姚駿，李沛然，暴悅梅，王琦，曹菲菲

（1.天津市食品研究所有限公司，天津 301609；2.天津農(nóng)學院動物科學與動物醫(yī)學學院，天津 300384）

氯霉素（chloramphenicol，CAP）又叫左旋霉素，是光譜類抗生素，在低濃度時即可抑制多種細菌的生長，特別是流感桿菌和腦膜炎球菌[1]。CAP廣泛應用于水產(chǎn)品養(yǎng)殖的病害防治，但其對人體有較大的毒副作用，主要表現(xiàn)為：抑制骨髓造血功能，引起再生障礙性貧血、細胞減少性貧血、血小板減少和粒狀白細胞減少[2]。

為了保障人民的身體健康以及擴大農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易往來，建立靈敏高效的氯霉素殘留檢測方法對于保障人民身體健康以及擴大農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易往來非常必要。

1 動物源性產(chǎn)品中氯霉素殘留的檢測方法

1.1 微生物測定法

該方法可分為棉簽法、杯碟法等[3]。其原理是根據(jù)氯霉素對特定微生物的生理機能及代謝的抑制作用，定性或定量確定樣品中氯霉素殘留。梅先之等用棉簽法研究了鯉魚體內(nèi)氯霉素殘留，根據(jù)涂滿枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基上有無和大小判斷氯霉素殘留量，最低檢出限為1μg/g[4]。杯碟法是將處理過的樣品加入牛津杯，放置檢測培養(yǎng)基上，根據(jù)抑菌圈判斷氯霉素殘留，主要采用八疊球菌作為試驗菌種[5]。焦彥朝[6]等用杯碟法檢測了鯉魚體內(nèi)氯霉素殘留，檢出限為0.20μg/g，平均回收率為67.5%。

1.2 色譜分析法

1.2.1 氣相色譜分析法

劉永濤[7]等用毛細管電子捕獲氣相色譜法測定了尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）和南美白對蝦（Penaeus vannamei）中氯霉素殘留量，氯霉素在 1.0μg/L～500.0μg/L濃度范圍內(nèi)呈線性相關，相關系數(shù)r≥0.9983，加標濃度在0.2μg/kg～10.0μg/kg時，回收率為83.30%～101.22%。Allen[8]等研究了奶中氯霉素殘留的GC檢測方法，以m-CAP為內(nèi)標，通過SylnoBFT衍生化，用電子捕獲檢測器（ECD）檢測,檢測限達到1 g/kg。

1.2.2 液相色譜分析法

黃志勇[9]等利用高效液相色譜（HPLC）研究了水產(chǎn)品中氯霉素殘留，濃度在50μg/mL～1000μg/mL內(nèi),呈良好線性關系（R2=0.9994），檢出限為 0.014μg/g。T.L.Li[10]等以乙酸乙酯為提取液，蒸干后,再用氯化鈉溶解，正己烷脫脂，過C18SEP柱，278 nm檢測,檢測限達到 5μg/kg,回收率為（95.6±4.5）%。

1.2.3 氣質聯(lián)用分析法

劉宜孜[11]等報道了蜂蜜中氯霉素殘留的固相萃取氣相色譜質譜聯(lián)機法。結果表明不同濃度氯霉素的回收率都在90%以上,加標的回收率為80%～95%，精密度（RSD）為 7.2%～18.2%，最低檢出限為 0.1μg/kg。謝孟峽[12]等采用氣質聯(lián)用法研究了多種動物組織樣品中氯霉素殘留。以乙酸乙酯和磷酸鹽緩沖溶液作為提取液，通過硅膠和C18固相萃取柱進行凈化和富集。檢測結果為不同樣品的加標回收率為80%～100%，檢出限為0.1μg/kg。Nagata[13]等用GC-MS研究了黃尾魚肌肉中氯霉素，氟氯霉素和甲礬霉素殘留。利用乙酸乙酯提取氯霉素，在Florisil小柱中用3∶7的甲醇-乙醚洗脫，在50℃條件下用BSA衍生10 min。質譜采用EI源，檢測離子為m/z=208225。最終結果回收率高于65%，檢出限為 5μg/kg。

