J］.浙江中醫(yī)雜志，2009，44（10）:706-708.

［3］李冬，李宏宇，黃曉巍，等.鹿皮膠對環(huán)磷酰胺所致血虛動物模型影響的實驗研究［J］.長春中醫(yī)藥大學學報，2010，26（5）:652-653.

［4］黃曉巍，初洪波，位鴻，等.正交試驗法優(yōu)選參紅補血顆粒提取工藝［J］.吉林中醫(yī)藥，2012，32（11）:1152-1153.

［5］文君，繆紅，王鮮俊，等.HPLC法測保健品中紅景天甙［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007（2）:261-262.

［6］胡馨，張國明，童月建.紅景天片劑薄層鑒別及紅景天甙的含量測定［J］.中成藥，2000，22（11）:62-64.

［7］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2009:144.

［8］陳良，張海燕，呂新明，等.紅景天中紅景天甙的超聲提取研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2009，25（8）:952-953，943.

［9］曾慶華，王竹君，李燕.響應面法優(yōu)化熱回流提取紅景天苷工藝［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2013，41（1）:309-313.

Using HPLC to determine the content of salidroside in Shenhong Buxue Granule

CHU Hongbo1，QIU Zhikai1，WU Di2，WEI Hong1，YU Xiuhua1，DUAN Qing3，HUANG Xiaowei1*
（1.Changchun University of Chinese Traditional Medicine，Changchun 130117，China;2.Baicheng Hospital，Baicheng 137000，Jilin Province，China;3.China Academy of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100700，China）

ObjectiveUsing high performance liquid chromatography to determine the content of salidroside in Shenhong Buxue Granule.Method Octadecylsilane bonded silica is used as a filler of the chromatographic column with mobile phase as Methanol-water（15:85）and the UV detector with detect wavelength to be 275 nm is used.Result The sample quantity have good linear relationship in the range of 0.478 ～9.560 μg，and the average recovery was 97.74%，RSD=1.42%.ConclusionThe high performance liquid chromatography has strong specificity，good repeatability with no significant interference.So it can be used to determine the content of Shenhong Buxue Granule.

Shenhong Buxue Granule;salidroside;HPLC;content determination

R285.1

A

2095－6258（2014）05－0815－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.020

吉林省科技發(fā)展計劃項目（20110903）。

初洪波（1973－），男，碩士，助教。研究方向:中藥化學。

黃曉巍，女，主任藥師，碩士研究生導師，電話:0431-86142281，電子信箱:1594800074@163.com。

2014－06－01）