馬書(shū)杰?chē)?yán)雋陶黃品賢

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院、上海市中醫(yī)藥研究院推拿研究所，上海 200437；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)統(tǒng)計(jì)教研室，上海 201203）

推拿手法防治失神經(jīng)骨骼肌萎縮的實(shí)驗(yàn)研究

馬書(shū)杰1嚴(yán)雋陶1黃品賢2

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院、上海市中醫(yī)藥研究院推拿研究所，上海 200437；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)統(tǒng)計(jì)教研室，上海 201203）

目的：探討推拿手法對(duì)延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮的作用及途徑。方法：六月齡新西蘭家兔84只，切斷右下肢脛神經(jīng)后隨機(jī)分為失神經(jīng)手法治療組（手法組）42只、失神經(jīng)模型對(duì)照組（模型組）42只。手法組給予按揉法治療，模型組不予手法干預(yù)。分別在造模后第1、2、3周和第1、2、4、6個(gè)月時(shí)間點(diǎn)每組各取6只家兔檢測(cè)腓腸肌肌濕重、收縮力及衛(wèi)星細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果：造模后2周起手法組家兔腓腸肌收縮力明顯高于模型組；造模后2月起手法組家兔腓腸肌肌濕重明顯高于模型組；腓腸肌失神經(jīng)后4周內(nèi)，手法組肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖趨勢(shì)高于模型組，而4周以后，手法則不再起作用。結(jié)論：推拿手法在一定程度上可延緩失神經(jīng)后骨骼肌萎縮，手法促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖與分化是手法減緩肌萎縮的可能途徑之一。

骨骼肌萎縮 失神經(jīng) 肌衛(wèi)星細(xì)胞 推拿手法

骨骼肌損傷是臨床常見(jiàn)的一大類疾患，在臨床實(shí)際中，骨骼肌急性損傷往往同時(shí)伴有神經(jīng)損傷，由于治療手段應(yīng)用不當(dāng)或是治療不及時(shí)徹底，常常導(dǎo)致肌肉萎縮和再損傷。研究骨骼肌急性損傷的修復(fù)方式以及促進(jìn)修復(fù)的手段，已成為國(guó)際運(yùn)動(dòng)、醫(yī)學(xué)界的研究熱點(diǎn)，包括手法治療的物理治療是目前治療骨骼肌損傷的有效手段。我們對(duì)手法在防治骨骼肌失神經(jīng)萎縮中的作用及其機(jī)制進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭家兔，6月齡，雄性，體重（2.21±0.15）kg，由上海海軍研究院動(dòng)物房提供。單籠，自由飲水，20℃恒溫環(huán)境飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑及儀器3%戊巴比妥鈉（上海西唐生物科技有限公司提供，批號(hào)：20110112）；蘇木精、伊紅染色劑；YF-3手法測(cè)試儀（由上海中醫(yī)藥大學(xué)和復(fù)旦大學(xué)共同研發(fā)）；Powerlab/16型多道生理記錄儀（澳大利亞ADInstruments公司產(chǎn)品）；Dual BIO Amp/Stimulator隔離電刺激儀（澳大利亞ADInstruments公司產(chǎn)品）；光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS CH）；圖像分析系統(tǒng)（OLYMPUS BX50）；電子天平（上海天平儀器廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物造模骨骼肌失神經(jīng)動(dòng)物模型：每只家兔均行下肢脛神經(jīng)切斷術(shù)，造成失神經(jīng)模型。3%戊巴比妥鈉溶液，1.5mL/kg體重，家兔腹腔緩慢注射麻醉，麻醉成功后右下肢剃毛，暴露腘窩及大腿后部，將家兔固定在動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，局部消毒，做膝上股后外側(cè)切口，于腘窩解剖后暴露脛神經(jīng)，鈍性分離出家兔右側(cè)脛神經(jīng)，切斷脛神經(jīng)干，并將近端游離斷端向上折返縫入股二頭肌肌膜上，阻止神經(jīng)間自然生長(zhǎng)，左下肢不做任何處理。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組計(jì)算機(jī)隨機(jī)將造模成功的家兔分為2組：失神經(jīng)手法組（手法組）42只，失神經(jīng)模型對(duì)照組（模型組）42只。

2.3 干預(yù)手段手法組大鼠造模成功后予按揉法干預(yù)[1]，干預(yù)手法的輕重及頻率通過(guò)YF-3手法測(cè)試儀標(biāo)定，由專人經(jīng)訓(xùn)練，在實(shí)驗(yàn)家兔右下肢后側(cè)腓腸肌肌腹操作。按揉法參數(shù)設(shè)為：壓力2kgf、頻率140次/min，每日1次，每次治療時(shí)間為15min。模型組不作手法干預(yù)。

