劉屹 靳元嶸 張淑芳 付紹喜

鼻息肉是耳鼻喉科常見(jiàn)病，復(fù)發(fā)率高，其病理特征表現(xiàn)為鼻腔和鼻竇黏膜水腫和炎性改變，當(dāng)前認(rèn)為是多種細(xì)胞因子在局部病灶內(nèi)長(zhǎng)期存在并使組織發(fā)生相應(yīng)的病理變化。本研究通過(guò)檢測(cè)初發(fā)鼻息肉和復(fù)發(fā)鼻息肉組織中粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulation factor，GM-CSF)表達(dá)的差異性，從而明確它在疾病發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有標(biāo)本均來(lái)自于2006年1月至2012年10月在我科住院行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的患者，其中初發(fā)鼻息肉患者40例(初發(fā)鼻息肉組)，選擇初發(fā)并且單發(fā)或多發(fā)，明顯帶蒂，男22例，女18例;年齡18～42歲，平均30.6歲;鼻內(nèi)鏡手術(shù)后送病理證實(shí)為息肉。復(fù)發(fā)鼻息肉患者40例(復(fù)發(fā)鼻息肉組)，與初發(fā)性鼻息肉組患者無(wú)重疊，復(fù)發(fā)性鼻息肉組患者前期手術(shù)徹底，且術(shù)后經(jīng)過(guò)規(guī)范的全身和局部藥物治療和定期復(fù)查等綜合治療措施，隨訪(fǎng)1年以上復(fù)發(fā)者。其中男24例，女16例;年齡35～68歲，平均48歲，復(fù)發(fā)鼻息肉組均為多發(fā)，鼻腔和鼻竇黏膜廣泛炎性反應(yīng)，正常黏膜和息肉界限不清楚，鼻竇CT結(jié)果可見(jiàn)多發(fā)或全組鼻竇炎。另以20例鼻中隔偏曲伴下鼻甲肥大，行下鼻甲部分切除術(shù)患者的下鼻甲黏膜組織做正常對(duì)照，其中男13例，女7例;年齡18～46歲，平均32歲。全部病例均無(wú)全身疾病、免疫系統(tǒng)疾病和其他鼻部疾病，所有患者術(shù)前1個(gè)月停用全身和局部抗生素和糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物治療，以減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。入院后采集病理標(biāo)本，采集標(biāo)本后開(kāi)始上述藥物治療，擇期手術(shù)。

1.2 試劑和方法 標(biāo)本于4%多聚甲醛中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋。兔抗人GM-CSF多克隆抗體和即用型SABC型免疫組織化學(xué)試劑盒，DAB顯色試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)公司。采用SABC免疫組化法觀察GM-CSF的表達(dá)。

1.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞漿或細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色者為陽(yáng)性細(xì)胞，選取其中2張染色較好(陽(yáng)性細(xì)胞清晰均勻，背景基本無(wú)染色)的組織切片作為統(tǒng)計(jì)分析對(duì)象，顯微鏡一側(cè)目鏡安裝細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)格(5 mm×5 mm，6×6條線(xiàn))，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量。低倍鏡下先觀察每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)區(qū)域，從中隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野。采用染色結(jié)果半定量分析方法:高倍鏡(×400)下計(jì)數(shù)5個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%計(jì)0分、11%～30%計(jì)1分、31%～50%計(jì)2分、51%～70%計(jì)3分、≥71%計(jì)4分;按染色強(qiáng)度，無(wú)著色的是0分、淺黃色的是1分、棕黃色的是2分、棕褐色的是3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分率與染色強(qiáng)度計(jì)分相乘為最終結(jié)果，結(jié)果分為4個(gè)等級(jí):0分為陰性(-)，≤2分為弱陽(yáng)性(+)，3～4分為中度陽(yáng)性(++)，＞4分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，2組間和2組內(nèi)表達(dá)的比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理切片GM-CSF在初發(fā)鼻息肉和復(fù)發(fā)鼻息肉中陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域的主要組織學(xué)變化為組織內(nèi)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞活化，積聚。陽(yáng)性產(chǎn)物定位主要是胞漿和胞膜，呈現(xiàn)程度不等的黃色，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于黏膜下固有層的和血管周?chē)?，主要是嗜酸性粒?xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎性細(xì)胞。

2.2 GM-CSF的表達(dá) 在初發(fā)性鼻息肉組織中，有14例表達(dá)為(+)～(+++)，26例表達(dá)為(-);在復(fù)發(fā)性鼻息肉組織中，有27例表達(dá)為(+)～(+++)，13例表達(dá)為(-)，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其中，在初發(fā)性鼻息肉中，男性為22例，有8例表達(dá)為(+)～(+++)，14例表達(dá)為(-);女性為18例，有6例表達(dá)為(+)～(+++)，12例表達(dá)為(-)，不同性別間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.85)。在復(fù)發(fā)性鼻息肉中，男性為24例，有16例表達(dá)為(+)～(+++)，8例表達(dá)為(-);女性為16例，有11例表達(dá)為(+)～(+++)，5例表達(dá)為(-)，不同性別間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.75)。在正常對(duì)照組無(wú)明顯表達(dá)。見(jiàn)表1～3，圖1～3。

