林青 樊衛(wèi)飛 王峻

（江蘇省老年醫(yī)院，江蘇南京 210024）

丹芪六君顆粒對荷瘤小鼠化療后胃腸道不良反應(yīng)影響的實驗研究

林青 樊衛(wèi)飛 王峻

（江蘇省老年醫(yī)院，江蘇南京 210024）

目的：探討丹芪六君復(fù)方顆粒對荷瘤鼠化學(xué)藥物治療后胃腸道不良反應(yīng)的影響。方法：小鼠隨機分為正常組、模型組、奧美拉唑鈉組和丹芪六君顆粒高、低劑量組，除正常組外其余各組小鼠均接種腫瘤細(xì)胞并予順鉑腹腔注射，各組分別用藥14d。觀察用藥前后各組小鼠的體重、進(jìn)食量、瘤重，統(tǒng)計抑瘤率。結(jié)果：丹芪六君顆粒高劑量組能夠顯著提高化療小鼠的體重；丹芪六君顆粒高、低劑量組均可以明顯提高化療小鼠的進(jìn)食量，降低瘤重；丹芪六君顆粒高、低劑量組小鼠瘤重顯著低于奧美拉唑鈉組；丹芪六君顆粒高劑量組抑瘤率顯著高于奧美拉唑鈉組。結(jié)論：丹芪六君顆粒能顯著緩解荷瘤小鼠化療后胃腸道不良反應(yīng)，增加體重，增加進(jìn)食量，抑制瘤塊生長速度。

荷瘤小鼠 化療 胃腸道反應(yīng) 丹芪六君顆粒

化療是治療中晚期惡性腫瘤的常用方法，單純化療往往引起較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，其中最為常見的是胃腸道的不良反應(yīng)，出現(xiàn)惡心嘔吐、食欲減退、腹脹脘滿、大便不調(diào)等癥狀，進(jìn)一步導(dǎo)致體重下降，形體消瘦，生活質(zhì)量減退，不能進(jìn)一步耐受治療等。丹芪六君顆粒是在古方六君子湯基礎(chǔ)上加紫丹參、黃芪而成。古方主治脾胃氣虛兼有痰濕阻絡(luò)，癥見惡心嘔吐、胸脘痞悶、四肢無力、大便不調(diào)等，其所治療諸癥恰恰為化療中常見。本研究在古方基礎(chǔ)上加用丹參、黃芪，取其活血化瘀、益氣扶正之用，通過建立荷瘤小鼠模型，進(jìn)一步探討丹芪六君顆粒對化療后荷瘤小鼠胃腸道反應(yīng)、體重、瘤重及存活情況的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物清潔級昆明小鼠50只，雄性，體重（20±2）g，購自上海伊萊克斯實驗動物中心。

1.2 瘤株腹水型S180瘤株、L929細(xì)胞株由江蘇省腫瘤醫(yī)院中心實驗室提供。

1.3 藥品及試劑注射用奧美拉唑鈉（阿斯利康制藥有限公司，規(guī)格：40mg/支，批號：H20030945）；丹芪六君顆粒主要由丹參顆粒、黃芪顆粒、黨參顆粒、白術(shù)顆粒、茯苓顆粒、甘草顆粒、陳皮顆粒、半夏顆粒組成，劑量比為2∶2∶1∶1∶1∶0.5∶1∶1，顆粒劑購自江陰天江藥業(yè)有限公司；注射用順鉑粉針劑（齊魯制藥有限公司，規(guī)格：20mg/支，批號：H37021357）。

2 實驗方法

2.1 分組與造模[1]將小鼠隨機分為5組，每組10只，分別為：正常組、模型組、丹芪六君顆粒高劑量組、丹芪六君顆粒低劑量組、奧美拉唑鈉組。除正常組外其余各組大鼠均接種腫瘤細(xì)胞并化療。

無菌條件下抽取傳代第8天的S180小鼠的腹水，按1∶3比例用生理鹽水稀釋，反復(fù)沖打，充分混勻，在顯微鏡下計數(shù)，用生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/mL，取0.2mL（含瘤細(xì)胞數(shù)2×106個）于每鼠右側(cè)腋窩下碘酊消毒后皮下接種。瘤株接種前，均用0.2%臺盼藍(lán)染色，計算活細(xì)胞數(shù)為95%～98%。從抽取腹水時開始，到移植完最后一只小鼠的總時間控制在60min內(nèi)。小鼠接種癌瘤株第10天，用生理鹽水將20mg順鉑稀釋成0.25mg/mL順鉑注射液，小鼠腹腔注射0.2mL/只，連續(xù)注射5d。