2.4 檢驗(yàn)指標(biāo)各組在造模后第1、2、3周和第1、2、4、6個(gè)月各取6只家兔行以下指標(biāo)檢測(cè)：腓腸肌收縮力、腓腸肌肌濕重、衛(wèi)星細(xì)胞切片光鏡PCNA染色半定量計(jì)數(shù)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)的分析與處理采用SPSS18.0軟件包，數(shù)據(jù)用±s）表示。組間采用2×7析因設(shè)計(jì)方差分析方法行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)以P＜0.05被認(rèn)為所檢驗(yàn)的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.12 組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌收縮力比較見(jiàn)表1、表2、圖1。在造模后第2、3周以及第1、2、4和6月時(shí)間點(diǎn)，手法組家兔腓腸肌收縮力明顯高于模型組（P＜0.01）。雖然失神經(jīng)后腓腸肌收縮力總體呈下降趨勢(shì)，但是自第2周至第2個(gè)月，手法組家兔腓腸肌收縮力下降平緩，略低于第1周，說(shuō)明手法能維持、減緩急性失神經(jīng)損傷后的腓腸肌收縮力的降低，但是2個(gè)月之后，2組腓腸肌收縮力出現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)，但手法組仍明顯高于模型組，可見(jiàn)手法對(duì)于骨骼肌急性失神經(jīng)后減緩腓腸肌收縮力下降有很大作用。

3.22 組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌肌濕重比較結(jié)果見(jiàn)表3、表4、圖2。由趨勢(shì)圖走勢(shì)可見(jiàn)腓腸肌肌濕重比重總體呈下降趨勢(shì)，于造模后2周開(kāi)始，手法組肌濕重比重高于模型組，造模2個(gè)月后，2組肌濕重比重走勢(shì)均較平穩(wěn)，手法組明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明手法可以減緩腓腸肌肌濕重比重下降幅度與程度，但無(wú)神經(jīng)再支配情況下仍不能阻止腓腸肌萎縮的趨勢(shì)。

表1 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌收縮力比較（±s）g

表1 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌收縮力比較（±s）g

組別動(dòng)物數(shù)（只）統(tǒng)計(jì)量不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌收縮力1周2周3周1月2月4月6月手法組6x模型組6s0.320.270.310.150.27 0.150.26 sx 4.223.83 0.160.11 4.223.06 3.693.703.602.582.13 0.110.140.120.220.24 2.822.772.691.931.52相同時(shí)間點(diǎn)組間比較F0.65125.97223.67424.64519.15526.25318.200 P0.4460.0010.0020.0020.0030.0010.004

表2 腓腸肌收縮力指標(biāo)2×7析因設(shè)計(jì)方差分析結(jié)果

圖1 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌收縮力的變化

表3 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)肌濕重比重比較（±s）

表3 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)肌濕重比重比較（±s）

組別動(dòng)物數(shù)（只）統(tǒng)計(jì)量不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌濕重比重1周2周3周1月2月4月6月手法組6x模型組6s0.0610.0360.0620.1010.048 0.0500.040相同時(shí)間點(diǎn)組間比較F0.3790.0311.3720.32323.1120.4126.530 P0.5580.8650.2800.5880.0020.5410.038 sx 0.9080.584 0.1170.060 0.8520.593 0.5820.4860.5770.5750.559 0.1630.0460.0300.1100.083 0.5200.4670.4710.4530.446

表4 肌濕重比重指標(biāo)2×7析因設(shè)計(jì)方差分析結(jié)果

圖2 手法組與對(duì)照組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)肌濕重比重變化

3.32 組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌衛(wèi)星細(xì)胞計(jì)數(shù)比較見(jiàn)表5、表6、圖3。手法組與模型組家兔腓腸肌肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目在造模后第3周時(shí)達(dá)到高峰，且手法組肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目在前3周均高于模型組。而在造模后第1、2、4和6月時(shí)，手法組肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目低于模型組。在第3周到第1個(gè)月，手法組與模型組肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目都出現(xiàn)驟降，且手法組下降幅度超過(guò)模型組，第1個(gè)月時(shí)其數(shù)目低于模型組。到第2、4個(gè)月時(shí)2組肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目中位數(shù)仍繼續(xù)下降，手法組明顯低于模型組，肌衛(wèi)星細(xì)胞有耗竭趨勢(shì)。在第6個(gè)月時(shí)2組家兔肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目中位數(shù)為最低。模型組在前3周肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)增長(zhǎng)速度明顯低于手法組，說(shuō)明手法干預(yù)在失神經(jīng)前3周內(nèi)可以明顯提高肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目。而到第6個(gè)月時(shí)2組肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目基本持平且都降至最低，可見(jiàn)如果不能早期恢復(fù)神經(jīng)支配，手法到后期也不能阻止肌衛(wèi)星細(xì)胞耗竭。上述結(jié)果說(shuō)明兩個(gè)問(wèn)題：一是肌衛(wèi)星細(xì)胞總數(shù)一定，手法治療可以促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞早期快速增殖，但不能增加肌衛(wèi)星細(xì)胞的數(shù)量，所以會(huì)很快耗盡肌衛(wèi)星細(xì)胞，反而造成后期快速下降，并低于模型組；二是早期失神經(jīng)后手法治療可以起到促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖、延緩骨骼肌萎縮的作用。

