王春玲等

[摘要] 目的 對(duì)注射用鹽酸吉西他濱的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行探討，建立其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。 方法 按《中國(guó)藥典》2010版附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行。 結(jié)果 在驗(yàn)證條件下，注射用鹽酸吉西他濱可以采用稀釋方法排除干擾。 結(jié)論 可以采用此法對(duì)本品的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行檢查。

[關(guān)鍵詞] 注射用鹽酸吉西他濱；細(xì)菌內(nèi)毒素方法；驗(yàn)證

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）01-123-03

鹽酸吉西他濱（gemcitabine hydrochloride）化學(xué)名2-脫氧-2，2-鹽酸二氟脫氧胞苷（β-異構(gòu)體），是一種阿糖胞苷類似物，由美國(guó)禮來(lái)公司研發(fā)的核苷類抗代謝抗癌藥[1]。屬于新型抗嘧啶核苷酸代謝化療藥物，屬細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細(xì)胞，即S期細(xì)胞。在一定條件下，可以阻止G1期向S期的進(jìn)展；具有抗瘤譜廣、作用機(jī)制獨(dú)特、毒性反應(yīng)低、與其他化療藥物無(wú)交叉耐藥且毒性反應(yīng)無(wú)疊加等特點(diǎn)。在過(guò)去的臨床工作中，我們觀察到鹽酸吉西他濱是療效較好而毒副反應(yīng)較少的化療藥物之一[2-3]。無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度檢查是藥品安全性檢查的重要項(xiàng)目[4]，本品為凍干粉針按照中國(guó)藥典2010版附錄ⅠB[5]的要求，要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Ms3digital旋渦混合器，CJ-2F凈化工作臺(tái)，DK-600S電熱恒溫水槽，DMH-1電熱干燥箱。

1.1.2 試劑 鱟試劑1[規(guī)格0.06EU/mL（0.1mL/支），批號(hào)10090612]福州新北生化工業(yè)有限公司；鱟試劑2[規(guī)格0.06EU/mL（0.1mL/支），批號(hào)1102111]湛江安度斯生物有限公司；鱟試驗(yàn)用水（50mL/支，批號(hào)10010515）福州新北生化工業(yè)有限公司；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格180EU/支，批號(hào)150601-200965）中國(guó)藥品生物制品檢定所；pH調(diào)節(jié)劑（規(guī)格2mL/支，批號(hào)100904）福州新北生化工業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備 所有容器、用具都必須經(jīng)過(guò)處理，去除外源性內(nèi)毒素，玻璃儀器于250℃干烤至少1h，塑料用具須確證不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果；操作過(guò)程中避免微生物污染；初次使用的鱟試劑必須經(jīng)過(guò)靈敏度復(fù)核[5]。參照鹽酸吉西他濱的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，注射用鹽酸吉西他濱（0.4g）的細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為：按吉西他濱計(jì)L≤0.03EU/mg。

1.2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核 按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定，進(jìn)行鱟試劑的標(biāo)示靈敏度復(fù)核。兩批鱟試劑經(jīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品檢查λc與λ一致（應(yīng)在0.5λ≤λc≤2λ范圍內(nèi)），結(jié)果均符合規(guī)定。

1.2.3 注射用鹽酸吉西他濱細(xì)菌內(nèi)毒素檢查干擾試驗(yàn)[5]

