聶超 朱萱萱 于云華 張學(xué)非 周杰

（1.江蘇建康職業(yè)學(xué)院，江蘇南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南京 210029；3.新疆伊犁哈薩克自治州中醫(yī)醫(yī)院，新疆伊犁 835000）

蕁芍血脈平膠囊對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊家兔模型炎性因子的影響

聶超1朱萱萱2于云華3張學(xué)非2周杰1

（1.江蘇建康職業(yè)學(xué)院，江蘇南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南京 210029；3.新疆伊犁哈薩克自治州中醫(yī)醫(yī)院，新疆伊犁 835000）

目的：觀察蕁芍血脈平膠囊對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊家兔模型炎性因子的影響，研究其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。方法：采用高脂喂養(yǎng)加頸動(dòng)脈球囊拉傷術(shù)制造動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型家兔，隨機(jī)分成模型組、辛伐他汀組、丹參組和蕁芍血脈平高、中、低劑量組，每組10只，另取10只正常家兔作為正常組。分別給予相應(yīng)藥物干預(yù)8周，正常組與模型組給予等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束檢測(cè)并比較各組家兔腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）含量。結(jié)果：經(jīng)過(guò)藥物干預(yù)后，蕁芍血脈平膠囊各劑量組家兔血液中IL-1明顯低于模型組，蕁芍血脈平膠囊低、中劑量組家兔血液中IL-10明顯高于模型組，蕁芍血脈平膠囊中劑量組家兔血液中TNF-α濃度明顯低于模型組。結(jié)論：蕁芍血脈平膠囊可以減輕動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中炎癥因子的釋放，調(diào)節(jié)免疫功能，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，從而對(duì)防治動(dòng)脈粥樣硬化有積極的意義。

動(dòng)脈粥樣硬化 蕁芍血脈平膠囊 腫瘤壞死因子 白細(xì)胞介素 實(shí)驗(yàn)研究

1.2 藥物蕁芍血脈平膠囊：由新疆伊犁哈薩克自治州中醫(yī)醫(yī)院提供，該藥是新疆哈薩克民族藥物，主要包含的中藥成分有赤芍、姜黃、桂枝、沒藥，將膠囊研成粉末經(jīng)蒸餾水充分溶解配制成水溶液。復(fù)方丹參滴丸：天津天士力制藥股份有限公司，批號(hào)：12031，經(jīng)蒸餾水配制成溶液；辛伐他汀：杭州默沙東制藥有限公司，批號(hào)：120710，經(jīng)蒸餾水配制成溶液。

1.3 試劑與儀器白細(xì)胞介素-1（IL-1）：由美國(guó)BP公司提供，批號(hào)：201302208QW；白細(xì)胞介素-10（IL-10）：由美國(guó)BP公司提供，批號(hào)：20130220RW；腫瘤壞死因子α（TNF-α）：由美國(guó)BP公司提供，批號(hào)：20130220DF；高脂飼料：由1%膽固醇+5%蛋黃+5%豬油+89%普通飼料組成；球囊導(dǎo)管：DedwardsLifesciences，批號(hào)：59219817；LDZ-5離心機(jī)：北京京立離心機(jī)有限公司；756PC紫外線分光光度計(jì)：由上海光譜儀器有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模家兔正常飼養(yǎng)1周后經(jīng)耳緣靜脈取血測(cè)定實(shí)驗(yàn)前家兔血脂，給予高膽固醇飼料100g/d飼養(yǎng)2周。以20%烏拉坦5mL經(jīng)耳緣靜脈麻醉后，在右側(cè)頸總動(dòng)脈走行分離皮膚和皮下組織，鈍性分離出頸總動(dòng)脈約4～5cm，向遠(yuǎn)心端分離出頸內(nèi)動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，用動(dòng)脈夾夾住頸總動(dòng)脈與頸內(nèi)動(dòng)脈以阻斷血流，在頸外動(dòng)脈壁上剪一“V”形小口后，逆行插入套有球囊的導(dǎo)管（用1∶15稀釋的肝素鈉生理鹽水浸潤(rùn)），送入約5cm，抽出導(dǎo)絲，連接壓力泵，旋轉(zhuǎn)至約2個(gè)大氣壓，以球囊充盈為度，緩慢回拉球囊至分叉處，重新插入導(dǎo)管，再牽拉一次，以確保內(nèi)膜拉傷，退出導(dǎo)管，結(jié)扎頸外動(dòng)脈近心端，逐層縫合皮下組織和皮膚，術(shù)后青霉素鈉注射液沖洗創(chuàng)面。術(shù)后按8萬(wàn)單位/只劑量肌肉注射家兔，連續(xù)3d。手術(shù)后繼續(xù)飼喂高脂飼料2周。