4 討論

骨骼肌萎縮的防治已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，肌衛(wèi)星細(xì)胞是骨骼肌再生修復(fù)的關(guān)鍵因素[2]。肌衛(wèi)星細(xì)胞是一種具有增殖和自我更新能力的成肌干細(xì)胞，主要位于骨骼肌運(yùn)動(dòng)終板附近的肌膜與基膜間，在骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)和再生時(shí)，提供肌細(xì)胞核。通常情況下，肌衛(wèi)星細(xì)胞處于未激活的靜止?fàn)顟B(tài)，當(dāng)肌細(xì)胞受傷時(shí)，衛(wèi)星細(xì)胞即被激活并移行到肌纖維附近，形成大范圍的增殖與分化[3]。本實(shí)驗(yàn)制成家兔骨骼肌失神經(jīng)支配模型，在失神經(jīng)后4周內(nèi)，手法組家兔骨骼肌收縮力及骨骼肌濕重比均比模型組下降趨勢(shì)緩慢，說(shuō)明推拿手法有一定減緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮的作用；但到第4周以后，手法的作用明顯減弱或者消失，其原因可能與失神經(jīng)后營(yíng)養(yǎng)中斷，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等不能得以補(bǔ)充，再加上本身的消耗，以及骨骼肌運(yùn)動(dòng)終板退化有關(guān)。而肌衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)推拿手法治療后在失神經(jīng)第1周即開(kāi)始增殖，一直持續(xù)到第3周，其數(shù)量都明顯高于模型組，但是從第1個(gè)月開(kāi)始其增殖速度明顯下降，且下降速度快于模型組，肌衛(wèi)星細(xì)胞的數(shù)量也低于對(duì)照組。這說(shuō)明手法在治療早期加快了失神經(jīng)后骨骼肌的肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度，也很有可能加速了肌衛(wèi)星細(xì)胞向成肌纖維的肌組織轉(zhuǎn)化，而這與骨骼肌收縮力及肌濕重的變化趨勢(shì)緩慢相吻合。所以，促進(jìn)肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖與分化，是手法防治骨骼肌萎縮的可能途徑之一，如果聯(lián)合現(xiàn)代康復(fù)醫(yī)學(xué)的被動(dòng)訓(xùn)練法，在治療神經(jīng)不完全受損肌萎縮的早期應(yīng)用方面應(yīng)當(dāng)有十分積極的意義，而手法防治骨骼肌萎縮的分子細(xì)胞機(jī)制還有待深入研究。

表5 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)腓腸肌肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)比較個(gè)

表6 失神經(jīng)損傷后不同療法肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)指標(biāo)2×7析因設(shè)計(jì)方差分析結(jié)果

圖3 手法組與模型組家兔造模后不同時(shí)間點(diǎn)肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)目變化

[1]《中醫(yī)學(xué)》編輯委員會(huì).中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)·中醫(yī)學(xué).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1997：856

[2]SchwartingS，SchroderM，StennertE，etal．Morphologyof denervated human facial muscles．ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec，1984，46（5）：248

[3]JunHu，XilinZhang，JuntaoYan.EffectsofMassageon Satellite Cells of Acute Contusive Skeletal Muscles.Journal of Acupuncture and Tuina Science，2007，2（5）：6

R685.05

A

1672-397X（2014）11-0079-03

馬書(shū)杰（1986-），女，博士研究生，研究方向：推拿的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用。

嚴(yán)雋陶，doctoryjt@sohu.com

2014-06-17

編輯：吳寧

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30973806）；上海市中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃（海派中醫(yī)流派傳承工程）丁氏推拿項(xiàng)目（ZYSNXD-CC-HPGC-JD-011）；嚴(yán)雋陶全國(guó)名老中醫(yī)藥專家傳承工作室項(xiàng)目