1.2.3.1 干擾預(yù)試驗(yàn)（鱟試劑：λ=0.06EU/mL） 取本品，加鱟試驗(yàn)用水（BET水）進(jìn)行供試品溶液（NPC）和供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC）的配制。（1）供試品溶液（NPC）配制：取三個(gè)批號(hào)的供試品，分別用用鱟試驗(yàn)用水10mL充分振搖使溶解。制備成10、5.0、2.5、1.2、0.625mg/mL五個(gè)濃度，并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至6～8。（2）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋方法：用1mL的鱟試驗(yàn)用水溶解1支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，用旋渦混合器連續(xù)混合15min，成180EU/mL，用BET水稀釋成4λ、2λ，進(jìn)行下一步稀釋前，至少混和30s。（3）供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC）的配制：配制的濃度同NPC，每個(gè)濃度中含2λ（0.125EU/mL）的細(xì)菌內(nèi)毒素。制備成10mg/mL+2λ、5.0mg/mL+2λ、2.5mg/mL+2λ、1.25mg/mL+2λ、0.625mg/mL+2λ五個(gè)濃度。（4）試驗(yàn)過(guò)程：取上述二個(gè)廠家的鱟試劑各64支，先分別加入0.1mL BET水溶解，再分別加入0.1mL供試品和供試品陽(yáng)性各濃度稀釋液，混勻后，于（37±1）℃無(wú)振動(dòng)保溫（60±2）min，同時(shí)設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)濃度平行做2管。

通過(guò)上表的結(jié)果表明，注射用鹽酸吉西他濱在吉西他濱濃度為5.0mg/mL以下時(shí)，對(duì)以上二個(gè)廠家的鱟試劑均未產(chǎn)生干擾作用。故含吉西他濱5.0mg/mL稀釋液為最大有效活性濃度。實(shí)驗(yàn)濃度選擇含吉西他濱為2.5mg/mL的稀釋液。

1.2.3.2 供試品的干擾試驗(yàn) 為進(jìn)一步確證供試品溶液對(duì)0.06EU/mL的鱟試劑是否存在干擾作用，分別用BET水和供試品2.5mg/mL稀釋液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內(nèi)毒素溶液。（1）供試品2.5mg/mL稀釋液的制備：取上述三個(gè)批號(hào)的供試品，分別用BET水稀釋成含吉西他濱2.5mg/mL的供試液。（2）試驗(yàn)過(guò)程（鱟試劑：λ=0.06EU/mL）：用BET水與2.5mg/mL供試液分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0.125EU/mL、0.06EU/mL、0.03EU/mL、0.015EU/mL四個(gè)濃度，作為細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液。取上述二個(gè)廠家的鱟試劑各72支，每支分別用0.1mL BET水溶解，再加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液各0.1mL，每一濃度平行做4管，輕輕混勻。同時(shí)分別用0.1mL鱟試驗(yàn)用水和供試品溶液做陰性對(duì)照，平行做兩管。垂直放入電熱恒溫水槽中，從放入開(kāi)始準(zhǔn)確記錄時(shí)間，在（37±1）℃無(wú)振動(dòng)保溫（60±2）分鐘。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)上表的結(jié)果表明，2.5mg/mL供試品稀釋液3個(gè)批號(hào)的供試品的Et值均在0.5～2Es范圍之間，確認(rèn)無(wú)干擾影響。當(dāng)鱟試劑、供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)[5]。

2 結(jié)果

檢測(cè)三批注射用鹽酸吉西他濱細(xì)菌內(nèi)毒素，檢測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

在本試驗(yàn)條件下，取三個(gè)批號(hào)的供試品，用BET水分別按上述方法配制成2.5mg/mL供試品稀釋液，然后用λ=0.06EU/mL的上述二個(gè)廠家的鱟試劑各16支實(shí)驗(yàn)，供試品的Et值均在0.5Es～2Es范圍之間，確認(rèn)無(wú)干擾影響。注射用鹽酸吉西他濱經(jīng)過(guò)按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法實(shí)驗(yàn)后，確證了本品可以用稀釋方法排除干擾，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（凝膠法）對(duì)供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 應(yīng)榮，黃建，郭紅云.鹽酸吉西他濱原料合成工藝研究[J].精細(xì)化工中間體，2008，38（5）：34-36.

[2] 李留樹(shù)，王如良.非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[J].解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志，2011，3：199-200.

[3] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：675-676.

[4] 許玉華，杜鵑，湯楊.藥品微生物污染檢測(cè)方法驗(yàn)證的必要性[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6（4）：46.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典二部附錄[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：6，100-101.

