朱紅麗　仝進(jìn)毅

●臨床研究

腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶組織中Ki67和血清CA125的測(cè)定及意義

朱紅麗仝進(jìn)毅

【摘要】目的檢測(cè)腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶組織中Ki67的表達(dá)和血清CA125水平，探討其臨床意義。方法收集住院手術(shù)經(jīng)病理檢查證實(shí)為腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者38例（研究組），盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者57例（對(duì)照組），用免疫組化方法測(cè)定兩組患者病灶組織中Ki67的表達(dá)，放射免疫法測(cè)定血清CA125水平，分析其臨床資料并進(jìn)行隨訪。結(jié)果研究組患者Ki67陽性率（52.6%）顯著高于對(duì)照組（24.6%）（P＜0.05），兩組Ki67陽性患者的血清CA125水平均顯著高于陰性患者（均P＜0.05）。研究組無復(fù)發(fā)病例，而對(duì)照組復(fù)發(fā)率為21.4%（P＜0.05）。結(jié)論腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制可能與盆腔子宮內(nèi)膜異位癥不同；子宮內(nèi)膜異位癥患者Ki67的表達(dá)與CA125水平存在一定的正相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】Ki67CA125腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥

腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥是一種典型的醫(yī)源性疾病，也是子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制中種植理論的依據(jù)。近年來，隨著剖宮產(chǎn)率的提高，腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病率顯著增加，已成為普通婦科目前最關(guān)注的問題之一。但腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制是否與盆腔子宮內(nèi)膜異位癥一致，目前仍然存在爭(zhēng)論。為此，本文通過檢測(cè)腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶組織中增殖細(xì)胞核抗原Ki67的表達(dá)以及血清CA125水平，并與盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者進(jìn)行比較，分析其差異，以探討腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制，為臨床診治提供幫助。

1　對(duì)象和方法

1.1對(duì)象選擇2010-01—2013-12在我院手術(shù)經(jīng)病理檢查證實(shí)為腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者38例為研究組，年齡20～45（34.2±5.5）歲；均為剖宮產(chǎn)術(shù)后發(fā)現(xiàn)腹壁切口瘢痕處疼痛性包塊,且本次未發(fā)現(xiàn)合并盆腔子宮內(nèi)膜異位癥；經(jīng)知情同意后，每例患者術(shù)中取1份病灶組織標(biāo)本，經(jīng)10%甲醛溶液固定、石蠟包埋后作免疫組化檢測(cè)。選擇同期我院住院手術(shù)經(jīng)病理檢查證實(shí)為盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者57例為對(duì)照組，年齡24～41（32.1±7.2）歲；其病灶組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定、石蠟包埋后作免疫組化檢測(cè)。所有患者在術(shù)前6個(gè)月內(nèi)未服用過性激素類藥物。兩組患者年齡的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1病灶Ki67表達(dá)水平的測(cè)定采用EnVision免疫組化二步法，常規(guī)石蠟包埋的標(biāo)本經(jīng)4 μm厚連續(xù)切片后，用鼠抗人單克隆抗體Ki67 Antigen（產(chǎn)品編號(hào)GK400105）；1∶250稀釋（福州邁新生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）檢測(cè)Ki67的表達(dá)。具體操作按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。石蠟切片脫蠟至水后行高壓熱修復(fù)，滴加過氧化氫10min阻斷后每張切片滴加第一抗體50μl，室溫下孵育1h，再滴加二抗EnVisionTM50μl，室溫下孵育1h，最后經(jīng)二氨基聯(lián)苯氨（DAB）顯色，蘇木素復(fù)染。

1.2.2Ki67免疫組化染色結(jié)果判定Ki67免疫組化染色以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)著色的程度將表達(dá)強(qiáng)度分為無著色細(xì)胞（-）；陽性細(xì)胞＜5%，著色淡（+）；陽性細(xì)胞≥5%，＜35%，中度著色（++）；陽性細(xì)胞≥35%，著色深（+++）。

