陳小讓，陳玉堂，王純耀

(鄭州大學(xué)藥物安全評價研究中心，鄭州 450052）

1 動物管理人員培訓(xùn)與管理

動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施和動物實(shí)驗(yàn)室在藥物安全性評價研究中占有極為重要的位置。幾乎所有的安評項(xiàng)目都在動物實(shí)驗(yàn)室做，而且實(shí)驗(yàn)周期長，費(fèi)用高，如果沒有相應(yīng)的專業(yè)知識和硬件設(shè)施，安評實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目幾乎無法完成［1］。

1.1 動物管理人員 尤其是實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)該有相應(yīng)的資歷、學(xué)歷、經(jīng)歷和能力方能勝任。動物實(shí)驗(yàn)人員一般是農(nóng)林大專院校的畢業(yè)生，主要承擔(dān)實(shí)驗(yàn)動物的管理、驗(yàn)收、檢疫、實(shí)驗(yàn)等工作，具有一定的專業(yè)知識，經(jīng)培訓(xùn)后能配合專題負(fù)責(zé)人做動物實(shí)驗(yàn)。

1.2 飼養(yǎng)人員 動物飼養(yǎng)工人主要承擔(dān)飼養(yǎng)管理。由于他們不具備實(shí)驗(yàn)動物或醫(yī)學(xué)藥學(xué)相關(guān)的專業(yè)知識，進(jìn)入安評中心后必須經(jīng)過系統(tǒng)培訓(xùn)并達(dá)到飼養(yǎng)工作崗位要求方能上崗。每一個動物飼養(yǎng)人員都要參加河南省實(shí)驗(yàn)動物上崗培訓(xùn)，并取得培訓(xùn)合格證書。

1.3 特殊崗位培訓(xùn) 某些崗位工作人員必須要有崗前培訓(xùn)，持證上崗。例如高壓滅菌器等壓力容器的使用。

2 動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施

動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施設(shè)計(jì)要合理，布局配置適當(dāng)，不同種屬、級別的動物要有不同的飼養(yǎng)設(shè)施，該設(shè)施要符合實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施環(huán)境的國家標(biāo)準(zhǔn)，并通過省級實(shí)驗(yàn)動物管理委員的驗(yàn)收。動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施包括空調(diào)通風(fēng)凈化系統(tǒng)及電腦自動控制系統(tǒng)。動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施工作人員應(yīng)熟悉整個空調(diào)通風(fēng)凈化系統(tǒng)管道的走向，初、中、高效過濾器的位置及更換頻率儀器監(jiān)測溫度、濕度、壓差等指標(biāo)。電腦自動控制系統(tǒng)由專業(yè)人員24 h監(jiān)控并記錄在案，一旦發(fā)生偏離，及時給SD和QAU聯(lián)系，做出是否影響實(shí)驗(yàn)的判斷。屏障系統(tǒng)使用的高壓滅菌器應(yīng)定期檢修和保養(yǎng)，并記錄在案。壓力表和閥門應(yīng)每年校驗(yàn)，保存好校驗(yàn)資料。

2.1 實(shí)驗(yàn)動物房的管理 良好實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范(good laboratory practice，GLP）實(shí)驗(yàn)室動物房包括SPF(specific pathogen free）動物房和普通級動物房。

2.1.1 SPF級動物實(shí)驗(yàn)室 該實(shí)驗(yàn)的潔凈度達(dá)到7級，其環(huán)境中不帶有主要潛在感染或條件致病和對科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原。在SPF屏障系統(tǒng)動物飼養(yǎng)室，GLP特別重視人流、物流、動物流、氣流的走向和溫度、濕度、壓差的控制。GLP沒有明確規(guī)定SPF屏障系統(tǒng)一定要采取單走廊、雙走廊、三走廊形式，但無論哪種走廊形式都要形成單向氣流壓差。最好在SPF屏障系統(tǒng)飼養(yǎng)室入口處制作標(biāo)有人流、物流、動物流、氣流走向的平面圖和人員進(jìn)出動物飼養(yǎng)室的流程圖［2］。