（收稿日期：2013-10-09）

[摘要] 目的 對(duì)注射用鹽酸吉西他濱的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行探討，建立其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。 方法 按《中國(guó)藥典》2010版附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行。 結(jié)果 在驗(yàn)證條件下，注射用鹽酸吉西他濱可以采用稀釋方法排除干擾。 結(jié)論 可以采用此法對(duì)本品的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行檢查。

[關(guān)鍵詞] 注射用鹽酸吉西他濱；細(xì)菌內(nèi)毒素方法；驗(yàn)證

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）01-123-03

鹽酸吉西他濱（gemcitabine hydrochloride）化學(xué)名2-脫氧-2，2-鹽酸二氟脫氧胞苷（β-異構(gòu)體），是一種阿糖胞苷類似物，由美國(guó)禮來(lái)公司研發(fā)的核苷類抗代謝抗癌藥[1]。屬于新型抗嘧啶核苷酸代謝化療藥物，屬細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細(xì)胞，即S期細(xì)胞。在一定條件下，可以阻止G1期向S期的進(jìn)展；具有抗瘤譜廣、作用機(jī)制獨(dú)特、毒性反應(yīng)低、與其他化療藥物無(wú)交叉耐藥且毒性反應(yīng)無(wú)疊加等特點(diǎn)。在過(guò)去的臨床工作中，我們觀察到鹽酸吉西他濱是療效較好而毒副反應(yīng)較少的化療藥物之一[2-3]。無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度檢查是藥品安全性檢查的重要項(xiàng)目[4]，本品為凍干粉針按照中國(guó)藥典2010版附錄ⅠB[5]的要求，要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Ms3digital旋渦混合器，CJ-2F凈化工作臺(tái)，DK-600S電熱恒溫水槽，DMH-1電熱干燥箱。

1.1.2 試劑 鱟試劑1[規(guī)格0.06EU/mL（0.1mL/支），批號(hào)10090612]福州新北生化工業(yè)有限公司；鱟試劑2[規(guī)格0.06EU/mL（0.1mL/支），批號(hào)1102111]湛江安度斯生物有限公司；鱟試驗(yàn)用水（50mL/支，批號(hào)10010515）福州新北生化工業(yè)有限公司；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格180EU/支，批號(hào)150601-200965）中國(guó)藥品生物制品檢定所；pH調(diào)節(jié)劑（規(guī)格2mL/支，批號(hào)100904）福州新北生化工業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備 所有容器、用具都必須經(jīng)過(guò)處理，去除外源性內(nèi)毒素，玻璃儀器于250℃干烤至少1h，塑料用具須確證不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果；操作過(guò)程中避免微生物污染；初次使用的鱟試劑必須經(jīng)過(guò)靈敏度復(fù)核[5]。參照鹽酸吉西他濱的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，注射用鹽酸吉西他濱（0.4g）的細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為：按吉西他濱計(jì)L≤0.03EU/mg。

1.2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核 按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定，進(jìn)行鱟試劑的標(biāo)示靈敏度復(fù)核。兩批鱟試劑經(jīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品檢查λc與λ一致（應(yīng)在0.5λ≤λc≤2λ范圍內(nèi)），結(jié)果均符合規(guī)定。

1.2.3 注射用鹽酸吉西他濱細(xì)菌內(nèi)毒素檢查干擾試驗(yàn)[5]

