黃秀榮

（廣西河池市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 河池 547000）

頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌的評(píng)價(jià)

黃秀榮

（廣西河池市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 河池 547000）

目的探討研究頭孢西?。‵OX K-B）法對(duì)耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測(cè)價(jià)值。方法選取132株葡萄球菌，分別通過苯唑西林（OXA）瓊脂平板篩選試驗(yàn)法、FOX K-B法以及OXA K-B法對(duì)MRS加以檢測(cè)，將OXA瓊脂平板篩選法的檢測(cè)結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比分析FOX與OXA K-B法的敏感性與特異性。結(jié)果本組132株葡萄球菌中，74株金黃色葡萄球菌通過OXA瓊脂平板篩選檢測(cè)確定為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）為30株；58株葡萄球菌屬于凝固酶陰性，其中48株檢測(cè)確定為耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）。參考以上標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)OX K-B法對(duì)MRSA檢測(cè)的特異性、敏感性均達(dá)到100%，但OXA K-B法檢測(cè)的特異性為90.91%（40/44），敏感性為93.33%（28/30）。FOX K-B法對(duì)MRCNS檢測(cè)的特異性、敏感性均達(dá)到100%，但OXA K-B法檢測(cè)的特異性為40.0%（4/10），敏感性為95.83%（46/48）。結(jié)論FOX K-B發(fā)檢測(cè)MRS的敏感性與特異性極高，具有極高的應(yīng)用價(jià)值。

FOX K-B法；檢測(cè)；耐甲氧西林葡萄球菌；評(píng)價(jià)

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是全球范圍內(nèi)醫(yī)院感染中的一種重要病原菌，并且已經(jīng)擴(kuò)散成社區(qū)性感染[1]。在部分慢性疾病患者、吸毒人群中尤其流行，其感染率逐年增長(zhǎng)。其中，MRCNS感染的發(fā)生概率最高。以上兩種葡萄球菌對(duì)臨床抗菌藥物的耐藥性十分良好。所以，實(shí)驗(yàn)室研究務(wù)必要確定一種可靠方法，可以準(zhǔn)確篩選及確認(rèn)。現(xiàn)我院針對(duì)臨床分離出來(lái)的132株葡萄球菌，分別應(yīng)用FOX與OXA K-B法加以檢測(cè)，并將結(jié)果同OXA瓊脂平板篩選法予以對(duì)比分析，總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采集我院臨床分離出來(lái)的132株葡萄球菌分別源于臨床膿液/創(chuàng)面分泌物、前列腺液、尿液、血液以及痰液等各項(xiàng)送檢標(biāo)本。其中，74株為金黃色葡萄球菌，58株為凝固酶陰性葡萄球菌。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

OXA紙片：每片1 μg；FOX紙片：每片30 μg；來(lái)自英國(guó)Oxoid公司。水解酪蛋白（即為M-H）瓊脂選自杭州天和微生物試劑有限公司；OXA瓊脂平板選自北京朋利馳科技有限公司。

1.3 方法

OXA瓊脂平板篩選法、FOX K-B法以及OXA K-B法都參考NCCLS制定的標(biāo)注實(shí)施操作。OXA瓊脂平板篩選法檢測(cè)結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)[2]：如金黃色葡萄球菌，應(yīng)置于35 ℃環(huán)境中孵育24 h，并可以透光觀察，在平板上所有細(xì)菌的生長(zhǎng)均可評(píng)判為MRSA。如凝固酶陰性葡萄球菌應(yīng)該在孵育48 h以后對(duì)其透光觀察，并且平板上所有細(xì)菌生長(zhǎng)均可評(píng)判為MRCNS。

1.4 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

FOX K-B法[3]：①對(duì)MRSA檢測(cè)的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。R≤19 mm，S≥20 mm。②對(duì)MRCNS檢測(cè)的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。R≤24 mm，S≥25 mm。OXA K-B法：①對(duì)MRSA檢測(cè)的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。R≤10 mm，S≥13 mm。在11～12 mm時(shí)，判斷為中介。②對(duì)MRCNS檢測(cè)的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。R≤17 mm，S≥18 mm。質(zhì)控菌株選為金黃色葡萄球菌（即為ATCC26112）。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)金黃色葡萄球菌的檢測(cè)結(jié)果

