石紹川，張巧琳，田耘博

(重慶市血液中心檢驗科，重慶400015)

·儀器使用與排障·

OLYMPUS PK7300全自動血型分析儀使用體會及探討

石紹川，張巧琳，田耘博

(重慶市血液中心檢驗科，重慶400015)

∶血型分析儀；經(jīng)驗；探討

OLYMPUS-PK7300全自動血型分析儀集自動加樣、孵育、判讀、數(shù)據(jù)保存及全過程監(jiān)控為一體，近年來我國的一些血液中心和中心血站陸續(xù)引進了該設(shè)備。我中心檢驗科自2011年初開始將OLYMPUS-PK7300全自動血型分析儀用于ABO和Rh(D)血型的常規(guī)篩查檢測，使用至今已三年多時間，現(xiàn)將我們使用過程中累積的一些經(jīng)驗以及遇到的一些問題予以簡要介紹，以期與同行交流共享。

1 標(biāo)本準(zhǔn)備

1.1 標(biāo)本類別PK7300要求使用抗凝全血。我們使用的是EDTA抗凝標(biāo)本，與酶免和ALT檢測共用一管標(biāo)本，使用順序為：酶免→血型→ALT。

1.2 標(biāo)本采集標(biāo)本采集階段主要應(yīng)注意有效抗凝和避免脂血。除采血管生產(chǎn)廠家、是否充分顛倒混勻等因素可能影響抗凝效果外，一個比較容易忽略的方面就是采血管的儲存條件，尤其是在夏天應(yīng)將采血管置于陰涼庫儲存并確保陰涼庫的溫濕度條件，避免將采血管放在采血車上過夜。避免脂血最行之有效的方法就是加強對獻血者的宣傳，向公眾普及與脂血相關(guān)的知識，可以簡要地按照如下幾個方面進行宣傳：避免空腹獻血，最好是餐后2h再獻血為好，可建議獻血者在抽血前喝杯糖水；通常在飯后，特別是豐盛的餐后30min，血中乳糜微粒濃度增加，一般會在1～2h后恢復(fù)正常，但若脂類代謝異?；蚋视腿ヌ貏e高者，乳糜血之現(xiàn)象就持續(xù)較久，可能持續(xù)3～4h以上；捐血前數(shù)餐食物宜清淡，若進食高脂肪食物后，最好在飯后約4h后再捐血；患有高血脂癥者不宜獻血并應(yīng)赴醫(yī)院檢查或治療。

1.3 標(biāo)本離心在實驗室環(huán)境溫濕度符合要求的條件下，常溫離心即可。如果離心不足，容易導(dǎo)致取樣針外表面攜帶血球，造成稀釋細(xì)胞樣本的濃度過高，正定型無效；而適當(dāng)延長離心時間可以較為有效地避免離心不足的問題，同時也極少發(fā)現(xiàn)因適當(dāng)延長離心時間而導(dǎo)致的對血型或酶免檢測的不利影響；但由于真空采血管能承受的離心力有一定范圍限制，因此不宜將轉(zhuǎn)速調(diào)得過高，否則可能導(dǎo)致試管變形或破裂。PK7300說明書建議的離心條件為轉(zhuǎn)子半徑15cm,轉(zhuǎn)速3000r/min,離心時間5 min；在實際應(yīng)用中，很多實驗室對離心條件進行了調(diào)整，適當(dāng)延長離心時間是較常見的調(diào)整方式之一，我們設(shè)置的離心條件為轉(zhuǎn)子半徑17.5cm,轉(zhuǎn)速2500r/min，離心時間10min。

2 檢測過程及儀器操作

2.1 儀器開機及初始化OLYMPUS-PK7300可設(shè)置為手動或自動開機，開機后即自動進行自檢及初始化，初始化過程約需25min，初始化完成后儀器轉(zhuǎn)換到STANDBY狀態(tài)。

2.2 試驗參數(shù)設(shè)置常規(guī)ABO和RhD血型篩查試驗的基本參數(shù)設(shè)置包括名稱設(shè)置、試劑參數(shù)設(shè)置、判定邏輯設(shè)置、檢測盤設(shè)置等。與凝集反應(yīng)過程相關(guān)的參數(shù)有細(xì)胞樣本的稀釋濃度及稀釋細(xì)胞樣本的加樣量、血漿樣本的稀釋比例及稀釋血漿樣本的加樣量、各試劑加樣量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間等；SPC、P/C、LIA的閾值范圍是三個重要的凝集判定參數(shù)。通常情況下，工程師在儀器的安裝調(diào)試階段已將上述參數(shù)設(shè)置好；由于檢測項目相對固定，因此一般不需要操作人員對試驗參數(shù)進行設(shè)置或修改；如對試驗參數(shù)進行修改或微調(diào)，務(wù)必十分謹(jǐn)慎，并做大量的比對和確認(rèn)工作[1]。PK7300除可用于常規(guī)ABO和RhD血型檢測外，另一個較為重要的運用就是利用獻血者血漿與試劑O細(xì)胞的反應(yīng)進行獻血者不規(guī)則抗體的初篩[2]；此外，PK7300還可用于某些傳染病抗體檢測及紅細(xì)胞比容測定等，但目前在我國較少被運用于這些方面。