1.2.3.1 干擾預(yù)試驗(yàn)（鱟試劑：λ=0.06EU/mL） 取本品，加鱟試驗(yàn)用水（BET水）進(jìn)行供試品溶液（NPC）和供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC）的配制。（1）供試品溶液（NPC）配制：取三個(gè)批號(hào)的供試品，分別用用鱟試驗(yàn)用水10mL充分振搖使溶解。制備成10、5.0、2.5、1.2、0.625mg/mL五個(gè)濃度，并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至6～8。（2）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋方法：用1mL的鱟試驗(yàn)用水溶解1支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，用旋渦混合器連續(xù)混合15min，成180EU/mL，用BET水稀釋成4λ、2λ，進(jìn)行下一步稀釋前，至少混和30s。（3）供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC）的配制：配制的濃度同NPC，每個(gè)濃度中含2λ（0.125EU/mL）的細(xì)菌內(nèi)毒素。制備成10mg/mL+2λ、5.0mg/mL+2λ、2.5mg/mL+2λ、1.25mg/mL+2λ、0.625mg/mL+2λ五個(gè)濃度。（4）試驗(yàn)過(guò)程：取上述二個(gè)廠家的鱟試劑各64支，先分別加入0.1mL BET水溶解，再分別加入0.1mL供試品和供試品陽(yáng)性各濃度稀釋液，混勻后，于（37±1）℃無(wú)振動(dòng)保溫（60±2）min，同時(shí)設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)濃度平行做2管。

通過(guò)上表的結(jié)果表明，注射用鹽酸吉西他濱在吉西他濱濃度為5.0mg/mL以下時(shí)，對(duì)以上二個(gè)廠家的鱟試劑均未產(chǎn)生干擾作用。故含吉西他濱5.0mg/mL稀釋液為最大有效活性濃度。實(shí)驗(yàn)濃度選擇含吉西他濱為2.5mg/mL的稀釋液。

1.2.3.2 供試品的干擾試驗(yàn) 為進(jìn)一步確證供試品溶液對(duì)0.06EU/mL的鱟試劑是否存在干擾作用，分別用BET水和供試品2.5mg/mL稀釋液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內(nèi)毒素溶液。（1）供試品2.5mg/mL稀釋液的制備：取上述三個(gè)批號(hào)的供試品，分別用BET水稀釋成含吉西他濱2.5mg/mL的供試液。（2）試驗(yàn)過(guò)程（鱟試劑：λ=0.06EU/mL）：用BET水與2.5mg/mL供試液分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0.125EU/mL、0.06EU/mL、0.03EU/mL、0.015EU/mL四個(gè)濃度，作為細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液。取上述二個(gè)廠家的鱟試劑各72支，每支分別用0.1mL BET水溶解，再加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液各0.1mL，每一濃度平行做4管，輕輕混勻。同時(shí)分別用0.1mL鱟試驗(yàn)用水和供試品溶液做陰性對(duì)照，平行做兩管。垂直放入電熱恒溫水槽中，從放入開(kāi)始準(zhǔn)確記錄時(shí)間，在（37±1）℃無(wú)振動(dòng)保溫（60±2）分鐘。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)上表的結(jié)果表明，2.5mg/mL供試品稀釋液3個(gè)批號(hào)的供試品的Et值均在0.5～2Es范圍之間，確認(rèn)無(wú)干擾影響。當(dāng)鱟試劑、供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)[5]。

2 結(jié)果

檢測(cè)三批注射用鹽酸吉西他濱細(xì)菌內(nèi)毒素，檢測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

在本試驗(yàn)條件下，取三個(gè)批號(hào)的供試品，用BET水分別按上述方法配制成2.5mg/mL供試品稀釋液，然后用λ=0.06EU/mL的上述二個(gè)廠家的鱟試劑各16支實(shí)驗(yàn)，供試品的Et值均在0.5Es～2Es范圍之間，確認(rèn)無(wú)干擾影響。注射用鹽酸吉西他濱經(jīng)過(guò)按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法實(shí)驗(yàn)后，確證了本品可以用稀釋方法排除干擾，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（凝膠法）對(duì)供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 應(yīng)榮，黃建，郭紅云.鹽酸吉西他濱原料合成工藝研究[J].精細(xì)化工中間體，2008，38（5）：34-36.

[2] 李留樹(shù)，王如良.非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[J].解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志，2011，3：199-200.