SPF及動物飼養(yǎng)室物品的管理包括:①墊料:應(yīng)選用吸濕性好，塵埃少，無毒性，無油脂的材料經(jīng)消毒滅菌后才能使用。使用時墊料先從墊料庫房包裝后運(yùn)入洗消前室，在洗消前室把墊料分裝在各個籠盒內(nèi)進(jìn)行滅菌，滅菌后的墊料暫放在清潔物品儲藏室，動物實(shí)驗(yàn)人員使用時，從清潔物品儲藏室取出使用，使用后的墊料及污物沿污物走廊返回洗消前室。墊料和飼料應(yīng)該遵守先進(jìn)后出的原則。②飼料和水:動物的飼料和飲水應(yīng)定期檢驗(yàn)，確保其營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)以及影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的污染因素低于規(guī)定的限度，檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)作為原始資料保存。SPF級動物飼料為輻照后的密封包裝飼料，動物實(shí)驗(yàn)人員核查飼料的種類及數(shù)量，在傳遞窗污染區(qū)域一側(cè)，對飼料外包裝用75%酒精噴霧消毒。然后放入傳遞窗。打開紫外線燈，照射30 min。打開清潔區(qū)域一側(cè)的傳遞窗，取出飼料，移入儲藏室備用。動物飲用水分裝在動物飲用水瓶內(nèi)，高壓消毒后移入儲藏室。③籠具:實(shí)驗(yàn)動物籠具運(yùn)至洗消前室，耐高溫的籠具高壓消毒，不耐高溫的籠具酒精噴霧后進(jìn)入傳遞窗照射30 min，消毒后的籠具運(yùn)至儲藏間備用。④其他物品:其他物品包括實(shí)驗(yàn)材料、籠卡、供試品等。耐高溫的經(jīng)過高壓滅菌后進(jìn)入動物飼養(yǎng)室，不耐高溫的在傳遞窗污染區(qū)域一側(cè)75%噴霧后進(jìn)入傳遞窗紫外線照射30 min后移入動物飼養(yǎng)室。

2.1.2 普通級動物房的管理 普通級動物房的管理沒有SPF及動物管理嚴(yán)格，但是實(shí)驗(yàn)設(shè)施要求要滿足動物飼養(yǎng)需要，如籠子大小、換氣次數(shù)、溫度、濕度等。由于大動物體型大、排泄物多，如果換氣次數(shù)不夠，會影響飼養(yǎng)室內(nèi)空氣清潔度，導(dǎo)致有害物滋生，影響動物的健康和安評的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。飼養(yǎng)室內(nèi)應(yīng)每周用不同種類的消毒劑進(jìn)行消毒，實(shí)驗(yàn)之前籠具用消毒劑噴霧。飼養(yǎng)室內(nèi)使用的消毒劑不能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并詳細(xì)記錄消毒劑的名稱、濃度、劑量、使用方法和使用時間等。

3 動物實(shí)驗(yàn)的管理

3.1 實(shí)驗(yàn)動物采購 專題負(fù)責(zé)人制訂實(shí)驗(yàn)方案后，通知動物管理負(fù)責(zé)人并提交動物實(shí)驗(yàn)登記表，詳細(xì)填寫專題的名稱，專題的代號，所需動物的種類、品種、品系、級別、年齡(體重）、性別、數(shù)量、實(shí)驗(yàn)起止日期等，并說明供試品是否有毒、有害、有感染性或放射性等實(shí)驗(yàn)的特殊條件和要求等，供動物實(shí)驗(yàn)室安排飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)場所。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行動物采購。動物實(shí)驗(yàn)室與多家持有動物生產(chǎn)許可證有信譽(yù)的實(shí)驗(yàn)動物供應(yīng)商有業(yè)務(wù)來往關(guān)系，這些供應(yīng)商提供的生產(chǎn)許可證和檢測報(bào)告需歸檔保存。安評實(shí)驗(yàn)大小鼠應(yīng)是SPF級，豚鼠是清潔級，兔子和犬是普通級。