1.2.3血清CA125水平的測(cè)定取已保存的患者血清，應(yīng)用放射免疫方法測(cè)定，采用瑞士羅氏公司1010型電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀自動(dòng)完成，檢測(cè)試劑及反應(yīng)杯均由羅氏公司提供專用，嚴(yán)格按藥盒說明進(jìn)行操作。

1.3隨訪兩組患者均進(jìn)行門診隨訪3年，術(shù)后3個(gè)月復(fù)查一次，之后每半年復(fù)查，觀察癥狀、體征、血清CA125及盆腔B超情況。

1.4療效判斷和復(fù)發(fā)的定義癥狀緩解：痛經(jīng)、性交痛、盆腔疼痛、陰道后穹隆觸痛，其中1項(xiàng)或全部癥狀消失或緩解；體征緩解：子宮直腸窩結(jié)節(jié)明顯縮小或消失或結(jié)節(jié)觸痛明顯改善或消失；復(fù)發(fā)：手術(shù)或規(guī)范藥物治療后，病灶減滅或縮小，癥狀消除或緩解后，再次出現(xiàn)臨床癥狀且恢復(fù)至治療前水平或加重，或B超檢查再次發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位病灶。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，測(cè)得計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1兩組患者病灶Ki67表達(dá)陽性率和血清CA125水平的比較見表1、圖1-3。

表1　兩組患者病灶Ki67表達(dá)陽性率和血清CA125水平比較

圖1　盆腔子宮內(nèi)膜異位癥病灶Ki67陰性（免疫組化染色，×400）

圖2　腹壁子宮內(nèi)膜異位癥病灶Ki67陰性（免疫組化染色，×400）

圖3　腹壁子宮內(nèi)膜異位癥病灶Ki67陽性（免疫組化染色，×400）

由表1可見，研究組Ki67的陽性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。研究組血清CA125水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

由圖1-3可見，兩組患者Ki67的表達(dá)均出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜腺體及上皮間質(zhì)中。

2.2兩組Ki67表達(dá)陽性與陰性患者血清CA125水平的比較見表2。

由表2可見，兩組Ki67表達(dá)陽性患者血清CA125水平均顯著高于陰性患者（均P＜0.05）。

2.3兩組患者病灶Ki67表達(dá)水平與復(fù)發(fā)的關(guān)系研究組隨訪期間未發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)病例。對(duì)照組有4例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)時(shí)間為術(shù)后10～31個(gè)月，經(jīng)婦科檢查及B型超聲檢查診斷。對(duì)照組Ki67表達(dá)陽性的14例患者中有3例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為21.4%；Ki67表達(dá)陰性的43例患者中1例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為2.3%，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

表2 兩組Ki67表達(dá)陽性與陰性患者血清CA125水平的比較（IU/m）

3　討論

在接受腹腔鏡檢查或腹腔探查的76%～90%的生育期婦女可見月經(jīng)的反流，然而子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生率僅為6.2%～8.2%，提示尚有其他因素決定子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生，如子宮內(nèi)膜異位細(xì)胞與上皮細(xì)胞免疫親和因素，局部盆腔環(huán)境因素等[1]。

腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者均有盆腔手術(shù)史，在腹壁瘢痕的部位出現(xiàn)硬結(jié)，月經(jīng)期發(fā)生疼痛，硬結(jié)增大，往往認(rèn)為是手術(shù)時(shí)子宮內(nèi)膜直接種植所致。術(shù)后隨訪3年,切口無月經(jīng)周期痛，無復(fù)發(fā)病例。而盆腔內(nèi)異具有侵襲性強(qiáng)及復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)[2-3]。