表1 GM-CSF在初發(fā)性鼻息肉和復(fù)發(fā)性鼻息肉中的表達(dá)n=40，例

表2 GM-CSF在初發(fā)性鼻息肉不同性別中的表達(dá) 例

表3 GM-CSF在復(fù)發(fā)性鼻息肉不同性別中的表達(dá) 例

圖1 GM-CSF在初發(fā)性鼻息肉中的表達(dá)(免疫組化×400)

圖2 GM-CSF在復(fù)發(fā)性鼻息肉中的表達(dá)(免疫組化×400)

圖3 GM-CSF在正常鼻黏膜組織中的表達(dá)(免疫組化×400)

3 討論

鼻息肉是發(fā)生在鼻腔和鼻竇黏膜的慢性炎癥性疾病，在耳鼻咽喉頭頸外科臨床中發(fā)病率高，病因以局部炎癥和變態(tài)反應(yīng)為主，組織病理學(xué)以上皮增生、間質(zhì)水腫和多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征，浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞可釋放多種細(xì)胞因子，細(xì)胞因子對(duì)于病理變化的發(fā)生起到極其重要的作用，其中復(fù)發(fā)性鼻息肉表現(xiàn)得更加明顯，主要表現(xiàn)為多組或者全組鼻竇、鼻腔黏膜水腫、炎癥。本文所研究的復(fù)發(fā)性鼻息肉組患者前期手術(shù)徹底，術(shù)后經(jīng)過(guò)規(guī)范的藥物和局部治療和定期復(fù)查等綜合治療措施，隨訪(fǎng)1年以上，且患者無(wú)全身疾病、免疫系統(tǒng)疾病和其他鼻部疾病，所以考慮術(shù)后復(fù)發(fā)與鼻腔反復(fù)慢性感染有關(guān)系。

GM-CSF是一種分子量約為18 000～32 000的酸性糖蛋白，其主要作用是維持粒細(xì)胞系和單核巨噬細(xì)胞系細(xì)胞的存活、誘導(dǎo)其生長(zhǎng)，并使其功能增強(qiáng)。鼻息肉為慢性炎癥性疾病，在發(fā)病過(guò)程中伴有炎性細(xì)胞的增生、趨化和集中，GM-CSF是一種能夠調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞活性的細(xì)胞因子，所以也存在于鼻息肉組織中。GMCSF主要由激活的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。

本研究結(jié)果顯示，GM-CSF在初發(fā)性和復(fù)發(fā)性鼻息肉組織中的表達(dá)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在正常下鼻甲黏膜中無(wú)明顯表達(dá)，表明GMCSF的高表達(dá)與鼻息肉的容易復(fù)發(fā)有關(guān)，GM-CSF在鼻息肉發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中起重要作用。GM-CSF陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于黏膜下和血管周?chē)?，主要是嗜酸性粒?xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎性細(xì)胞。這充分說(shuō)明，嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度與GM-CSF在鼻息肉中的表達(dá)水平有密切關(guān)系［1］，GM-CSF可增強(qiáng)炎性細(xì)胞向病灶的遷移和附著［2］，張平等［3］的研究證實(shí)，GM-CSF促進(jìn)了嗜酸性粒細(xì)胞的遷移和聚集，因此，GM-CSF是與嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞關(guān)系密切，且對(duì)它們的生物學(xué)活性起主要調(diào)控作用的細(xì)胞因子［4］。一方面，炎性細(xì)胞活化后，增加了GM-CSF和其他細(xì)胞因子的分泌和表達(dá);另一方面，GM-CSF又活化了鼻息肉中的炎性細(xì)胞，通過(guò)正反饋不斷促進(jìn)炎性細(xì)胞增多和聚集，使它們的存活時(shí)間延長(zhǎng)，凋亡時(shí)間延遲，兩方面相互作用，相互促進(jìn)，使炎癥長(zhǎng)期存在，致使鼻息肉容易形成和復(fù)發(fā)。研究還發(fā)現(xiàn)，在初發(fā)性鼻息肉中不同性別間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在復(fù)發(fā)性鼻息肉中不同性別間比較差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，這表明GM-CSF的表達(dá)與性別無(wú)關(guān)。

總之，鼻息肉是以嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的慢性炎癥性疾病，炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)和GMCSF等細(xì)胞因子的釋放與鼻息肉的發(fā)病有重要關(guān)系。

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2 林欣然，李杰恩，張龍城，等.IL-5和GM-CSF在慢性鼻-鼻竇炎手術(shù)前后鼻竇黏膜中的表達(dá)及意義.中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志，2009，15:326-330.

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4 羅曉，徐開(kāi)倫.鼻息肉發(fā)病機(jī)制中Th2類(lèi)相關(guān)細(xì)胞因子與嗜酸性粒細(xì)胞的關(guān)系.中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志，2012，18:244-248.