3.2 實(shí)驗(yàn)動物的驗(yàn)收及檢疫 實(shí)驗(yàn)動物抵達(dá)動物實(shí)驗(yàn)室后，動物管理人員仔細(xì)核對送貨單的一般信息，SPF級動物消毒外包裝，通過動物專用傳遞窗送到動物飼養(yǎng)室觀察，普通級動物經(jīng)過外觀觀察無異常送到動物檢疫室檢疫，檢疫期間觀察動物的健康狀況，如外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便、攝食量、體重等。檢疫期間觀察到一般狀態(tài)異常，懷疑為感染性疾病時，立即將動物隔離，并向?qū)ｎ}負(fù)責(zé)人報(bào)告，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，并處死所有感染動物并焚燒感染動物。同時動物檢疫室及使用過的器材要進(jìn)行滅菌，消毒或焚燒。在檢疫期間未出現(xiàn)異常的動物才可供實(shí)驗(yàn)用。大動物犬如果發(fā)現(xiàn)有異常，應(yīng)放置在隔離室，經(jīng)治療未異常后供實(shí)驗(yàn)用。

4 動物的飼養(yǎng)管理

動物實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)整個動物的實(shí)驗(yàn)管理，包括人員進(jìn)出的登記，籠具消毒，無菌衣的清洗消毒等，在更換籠盒，加水加料時，注意觀察動物的一般狀態(tài)，如精神、活動、毛發(fā)、排泄物、攝食量、飲水量等，出現(xiàn)異常及時報(bào)告專題負(fù)責(zé)人。飼養(yǎng)管理人員根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求飼養(yǎng)動物。如實(shí)驗(yàn)過程中要求禁食，測定攝食量，半定量加食或其他方面對飼養(yǎng)工作有特殊要求的，飼養(yǎng)管理人員應(yīng)積極配合。

5 動物尸體及廢棄物的處理

動物尸體用塑料袋包裝后存放在-12℃以下的冰柜內(nèi)。動物尸體集中后委托單位進(jìn)行處理。動物飼養(yǎng)過程中清理出來的廢棄墊料應(yīng)用垃圾袋包裝后集中存放于垃圾房內(nèi)并委托單位處理，有害的尸體及廢棄物要經(jīng)過無害化處理。

6 原始材料歸檔存放

動物實(shí)驗(yàn)期間記錄有大量的飼養(yǎng)管理，如動物的攝食量、體重、飲水量及環(huán)境指標(biāo)檢測等原始資料，所有記錄必須如實(shí)，準(zhǔn)確，及時完成，定期進(jìn)行整理并歸檔。

動物的原始材料包括各種證明材料和記錄材料。證明材料包括動物、飼料、墊料的發(fā)票，動物合格證，動物微生物檢測報(bào)告，飼料質(zhì)量報(bào)告，水質(zhì)分析報(bào)告等。記錄材料包括飼養(yǎng)室的溫濕度，壓差等。

7 實(shí)驗(yàn)動物的倫理

GLP成立實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會，實(shí)驗(yàn)期間遵守實(shí)驗(yàn)動物減少，優(yōu)化，替代的3“R”原則，科學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，減少動物浪費(fèi)，珍惜動物。飼養(yǎng)期間善待動物，按照動物的生物特性和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行飼養(yǎng)和監(jiān)護(hù)。熟練實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作，盡量減少動物痛苦，對動物實(shí)行人道主義和安樂死并妥善處理動物尸體，為動物豎立紀(jì)念碑，并定期舉行紀(jì)念活動［3］。

8 討論

藥物非臨床安全性評價研究提高我國的新藥研究質(zhì)量，提升了新藥研究的水平，降低了新藥臨床潛在毒副作用的風(fēng)險。實(shí)驗(yàn)設(shè)施和動物實(shí)驗(yàn)室管理應(yīng)嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，可靠性，全程可追溯，使得藥物臨床安全性評價研究更加規(guī)范。

［1］國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境及設(shè)施［M］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1994.

［2］孔利佳，湯宏斌.實(shí)驗(yàn)動物學(xué)［M］.武漢:湖北科技出版社，2002，57-68.

［3］山內(nèi)忠平 著，沈德余 譯.實(shí)驗(yàn)動物的環(huán)境與管理［M］.上海:上?？茖W(xué)普及出版社，1989，33-39.