[3] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：675-676.

[4] 許玉華，杜鵑，湯楊.藥品微生物污染檢測(cè)方法驗(yàn)證的必要性[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6（4）：46.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典二部附錄[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：6，100-101.

（收稿日期：2013-10-09）

[摘要] 目的 對(duì)注射用鹽酸吉西他濱的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行探討，建立其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。 方法 按《中國(guó)藥典》2010版附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行。 結(jié)果 在驗(yàn)證條件下，注射用鹽酸吉西他濱可以采用稀釋方法排除干擾。 結(jié)論 可以采用此法對(duì)本品的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行檢查。

[關(guān)鍵詞] 注射用鹽酸吉西他濱；細(xì)菌內(nèi)毒素方法；驗(yàn)證

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）01-123-03

鹽酸吉西他濱（gemcitabine hydrochloride）化學(xué)名2-脫氧-2，2-鹽酸二氟脫氧胞苷（β-異構(gòu)體），是一種阿糖胞苷類似物，由美國(guó)禮來(lái)公司研發(fā)的核苷類抗代謝抗癌藥[1]。屬于新型抗嘧啶核苷酸代謝化療藥物，屬細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細(xì)胞，即S期細(xì)胞。在一定條件下，可以阻止G1期向S期的進(jìn)展；具有抗瘤譜廣、作用機(jī)制獨(dú)特、毒性反應(yīng)低、與其他化療藥物無(wú)交叉耐藥且毒性反應(yīng)無(wú)疊加等特點(diǎn)。在過(guò)去的臨床工作中，我們觀察到鹽酸吉西他濱是療效較好而毒副反應(yīng)較少的化療藥物之一[2-3]。無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度檢查是藥品安全性檢查的重要項(xiàng)目[4]，本品為凍干粉針按照中國(guó)藥典2010版附錄ⅠB[5]的要求，要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Ms3digital旋渦混合器，CJ-2F凈化工作臺(tái)，DK-600S電熱恒溫水槽，DMH-1電熱干燥箱。

1.1.2 試劑 鱟試劑1[規(guī)格0.06EU/mL（0.1mL/支），批號(hào)10090612]福州新北生化工業(yè)有限公司；鱟試劑2[規(guī)格0.06EU/mL（0.1mL/支），批號(hào)1102111]湛江安度斯生物有限公司；鱟試驗(yàn)用水（50mL/支，批號(hào)10010515）福州新北生化工業(yè)有限公司；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格180EU/支，批號(hào)150601-200965）中國(guó)藥品生物制品檢定所；pH調(diào)節(jié)劑（規(guī)格2mL/支，批號(hào)100904）福州新北生化工業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備 所有容器、用具都必須經(jīng)過(guò)處理，去除外源性內(nèi)毒素，玻璃儀器于250℃干烤至少1h，塑料用具須確證不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果；操作過(guò)程中避免微生物污染；初次使用的鱟試劑必須經(jīng)過(guò)靈敏度復(fù)核[5]。參照鹽酸吉西他濱的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，注射用鹽酸吉西他濱（0.4g）的細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為：按吉西他濱計(jì)L≤0.03EU/mg。

1.2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核 按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定，進(jìn)行鱟試劑的標(biāo)示靈敏度復(fù)核。兩批鱟試劑經(jīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品檢查λc與λ一致（應(yīng)在0.5λ≤λc≤2λ范圍內(nèi)），結(jié)果均符合規(guī)定。

1.2.3 注射用鹽酸吉西他濱細(xì)菌內(nèi)毒素檢查干擾試驗(yàn)[5]