2.2 給藥正常組：不給藥；模型組：生理鹽水0.4mL/（kg·d）灌胃。根據(jù)人與小鼠藥物等效劑量（按體表面積換算）的2.5倍和10倍決定中藥顆粒組的給藥劑量。丹芪六君顆粒高劑量組：丹芪六君顆粒16g/（kg·d）灌胃；丹芪六君顆粒低劑量組：丹芪六君顆粒4g/（kg·d）灌胃；奧美拉唑鈉組：奧美拉唑鈉75mg/（kg·d）灌胃。

各組小鼠灌胃容積均為0.02mL/g，1次/d，連續(xù)14d。均于瘤細(xì)胞接種后第2天開始用藥，末次給藥24h后斷頸處死小鼠，稱取重量，剝?nèi)×鰤K以檢測相關(guān)指標(biāo)。

2.3 觀察指標(biāo)（1）小鼠用藥前后一般情況及體重、進(jìn)食量變化；（2）瘤塊的重量，計算抑瘤率[2]：抑瘤率（%）=（模型組瘤重-給藥組瘤重）/模型組瘤重×100%。

3 實驗結(jié)果

3.1 一般情況比較與正常組小鼠比較，其余各組小鼠均逐漸出現(xiàn)進(jìn)食量減少，體重減輕，毛發(fā)稀疏，運動遲緩等現(xiàn)象，以丹芪六君顆粒高劑量組最輕，丹芪六君顆粒低劑量組表現(xiàn)次之，奧美拉唑鈉組表現(xiàn)介于中間，模型組表現(xiàn)最差。

3.2 各組小鼠用藥前后體重的比較用藥前各組小鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。用藥14d后，正常組與丹芪六君顆粒高劑量組小鼠體重與用藥前比較顯著增高（P＜0.01），其他組體重變化不顯著。用藥后，與模型組、奧美拉唑鈉組比較，正常組和丹芪六君顆粒高、低劑量組小鼠體重顯著增加（P＜0.01）。丹芪六君顆粒高劑量組小鼠體重顯著高于低劑量組（P＜0.01）。見表1。

表1 各組小鼠用藥前后平均體重的變化（±s）

表1 各組小鼠用藥前后平均體重的變化（±s）

注：與本組用藥前比較，**P＜0.01；與模型組用藥后比較，▲▲P＜0.01；與奧美拉唑鈉組用藥后比較，△△P＜0.01；與丹芪六君顆粒低劑量組用藥后比較，##P＜0.01。

組別動物數(shù)（只）體重（g）用藥后17.63±2.5丹芪六君顆粒高劑量組1019.45±1.727.26±3.1**▲▲△△##丹芪六君顆粒低劑量組1019.10±2.319.82±2.2▲▲△△奧美拉唑鈉組1017.84±2.716.95±2.1用藥前正常組917.42±2.428.13±2.5**▲▲△△模型組1016.52±2.6

3.3 用藥后各組小鼠進(jìn)食量、瘤重的變化及各組抑瘤率比較

與模型組比較，正常組和丹芪六君顆粒高、低劑量組小鼠進(jìn)食量顯著增加（P＜0.01）；與奧美拉唑鈉組比較，丹芪六君顆粒高劑量組進(jìn)食量顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，丹芪六君顆粒高、低劑量組和奧美拉唑鈉組小鼠瘤重顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）；與奧美拉唑鈉組比較，丹芪六君顆粒高、低劑量組小鼠瘤重顯著降低（P＜0.05）。丹芪六君顆粒和奧美拉唑納都有抑制腫瘤生長的作用，丹芪六君顆粒高劑量組抑瘤率明顯高于奧美拉唑鈉組（P＜0.05）。見表2。

表2 用藥后各組小鼠進(jìn)食量、瘤重、抑瘤率的比較

4 討論

化療是腫瘤的主要治法之一，針對惡性腫瘤細(xì)胞無限增殖、分化異常的特點，化療藥物可起到“細(xì)胞毒”和“促進(jìn)分化”等作用，達(dá)到殺死癌細(xì)胞、抑制癌細(xì)胞生長繁殖和促進(jìn)癌細(xì)胞分化之目的。但正常的組織細(xì)胞也遭到不同程度的損害，尤其是生長活躍的胃腸道黏膜上皮細(xì)胞，從而出現(xiàn)嚴(yán)重的消化道反應(yīng)，如惡心嘔吐、口腔炎、食欲減退、腹部不適及便秘等，加劇了患者化療后的損傷，阻礙了臨床進(jìn)一步化療的可能。