2.3 工作試劑配制廠家建議配制標(biāo)準(zhǔn)血清工作試劑的稀釋倍數(shù)為1∶40，配制反定型用紅細(xì)胞工作試劑的濃度為1.7%。在實踐中，有的實驗室將配制標(biāo)準(zhǔn)血清工作試劑的稀釋倍數(shù)進行了適當(dāng)調(diào)整，如調(diào)整為1∶20；使用該儀器三年多來，我們一直按照1∶40的稀釋倍數(shù)配制標(biāo)準(zhǔn)血清工作試劑，檢測30余萬例樣本，從未出現(xiàn)過因標(biāo)準(zhǔn)血清工作試劑效價不足而導(dǎo)致的可疑或無效檢測，因此我們認(rèn)為廠家建議按1∶40的稀釋倍數(shù)配制標(biāo)準(zhǔn)血清工作試劑是較為合適的，當(dāng)然適當(dāng)調(diào)整(減小)該稀釋倍數(shù)在理論上也是可行的。反定型用紅細(xì)胞工作試劑的濃度對檢測的影響較大，尤其是影響反定型圖像的質(zhì)量，如果濃度過高或過低還可能導(dǎo)致假陰性或假陽性的凝集判定[3,4]；由于正定型血球樣本經(jīng)儀器自動稀釋后的濃度亦為1.7%，因此參照正定型圖像調(diào)整反定型用紅細(xì)胞工作試劑的配制濃度是較為簡便可行的方法；因試劑紅細(xì)胞為冷藏保存，因此宜用冷藏保存的生理鹽水作為配制反定型用紅細(xì)胞工作試劑的稀釋液，而不宜用常溫保存的生理鹽水作為該稀釋液；各實驗室和操作者應(yīng)當(dāng)在實踐中總結(jié)自己配制反定型用紅細(xì)胞工作試劑的經(jīng)驗。

2.4 儀器運行監(jiān)測及常見故障排解OLYMPUS PK7300具有自動監(jiān)控和報警功能，操作者可根據(jù)報警提示查找報警原因并進行相應(yīng)處理，其中因微孔板安裝方向不正確導(dǎo)致儀器運行被意外終止和因樣本加樣針脫出移位導(dǎo)致儀器不能正確完成取樣及檢測過程是較為常見且需要操作者予以及時處理的兩類故障。安裝微孔板時務(wù)必使其板孔向上，封膜標(biāo)記位于微孔板安裝單元的右前方；微孔板安裝方向不正確是導(dǎo)致儀器運行被意外終止的最常見原因之一(出現(xiàn)這類錯誤時，儀器在加樣和孵育階段均不會發(fā)出報警提示，而只有在成像分析和退板時才發(fā)出報警提示并自動轉(zhuǎn)換到STOP狀態(tài)；如果等到儀器提示發(fā)生了該故障再做處理，必然會浪費大量的時間，因此對此類故障應(yīng)以預(yù)防為主)，如果發(fā)生因微孔板安裝方向不正確導(dǎo)致儀器運行被意外終止，操作者需取出停留在成像分析倉內(nèi)的微孔板并重新初始化儀器；操作者在安裝微孔板時養(yǎng)成良好的習(xí)慣并在安裝后檢查確認(rèn)微孔板的方向是否正確，可以有效避免此類故障的發(fā)生。如果發(fā)生樣本加樣針觸碰到樣本管壁等情況，血球或血漿加樣針則可能向上脫出移位；多數(shù)情況下血球或血漿加樣針脫出移位程度較大，導(dǎo)致儀器不能正確感應(yīng)稀釋清洗液的濃度，則儀器會發(fā)出“DILUTED DETERGENT DENSITY ERROR”的報警提示；而少數(shù)情況下血球或血漿加樣針脫出移位程度不大，儀器尚能正確感應(yīng)稀釋清洗液的濃度，則儀器不會發(fā)出上述報警提示；無論血球或血漿加樣針發(fā)生何種程度的移位，儀器是否發(fā)出報警提示，儀器均可繼續(xù)運行(即不會自動轉(zhuǎn)換到PAUSE或STOP狀態(tài))，但不能正確完成取樣及檢測過程，因此需要操作者對儀器予以暫停運行并將血球或血漿加樣針進行復(fù)位后再運行；采購質(zhì)量較好的采血管并予以正確貯存、采集、離心、安裝，可以減少此類故障的發(fā)生。