2.2 動(dòng)物分組及藥物干預(yù)造模后的家兔經(jīng)耳緣靜脈采血2mL，3000r/min離心10min后取血清，測(cè)定家兔血脂。將血脂升高的家兔，隨機(jī)分組編號(hào)，每組10只，參照《中藥藥理研究方法》經(jīng)灌胃器灌胃給藥。正常組：予等量生理鹽水；模型組：予等量生理鹽水；復(fù)方丹參滴丸組：予54mg/kg復(fù)方丹參滴丸溶液；辛伐他汀組：予1.33mg/kg辛伐他汀溶液；蕁芍血脈平膠囊高、中、低劑量組：分別予蕁芍血脈平溶液6.28、3.14、1.57mg/kg。

2.3 標(biāo)本采集與檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用試劑盒檢測(cè)各組家兔血液中TNF-α、IL-1、IL-10含量。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

見表1。與正常組比較，模型組家兔血液中IL-1含量略有升高，IL-10含量明顯降低（P＜0.01），TNF-α含量明顯升高（P＜0.01）。干預(yù)處理后，與模型組比較，蕁芍血脈平膠囊各劑量組家兔血液中IL-1含量明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），蕁芍血脈平膠囊低、中劑量組家兔血液中IL-10含量明顯升高（P＜0.01），蕁芍血脈平膠囊中劑量組家兔血液中TNF-α含量明顯降低（P＜0.05）。

4 討論

近幾十年來(lái)，我們逐漸認(rèn)識(shí)到炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化及其并發(fā)癥中的重要作用，炎癥貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的全過(guò)程[2]。TNF-α具有廣泛的生物學(xué)活性，其在動(dòng)脈粥樣硬化、代謝紊亂和炎癥中發(fā)揮作用，可以促使極低密度脂蛋白（VLDL）過(guò)量生成，降低高密度脂蛋白（HDL）水平，同時(shí)還可以刺激炎癥因子生成，直接發(fā)揮促炎作用[3-4]。IL-1和IL-10也成為動(dòng)脈粥樣硬化的重要標(biāo)志物。IL-1可刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)性氧分子，使血管通透性增加，產(chǎn)生有細(xì)胞毒性的脂質(zhì)過(guò)氧化物；可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，提高凝血酶原活性，促進(jìn)中性粒細(xì)胞對(duì)血管壁的黏附及平滑肌細(xì)胞增生，在AS形成的炎癥反應(yīng)過(guò)程中，導(dǎo)致血管壁損傷、增厚、血栓形成[5]。IL-10是一種具有強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用的抗炎細(xì)胞因子，具有下調(diào)炎癥反應(yīng)的作用，臨床上IL-10與多種疾病密切相關(guān)[6]。

本研究結(jié)果顯示，蕁芍血脈平膠囊高、中、低劑量給藥8周后均能不同程度地降低動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型家兔血液中IL-1和TNF-α的含量，減少血栓的生成，改善動(dòng)脈粥樣硬化的癥狀，同時(shí)蕁芍血脈平膠囊中、低劑量還能顯著升高IL-10，減輕炎癥反應(yīng)，起到保護(hù)血管的作用。