1.2.4 液質聯(lián)用分析法

李資玲[14]等利用乙酸乙酯提取濃縮魚肉中的CAP，并且經(jīng)過正己烷脫脂凈化，利用HPLC-MS對樣品進行外標定量分析。結果表明：CAP濃度在0.04μg/kg～1.0μg/kg 范圍內(nèi)時，R2=0.9999，0.10、0.20、0.40μg/kg添加水平下的回收率為91.0%～100.1%（RSD：2.6%～4.1%），檢出限為 0.01μg/kg，定量限為 0.02μg/kg。Victor[15]等利用LC/MS檢測了多組織中的氯霉素殘留。前處理分別利用乙腈、丙酮提取組織和尿中的CAP，再過LMS固相萃取柱凈化。LC采用甲酸-甲醇作流動相，MS使用大氣壓電離（API）模式，選擇離子m/z321（M-2H）檢測，結果顯示肌肉中檢測限為0.5μg/kg，回收率（95±0.48）%。田艷玲[16]等利用高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質譜聯(lián)用測定牛奶中的氯霉素，乙腈除去蛋白，以MGⅢ-C18柱（2.1 mm×150 mm，1.8μm）反相分離，電噴霧負離子MRM模式檢測，檢出限為0.07μg/L，加標回收率平均為103.4%。

1.3 免疫分析法

免疫分析法（immunoassays，IAs）是以抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的分析方法，主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫傳感器法、膠體金免疫層析法和磁微粒免疫分析法。

1.3.1 酶聯(lián)免疫法

譚慧[17]等利用間接酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）方法檢測水產(chǎn)品中CAP殘留，檢測限達到0.01μg/kg，兩種添加水平（0.5μg/kg 和 2.0μg/kg）的加標回收率分別為72%～116%和86%～108%。馬玲[18]等以常規(guī)兩步式化學發(fā)光酶免疫法（CLEIA）為前提，采用同時加入一抗和二抗的方法，優(yōu)化包被條件和競爭反應時間，形成了一步式CAP檢測方法，且最優(yōu)條件下檢測限為0.01μg/L，同常規(guī)兩步式方法相比，檢測時間縮短1.5 h。

1.3.2 免疫傳感器法

張麗君[19]等建立了分子印跡電化學傳感器的CAP檢測法，以鄰苯基酚為功能單體，CAP分子印跡聚合物（MIP）膜通過電化學聚合方法在Pt電極上制備，結果表明最優(yōu)條件下CAP線性范圍為4.33×10-8mol/L～3.09×10-6mol/L，檢出限為 2.5×10-8mol/L。Agül L[20]等建立活性炭微電極的氯霉素電化學檢測法，檢出限為15ng/mL，測試樣品的回收率均在97%以上。

1.3.3 膠體金免疫層析法

宋紅波[21]等利用膠體金技術檢測了雞肉、魚肉和蝦肉中CAP殘留，加標在0.5μg/kg及以上的樣品均能用膠體金試劑盒測出，并且用氣象色譜法驗證，并未出現(xiàn)假陽性情況。張燕[22]等建立并優(yōu)化了滲濾式和側流式兩種免疫膠體金法，靈敏度分別達到0.8μg/L和1μg/L，通過酶聯(lián)免疫試驗驗證了其有效性，并利用加速穩(wěn)定試驗證明了滲濾式試紙條可在6個月內(nèi)4℃下保持結果可靠性。

1.3.4 磁微粒免疫分析法

黃薇[23]通過對比8種國內(nèi)外超順磁性納米微粒特性，篩選出適合磁性免疫分析的磁球，并且通過免疫層析條件優(yōu)化，建立起一種快速檢測氯霉素的磁微粒免疫層析新方法，檢出限達到4ng/mL。王西麗[24]等利用C18-磁性納米顆粒萃取蝦肉中氯霉素，得出最佳萃取條件為50℃結合5 min，甲醇洗脫3次，檢出限達到0.1μg/kg，并且在 0.1μg/kg～10μg/kg 范圍內(nèi)，相關系數(shù)為0.9941。

2 問題和展望

色譜法靈敏度相對較高，結果準確，但是前處理比較復雜，成本較高，適合實驗室檢測。免疫分析法相對更加快速，成本低，適合大批量的快速檢測，滿足現(xiàn)場監(jiān)控和基層檢測的要求，并且隨著新技術和新材料的出現(xiàn)，如磁微粒，氯霉素的檢測會更加準確快速。

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