2.5 查看檢測結(jié)果PK7300內(nèi)置高解析度CCD數(shù)碼相機，基于SPC、P/C、LIA三種賦值參數(shù)對反應(yīng)圖像鑒別、分析及賦值，從而判定反應(yīng)微孔的凝集情況及檢測標(biāo)本的ABO及Rh血型；除了將三種賦值參數(shù)作為判定反應(yīng)微孔是否凝集的依據(jù)外，儀器還能識別一些污點、凝塊等，將這些反應(yīng)孔的凝集情況判定為可疑(?)。操作者在查看檢測結(jié)果時，除了查看儀器判定的ABO及Rh血型是否有可疑結(jié)果外，還應(yīng)查看每塊微板的反應(yīng)圖像是否有異常；當(dāng)遇到可疑檢測結(jié)果時，應(yīng)通過肉眼查看微板、試管法檢測、送檢等方式予以復(fù)核確認(rèn)。

3 微孔板清洗

PK7300用于血型檢測的微孔板為可重復(fù)使用的微孔板，新的或檢測使用后的微孔板均須清洗后方可使用，微孔板清洗時須穿戴手套、護目鏡等保護性裝備，微孔板不能超聲處理，否則會導(dǎo)致微孔受到磨損。選用的洗滌劑類型對清洗效果的影響較大；目前在我國的PK7300的使用單位中，以使用次氯酸鈉或Contrad 2000等表面活性劑兩類消毒清洗劑較為常用。我們曾先后使用0.5%濃度的Contrad 2000和有效氯濃度0.3%的次氯酸鈉液兩種洗滌劑，其中使用前者約二年時間，使用后者一年多時間。對于兩種洗滌劑，我們的主要體會是：經(jīng)Contrad 2000洗滌的微孔板內(nèi)容易產(chǎn)生洗滌劑殘留；經(jīng)次氯酸鈉洗滌的微孔板內(nèi)無洗滌劑殘留，洗滌效果較好，且使用次氯酸鈉更符合生物安全的要求，成本亦較低，但空氣中揮發(fā)的次氯酸鈉對呼吸道有一定的刺激性。我們制作了一套清洗微孔板的輔助裝置，有效地減輕了操作者的勞動強度，減少了次氯酸鈉在空氣中的揮發(fā)?？傊?，微孔板的清洗質(zhì)量直接影響PK7300的檢測質(zhì)量，微孔板清洗是一個十分重要的環(huán)節(jié)，其尚未能實現(xiàn)在儀器內(nèi)自動化完成(這或許是PK7300美中不足之最突出點)，清洗工作相對較為繁重，在清洗微孔板時，不僅需要操作者付出辛勤勞動，同時操作者又可以展示智慧對清洗方法予以改進。

4 撰寫SOP

不能直接將PK7300說明書作為SOP使用。各實驗室應(yīng)根據(jù)自己的工作特點、日常操作順序、對各程序的使用頻率等，參照PK7300說明書撰寫自己的SOP。對于使用頻率較高的日常操作和維護應(yīng)重點寫，步驟具體；對于使用頻率較低的操作和維護可概略地寫，注明參照說明書的某章節(jié)即可；有些內(nèi)容在說明書中寫得較概略，但實際操作中卻步驟較多，如刻錄檢測數(shù)據(jù)及圖像，這類操作則需要在SOP中寫得更詳盡具體。

[1]孫波,曹丹,李文超,等.自動輸血檢測分析系統(tǒng)OLYMPUS PK7300在血型試驗中的參數(shù)設(shè)置[J].中國輸血雜志,2010,23(增刊)∶126.

[2]楊莉娜,錢榕,唐綺,等.獻血者血型不規(guī)則抗體篩查必要性的探討[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2013,31(3)∶267-268.

[3]王福成,施之雍,蔡雋,等.梯形微板技術(shù)在ABO血型檢測中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2007,20(1)∶53-55.

[4]關(guān)菌,郭美英,何秋榮.全自動梯形微板法檢測ABO血型試劑配制比例探討[J].中國醫(yī)藥指南,2011,9(14)∶75-76.

R446，R193.3，R457.1+1

B

1674-1129(2014)06-0801-02

2014-06-27；

2014-08-02)

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.065