國外研究早已發(fā)現(xiàn)質(zhì)子泵抑制劑（PPIs）對多種人惡性腫瘤細(xì)胞株具有化療增敏作用，并能選擇性地誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，對正常細(xì)胞則無明顯影響[3]。Yeo等[4]發(fā)現(xiàn)泮托拉唑可選擇性地誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，對正常胃黏膜細(xì)胞則無作用，瘤內(nèi)注射泮托拉唑的裸小鼠，腫瘤體積顯著小于對照組，并可見大規(guī)模腫瘤細(xì)胞凋亡。沈永華等[5]實驗發(fā)現(xiàn)給予奧美拉唑或泮托拉唑灌胃的荷瘤裸小鼠，血清TNF-α和IL-6水平顯著低于癌性惡病質(zhì)組，體質(zhì)量和攝食、飲水量亦有不同程度的改善。所以，本研究選擇質(zhì)子泵抑制劑奧美拉唑作為西藥對照組進(jìn)行對照。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為化療藥物多為苦寒之品，易損及脾胃，而脾胃乃后天之本，氣血生化之源，人體的生長發(fā)育都有賴于脾胃所運化的水谷精微的滋養(yǎng)。脾氣不足，則運化失司，水濕內(nèi)停，痰濁內(nèi)生，精氣不升，濁氣不降，日久痰瘀阻絡(luò)發(fā)生毒副反應(yīng)。減輕化療后胃腸道不良反應(yīng)的研究已成為臨床化學(xué)藥物治療研究的熱點，在各種方法中，中醫(yī)藥復(fù)方制劑已經(jīng)日益受到人們的重視。本研究選方是在古方六君子湯基礎(chǔ)上加紫丹參、黃芪而成[6]，功能以健脾化濕、化瘀通絡(luò)、益氣扶正為主。

現(xiàn)代藥理分析發(fā)現(xiàn)，丹參主要成分為丹參酮，能增強巨噬細(xì)胞的吞噬功能，具有抗炎作用，能調(diào)節(jié)蛋白代謝和免疫功能，可抗凝、改善血液黏稠性；黃芪的主要成分為黃芪皂苷、黃芪多糖等，具有擴(kuò)張血管，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，改善微循環(huán)的作用，還具有較好的促進(jìn)血管生成的作用[7-8]；黨參含菊糖，能直接促進(jìn)特異性免疫淋巴細(xì)胞的分化、增殖，提高非特異免疫的NK細(xì)胞活性，增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高機體的免疫能力；白術(shù)對化療導(dǎo)致的白細(xì)胞降低有明顯提升作用；茯苓內(nèi)含有的茯苓聚糖是提高人體免疫功能的多糖物質(zhì)；半夏有很好的鎮(zhèn)吐作用。

本研究結(jié)果表明，奧美拉唑鈉并沒有顯著改善化療小鼠的進(jìn)食量，從而也就不能夠增加化療小鼠的體重。無論低劑量還是高劑量丹芪六君子顆粒均可以提高化療小鼠的進(jìn)食量，但低劑量丹芪六君子顆粒沒有增加小鼠的體重，而高劑量丹芪六君子顆粒能夠顯著提高化療小鼠的體重，與正常小鼠間無顯著性差異。奧美拉唑鈉和丹芪六君子顆粒均對化療有輔助作用，3組的瘤重均顯著低于模型組，3組的抑瘤率均顯著高于模型組，而其中丹芪六君子顆粒的這種輔助作用更強，且與劑量有依賴性。

綜上，丹芪六君顆粒能明顯改善化療后小鼠的全身狀況，減輕胃腸道反應(yīng)，在一定程度上促進(jìn)進(jìn)食量，增加體重，改善生存質(zhì)量，抑制腫瘤生長率。本研究所用丹芪六君子顆粒按照常規(guī)臨床經(jīng)驗配方混合，配方比例是否為最佳以及在延長生存期方面的作用機制還有待進(jìn)一步研究。

[1]張宏方，馬居里，郭蘭生，等.中藥調(diào)衡方對S180荷瘤小鼠抗腫瘤的實驗研究.陜西中醫(yī)，2005，26（1）：85

[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué).2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：777

[3]Luciani F，Spada M，De Milito A，et al.Effect of proton pump inhibitor pretreatment on resistance of solid tumors to cytotoxic drugs.J Nail Cancer Inst，2004，96（22）：1702

[4]Yeo M，Kim DK，Kim YB，et al.Selective induction of apoptosis with proton pump inhibitor in gastric cancer cells.Clin Cancer Res，2004，10（24）：8687

[5]沈永華，陳敏，沈衛(wèi)東，等.質(zhì)子泵抑制劑對SGC-7901胃腺癌裸小鼠癌性惡病質(zhì)的作用.胃腸病學(xué)，2011，16（1）：11

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R73-354文獻(xiàn)識別碼A

1672-397X（2014）03-0078-03

林青（1982-），女，醫(yī)學(xué)碩士，住院醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)內(nèi)科學(xué)基礎(chǔ)與臨床（風(fēng)濕免疫方向）。

樊衛(wèi)飛，fwfei1974@qq.com

2013-10-31

編輯：吳寧

2011年江蘇省中醫(yī)藥局課題（LB11002）