Ki67是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志基因，也是應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞增殖標(biāo)志物，編碼基因定位于第10號(hào)染色體。它的合成、表達(dá)與增殖細(xì)胞的增殖周期有關(guān)，在有絲分裂中，起著維持DNA規(guī)則結(jié)構(gòu)的重要作用。本研究表明腹壁切口內(nèi)異病灶的Ki67陽性率高于盆腔內(nèi)異病灶，提示腹壁異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力比盆腔異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞強(qiáng)，但復(fù)發(fā)率低于盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者。分析其原因可能有：（1）病灶細(xì)胞生長(zhǎng)特性存在差異，Scotti等[4]研究表明盆腔子宮內(nèi)膜異位的上皮細(xì)胞不是過度增殖，而是顯現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)消失，顯示一個(gè)侵襲特性。（2）盆腔子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展存在細(xì)胞增殖能力以外的因素，如免疫因素，上皮化生因素，盆腔高濃度雌激素因素。（3）腹壁子宮內(nèi)膜異位癥較為局限，能完整切除包塊，而盆腔子宮內(nèi)膜異位癥由于周圍臟器的粘連，導(dǎo)致部分粘連嚴(yán)重的患者子宮內(nèi)膜異位癥囊腫殘留，引起術(shù)后復(fù)發(fā)。

血清CA125水平在盆腔子宮內(nèi)膜異位癥診斷的臨床應(yīng)用價(jià)值已被廣泛研究[5-8]，盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CA125水平顯著升高，認(rèn)為與子宮內(nèi)膜異位癥的嚴(yán)重程度和復(fù)發(fā)相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)盆腔子宮內(nèi)膜異位癥病灶組織中Ki67的表達(dá)水平與血清CA125的值呈正相關(guān)，表明CA125水平可能與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，與疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。此外，腹壁子宮內(nèi)膜異位癥組血清CA125水平均在正常范圍內(nèi)，提示臨床檢測(cè)腹壁子宮內(nèi)膜異位癥血清CA125水平對(duì)疾病嚴(yán)重程度及復(fù)發(fā)與否的判斷意義不大。

本研究發(fā)現(xiàn)，Ki67在腹壁切口與盆腔子宮內(nèi)膜異位癥病灶的表達(dá)水平不同，提示腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制可能與盆腔子宮內(nèi)膜異位癥不同。Ki67在腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥中表達(dá)率顯著高于盆腔子宮內(nèi)膜異位癥，提示腹壁異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力比盆腔異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞強(qiáng)。Ki67表達(dá)陽性的子宮內(nèi)膜異位患者CA125水平高于Ki67表達(dá)陰性的子宮內(nèi)膜異位患者，提示Ki67的表達(dá)與CA125水平存在一定的正相關(guān)。盆腔子宮內(nèi)膜異位癥患者中Ki67表達(dá)陽性的患者復(fù)發(fā)率高于陰性組，驗(yàn)證了Ki67與細(xì)胞的增殖能力相關(guān)。

4　參考文獻(xiàn)

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（本文編輯：沈昱平）

收稿日期：（2014-04-14）

作者單位：310006杭州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科通信作者：仝進(jìn)毅，E-mail：tongjinyi@sohu.com

Ki67 expression in women with abdominal incisional endometriosis

【Abstract】ObjectiveTo investigate Ki67 expression in abdominal incisional endometriosis and its significance.Methods Patients with endometriosis(EMS)admitted in Hangzhou First People's Hospital from January 2010 to December 2013 were enrolled in the study,including 57 cases with pelvic endometriosis and 38 cases with abdominal incisional endometriosis.The expression of proliferating cell nuclear antigen(Ki67)in tissue was detected with immunohistochemical method and serum CA-125 levels were measured with radioimmunoassay.ResultsKi67 expression in abdominal wall endometriosis was significantly higher than that in pelvic endometriosis(P＜0.05).Serum CA125 levels in abdominal wall endometriosis was significantly lower than that in pelvic endometriosis(P＜0.05).Serum CA125 was significantly different between groups of different Ki67 expression(P＜0.05).Cumulative recurrence rate in abdominal wall endometriosis was significantly lower than that in pelvic endometriosis. CA125 level was higher in EMS with positive Ki67 expression than that in EMS with negative Ki67 expression.ConclusionKi67 is differently expressed in abdominal incision and in pelvic endometriosis,suggesting that the pathogenesis of abdominal incision endometriosis and pelvic endometriosis may be different;and Ki67 expression may be related to relapse of pelvic endometriosis.

【Key words】Ki67CA125Pelvic endometriosisAbdominal wall endometriosis