表1 各組家兔血液IL-1、IL-10和TNF-α含量比較（±s）

表1 各組家兔血液IL-1、IL-10和TNF-α含量比較（±s）

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別正常組動(dòng)物數(shù)劑量（mg/kg）10 IL-1 OD值濃度（pg/mL）OD值0.60±0.046.65±0.850.85±0.04 IL-10濃度（pg/mL）270.03±16.48 TNF-α OD值濃度（pg/mL）0.28±0.02222.08±6.27 0.62±0.056.88±0.900.62±0.02181.31±8.85△△0.46±0.04971.89±13.74△△模型組10辛伐他汀組101.330.55±0.025.56±0.48*0.64±0.03186.88±10.150.34±0.04839.81±13.40*復(fù)方丹參滴丸組10540.56±0.065.73±1.130.68±0.03205.15±10.10**0.37±0.04246.30±11.80蕁芍血脈平低劑量組106.280.49±0.054.35±0.93**0.72±0.06220.77±21.26**0.45±0.05469.72±15.05蕁芍血脈平中劑量組103.140.51±0.064.88±1.12*0.69±0.04207.62±13.95**0.35±0.03142.69±8.50*蕁芍血脈平高劑量組101.570.41±0.042.84±0.77**0.69±0.11209.46±40.760.40±0.04754.86±13.32

中醫(yī)認(rèn)為本病病因?yàn)樘禎?、氣滯、血瘀為患，為本虛?biāo)實(shí)證。近年來(lái)，許多研究證實(shí)動(dòng)脈粥樣硬化疾病的病機(jī)為“痰瘀互結(jié)，毒邪內(nèi)生”，因此在治療時(shí)可采用清熱、解毒、降濁、通腑法[7]。蕁芍血脈平膠囊中赤芍可“通順血脈，緩中，散惡血，逐賊血”（《別錄》）；姜黃行氣破瘀，通經(jīng)止痛；桂枝“利關(guān)節(jié)，溫經(jīng)通脈”（《本草疏證》）；沒藥則散血消腫，定痛生?。ā侗静菥V目》）。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，赤芍有較強(qiáng)的抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用；姜黃可以抑制炎癥反應(yīng)，降低機(jī)體血脂含量；沒藥有降血脂和分解脂肪作用，并可抑制肝勻漿膽固醇的合成[8-9]。此外，蕁芍血脈平膠囊中尚含部分新疆特色的民族藥，氣味芳香，實(shí)驗(yàn)證明可以行氣活血、散結(jié)止痛、祛風(fēng)除濕，還具有抗炎消腫、緩解患者疼痛等功效。

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編輯：吳寧

R543.505文獻(xiàn)識(shí)別碼A

1672-397X（2014）09-0077-02

1 實(shí)驗(yàn)材料

江蘇省高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科項(xiàng)目（中西醫(yī)結(jié)合）（J1006）

聶超（1978-），男，碩士研究生，講師，主要從事藥理學(xué)研究。

朱萱萱，zhuxuanxuan@sina.com

2014-03-25

動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，As）是動(dòng)脈硬化的血管病中常見的一種，其特點(diǎn)是受累動(dòng)脈病變從內(nèi)膜開始，一般先有脂質(zhì)和復(fù)合糖類積聚、出血及血栓形成，纖維組織增生及鈣質(zhì)沉著，并有動(dòng)脈中層的逐漸蛻變和鈣化，病變常累及彈性及大中等肌性動(dòng)脈，一旦發(fā)展到足以阻塞動(dòng)脈腔，則該動(dòng)脈所供應(yīng)的組織或器官將缺血或壞死。研究表明，動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，在其發(fā)生發(fā)展的各階段中，均有不同程度的炎癥反應(yīng)發(fā)生，炎癥性細(xì)胞因子在此過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用[1]。因此，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察蕁芍血脈平膠囊對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊模型家兔炎性因子的影響，研究其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。

1.1 動(dòng)物健康雄性家兔，體重2.0～2.5kg，由南京江寧區(qū)青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)場(chǎng)提供，合格證號(hào)：SCXK（蘇）2012-0008。