本組132株菌中，74株屬于金黃色葡萄球菌，通過OXA瓊脂平板篩選法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MRSA有30株，比率為40.54%（30/74）；MSSA有44株，比率為59.46%（44/74）。見表1。將OXA瓊脂平板篩選法檢測(cè)結(jié)果作為評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，可知FOX K-B法檢測(cè)的特異性與敏感性均達(dá)100%。但OXA K-B法檢測(cè)的特異性為90.91%（40/44），敏感性為93.33%（28/30）。

表1 苯唑西林與頭孢西丁紙片擴(kuò)散法對(duì)金黃色葡萄球菌檢測(cè)結(jié)果分析表[n（%）]

2.2 3種方法對(duì)凝固酶陰性葡萄球檢測(cè)結(jié)果

本組132株菌中，檢測(cè)出58株菌凝固酶陰性葡萄球菌，通過OXA瓊脂平板篩選法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MRCNS有48株，比率為82.76%（48/58），MSCNS有10株，比率為17.24%（10/58）。見表2。將OXA瓊脂平板篩選法檢測(cè)結(jié)果作為評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，可知FOX K-B法檢測(cè)的特異性與敏感性均達(dá)100%。但OXA K-B法檢測(cè)的特異性為40.0%（4/10），敏感性為95.83%（46/48）。

3 討 論

苯唑西林瓊脂平板法指通過耐甲氧西林葡萄球菌均能夠在高滲平板上繼續(xù)生長(zhǎng)的特性對(duì)其加以篩選及鑒定，可作為NCCLS推薦的檢測(cè)MRS標(biāo)準(zhǔn)篩選方法。據(jù)以往資料表明將PCR檢測(cè)meca基因作為金標(biāo)準(zhǔn)，OXA瓊脂平板法檢測(cè)特異性、靈敏性均是100%。所以，本次實(shí)驗(yàn)把OXA瓊脂平板法設(shè)定為參考標(biāo)準(zhǔn)方法。OXA K-B是檢測(cè)MRS的一種傳統(tǒng)方法，但是對(duì)于高產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株能夠減緩OXA發(fā)生水解，從而產(chǎn)生耐假藥[4-5]。但是如果mecA基因表達(dá)水平很低時(shí)，可能出現(xiàn)假敏感。OXA屬于第二代頭酶烯類的一種抗生素，對(duì)β-內(nèi)酰胺酶具有高度的穩(wěn)定性[6]。同時(shí)對(duì)葡萄球菌PBP4具有很高的親和性，并且FOX存在時(shí)，將促進(jìn)mecA基因表達(dá)合成PBP2a，將mecA基因中的低表達(dá)菌株能夠被檢測(cè)出來(lái)，但是OXA不具備該特點(diǎn)。以往NCCLS添加了應(yīng)用FOX K-B法對(duì)MRS進(jìn)行檢測(cè)。本次研究對(duì)132株葡萄球菌予以MRS檢測(cè)，將OXA瓊脂平板法檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)評(píng)價(jià)FOX K-B法與傳統(tǒng)OXA K-B法檢測(cè)的效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FOX K-B法和OXA瓊脂平板法檢測(cè)結(jié)果相互一致，但其敏感性、特異性都是100%。而OXA K-B法對(duì)MRSA檢測(cè)的效率和FOX瓊脂平板法比較相近，其檢測(cè)的特異性90.91%（40/44），敏感性為93.33%（28/30）。對(duì)于MRSN檢測(cè)來(lái)說(shuō)，OXA K-B法的敏感性為95.83%（46/48），同OXA瓊脂平板法相近似，但是其特異性僅為40.0%（4/10）。顯著性小于OXA瓊脂平板法。由此說(shuō)明對(duì)MRSCN的檢測(cè)，OXA K-B法所檢測(cè)出來(lái)的假耐藥較高。在本組132株葡萄球菌中，OXA K-B法檢測(cè)出10株假耐藥、4株假敏感。在對(duì)其進(jìn)一步采取頭孢硝噻酚實(shí)驗(yàn)時(shí)顯示10株假耐藥均屬于高產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株，也許與FOX對(duì)其穩(wěn)定性不夠，容易導(dǎo)致其假耐藥，或是中介有相關(guān)性。因?yàn)镕OX對(duì)β-內(nèi)酰胺酶具有高度的穩(wěn)定性，因此隨其造成的影響甚微，其結(jié)果比較明確，容易判斷。此外4株假敏感是否屬于mecA低表達(dá)還需要進(jìn)一步證實(shí)。實(shí)驗(yàn)期間可見，在鹽平板上24 h以后，對(duì)金黃色葡萄球菌沒有菌落產(chǎn)生的部分菌株，在放置48 h以后又出現(xiàn)菌落生長(zhǎng)。但是對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌，在24、48、72 h以后發(fā)現(xiàn)均存在部分差異，因此應(yīng)用鹽平板法對(duì)MRS進(jìn)行篩選時(shí)，應(yīng)該嚴(yán)格根據(jù)規(guī)定孵育時(shí)間進(jìn)行判讀結(jié)果。FOX K-B法容易保存，對(duì)MRS檢測(cè)的效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于OXA K-B法，且可作為MRS檢測(cè)時(shí)更適合的介質(zhì)。但是在實(shí)際報(bào)告時(shí)，應(yīng)報(bào)告OXA耐藥，而不是FOX耐藥。總之，F(xiàn)OX K-B法檢測(cè)MRS的敏感性與特異性極高，具有極高的應(yīng)用價(jià)值。