1.2.3.1 干擾預(yù)試驗(yàn)（鱟試劑：λ=0.06EU/mL） 取本品，加鱟試驗(yàn)用水（BET水）進(jìn)行供試品溶液（NPC）和供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC）的配制。（1）供試品溶液（NPC）配制：取三個(gè)批號(hào)的供試品，分別用用鱟試驗(yàn)用水10mL充分振搖使溶解。制備成10、5.0、2.5、1.2、0.625mg/mL五個(gè)濃度，并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至6～8。（2）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋方法：用1mL的鱟試驗(yàn)用水溶解1支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，用旋渦混合器連續(xù)混合15min，成180EU/mL，用BET水稀釋成4λ、2λ，進(jìn)行下一步稀釋前，至少混和30s。（3）供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液（PPC）的配制：配制的濃度同NPC，每個(gè)濃度中含2λ（0.125EU/mL）的細(xì)菌內(nèi)毒素。制備成10mg/mL+2λ、5.0mg/mL+2λ、2.5mg/mL+2λ、1.25mg/mL+2λ、0.625mg/mL+2λ五個(gè)濃度。（4）試驗(yàn)過(guò)程：取上述二個(gè)廠家的鱟試劑各64支，先分別加入0.1mL BET水溶解，再分別加入0.1mL供試品和供試品陽(yáng)性各濃度稀釋液，混勻后，于（37±1）℃無(wú)振動(dòng)保溫（60±2）min，同時(shí)設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)濃度平行做2管。

通過(guò)上表的結(jié)果表明，注射用鹽酸吉西他濱在吉西他濱濃度為5.0mg/mL以下時(shí)，對(duì)以上二個(gè)廠家的鱟試劑均未產(chǎn)生干擾作用。故含吉西他濱5.0mg/mL稀釋液為最大有效活性濃度。實(shí)驗(yàn)濃度選擇含吉西他濱為2.5mg/mL的稀釋液。

1.2.3.2 供試品的干擾試驗(yàn) 為進(jìn)一步確證供試品溶液對(duì)0.06EU/mL的鱟試劑是否存在干擾作用，分別用BET水和供試品2.5mg/mL稀釋液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內(nèi)毒素溶液。（1）供試品2.5mg/mL稀釋液的制備：取上述三個(gè)批號(hào)的供試品，分別用BET水稀釋成含吉西他濱2.5mg/mL的供試液。（2）試驗(yàn)過(guò)程（鱟試劑：λ=0.06EU/mL）：用BET水與2.5mg/mL供試液分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0.125EU/mL、0.06EU/mL、0.03EU/mL、0.015EU/mL四個(gè)濃度，作為細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液。取上述二個(gè)廠家的鱟試劑各72支，每支分別用0.1mL BET水溶解，再加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和細(xì)菌內(nèi)毒素供試品溶液各0.1mL，每一濃度平行做4管，輕輕混勻。同時(shí)分別用0.1mL鱟試驗(yàn)用水和供試品溶液做陰性對(duì)照，平行做兩管。垂直放入電熱恒溫水槽中，從放入開(kāi)始準(zhǔn)確記錄時(shí)間，在（37±1）℃無(wú)振動(dòng)保溫（60±2）分鐘。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)上表的結(jié)果表明，2.5mg/mL供試品稀釋液3個(gè)批號(hào)的供試品的Et值均在0.5～2Es范圍之間，確認(rèn)無(wú)干擾影響。當(dāng)鱟試劑、供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)[5]。

2 結(jié)果

檢測(cè)三批注射用鹽酸吉西他濱細(xì)菌內(nèi)毒素，檢測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

在本試驗(yàn)條件下，取三個(gè)批號(hào)的供試品，用BET水分別按上述方法配制成2.5mg/mL供試品稀釋液，然后用λ=0.06EU/mL的上述二個(gè)廠家的鱟試劑各16支實(shí)驗(yàn)，供試品的Et值均在0.5Es～2Es范圍之間，確認(rèn)無(wú)干擾影響。注射用鹽酸吉西他濱經(jīng)過(guò)按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法實(shí)驗(yàn)后，確證了本品可以用稀釋方法排除干擾，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（凝膠法）對(duì)供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

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[5] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典二部附錄[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：6，100-101.

（收稿日期：2013-10-09）