表2 苯唑西林與頭孢西丁紙片擴(kuò)散法對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌檢測(cè)結(jié)果表[n（%）]

[1] 喻華,劉小琦,劉華,等.頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,27(12): 1085-1087.

[2] 胡付品,吳湜,葉信予,等,.頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌[J].中國(guó)感染與化療雜志,2005,5(2):86-88.

[3] 任福榮,程永娥,孫浩仙,等.頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌的評(píng)價(jià)[J].工企醫(yī)刊,2006,19(3):46.

[4] 宋焰桃,徐元宏.頭孢西丁紙片評(píng)價(jià)耐甲氧西林葡萄球菌的探討[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(2):103-106.

[5] 何云燕,夏云,龐麗.應(yīng)用頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌[J].重慶醫(yī)學(xué),2007(1):55-56+59.

[6] 王大方,倪語(yǔ)星.頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2004,19(6):487-489.

Evaluation of Cefoxitin Disk Diffusion Method to Detect Methicillin-Resistant Staphylococcus

HUANG Xiu-rong
(Department of Laboratory, Hechi People's Hospital, Hechi 547000, China)

ObjectiveTo explore the cefoxitin disc diffusion method for methicillin-resistant staphylococcus(MRS)test value.MethodChoose 132 strains of staphylococcus, respectively by benzene azole Westwood AGAR plate screening test method, cefoxitin disc diffusion method and benzene azole Westwood detection of MRS disc diffusion method, the benzene azole Westwood method of AGAR plate screening test results as the standard, analysis of cefoxitin and benzene azole Westwood disc diffusion method, sensitivity and specificity.Results132 strains of staphylococcus aureus, 74 strains of staphylococcus aureus benzene thiazole Westwood of AGAR plate screening tests identified as methicillin-resistant staphylococcus aureus(MRSA)is 30 strains; 58 grape bacteria strains belong to coagulase negative, of which 48 strains testing identified as methicillin-resistant coagulase negative staphylococcus(MRCNS). Refer to the above standard, cefoxitin disc diffusion method for MRSA detection specificity and sensitivity of 100%, but the benzene azole Westwood disc diffusion method to detect the specificity was 90.91% (40/44), the sensitivity was 93.33%(28/30). The cefoxitin disc diffusion method for MRCNS detection specificity and sensitivity of 100%, but the benzene azole Westwood disc diffusion method to detect the specificity of 40.0%(4/10), the sensitivity was 95.83%(46/48).ConclusionCefoxitin disc diffusion high detection sensitivity and specificity of MRS, have high application value.

The cefoxitin disc diffusion method; Detection; Methicillin-resistant staphylococcus aureus; Evaluation

R446

B

1671-8194（2014）09-0022-02