史鵬程，沈洪昇，胡人杰，姚 嬙

（1．天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心，天津 300020；2天津市人民醫(yī)院，天津 300121）

方劑配伍增加中藥方劑活性
——一項(xiàng)來自毒理學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究*

史鵬程1，沈洪昇1，胡人杰1，姚 嬙2

（1．天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心，天津 300020；2天津市人民醫(yī)院，天津 300121）

[目的]比較不同制備方法對(duì)清熱解毒方水煎劑毒性的影響。[方法]清熱解毒方中各味藥材分別制備成不同待測(cè)樣品：合煎樣品、分煎樣品及單味藥給藥樣品，采用簡(jiǎn)化機(jī)率法測(cè)定各樣品對(duì)小鼠灌胃給藥的半數(shù)致死量（LD50），并比較測(cè)定結(jié)果。[結(jié)果]所測(cè)得合煎樣品和分煎樣品的LD50分別為（91．26±7．92）g/kg和（111．47±9．12）g/kg，與合煎樣品比較，分煎樣品的毒性顯著降低（P＜0．05），且動(dòng)物死亡時(shí)間及死前表現(xiàn)不同。單味藥樣品給藥后多未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。[結(jié)論]與單味中藥比較，復(fù)方配伍確能提高中藥的生物活性。

清熱解毒方；合煎；分煎；LD50

中藥是中國(guó)傳統(tǒng)文化的瑰寶，是中醫(yī)學(xué)極其重要的傳承，擁有廣闊的市場(chǎng)前景和極大的社會(huì)價(jià)值。除少數(shù)中藥單味使用外，方劑是中醫(yī)治療疾病的主要用藥形式，也是祖先留給中華民族的重要寶藏[1]。在對(duì)方劑配伍的研究中發(fā)現(xiàn)許多方劑中具有明確生物活性的成分含量會(huì)隨方劑中各藥物的配伍變化而出現(xiàn)明顯的變化，其藥理活性也會(huì)隨之發(fā)生變化[2]。中藥成分復(fù)雜，復(fù)方藥物合煎時(shí)，各化學(xué)成分間可能會(huì)相互影響、相互作用從而導(dǎo)致藥物成分及溶解度、藥效學(xué)、臨床療效等多方面的變化[3]。本實(shí)驗(yàn)室在對(duì)清熱解毒方（白花蛇舌草、半枝蓮、生地、蒲公英、魚腥草）的毒理學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，由此五味中藥組成方劑的水煎劑，動(dòng)物灌胃給藥顯示出相當(dāng)?shù)亩拘?，即能夠測(cè)定出半數(shù)致死量（LD50），這在以往的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐中很少見到。為此，筆者對(duì)其做了進(jìn)一步的探討。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 KM小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量19～21 g，購自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（軍）2009—003。2級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，屏障系統(tǒng)環(huán)境，飼喂普通顆粒飼料。

1.1.2 藥材與處方 清熱解毒方系臨床自擬方，由白花蛇舌草（Oldenlandia diffusa Willd．Roxb．）、半枝蓮（Scutellaria barbata mongdicum D．Don）、生地（Rehmannia glutinasa Libosch．）、蒲公英（Taraxacum Hand．－Mazz．）、魚腥草（Thunb．）組成（比例為3∶3∶2∶1∶2），均為市售藥材。藥材由天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所藥物制劑中心朱永智鑒定，于天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物制備 分別制備3種給藥樣品，合煎樣品：取5種中藥飲片置煎煮容器內(nèi)，加藥材量8倍冷水浸泡過夜，文火煮沸30 min，過濾，濾渣加6倍量水繼續(xù)煎煮，文火煮沸20 min，過濾。合并2次煎出液，于水浴上濃縮至適當(dāng)濃度，得到合煎樣品。分煎樣品：分別取5種中藥飲片置容器內(nèi)，按上述方法單獨(dú)進(jìn)行煎煮，濃縮。將濃縮物按處方中各藥材比例混合，并配制成與合煎藥物相同濃度，得到分煎樣品。單煎樣品：各味藥物單獨(dú)煎制，各自濃縮后得到單煎樣品[4]。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用簡(jiǎn)化機(jī)率法測(cè)定樣品的LD50[5]，依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)給藥劑量，k值取0．8，灌胃給藥，給藥后連續(xù)觀察14 d，記錄死亡情況。

1.3 數(shù)據(jù)處理 急性毒性實(shí)驗(yàn)采用簡(jiǎn)化機(jī)率法計(jì)算，組間比較，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＞0．05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 合煎及分煎樣品急性毒性實(shí)驗(yàn) 按1．2．所述方法制備樣品并給藥，給藥后觀察并記錄動(dòng)物死亡情況（表1），分別計(jì)算合煎樣品及分煎樣品LD50。兩組的LD50分別為（91．26±7．92）、（111．47±9．12）g/kg，合煎樣品的毒性明顯高于分煎樣品的毒性（P＜0．05）。

表1 合煎樣品及分煎樣品急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The results of acute toxicity test of mixed-decoction and single-decoction

其中接受合煎樣品死亡的動(dòng)物，大多死亡于給藥后2 h，個(gè)別動(dòng)物死亡時(shí)間稍晚，但死亡時(shí)間不超過給藥后4 h。其中132．00 g/kg劑量組（最高給藥劑量組）動(dòng)物給藥后2 h內(nèi)死亡10只（其中多在15 min內(nèi)死亡），4 h后其余兩只先后死亡。死亡迅速（15 min內(nèi)）的動(dòng)物死前均表現(xiàn)出跳躍、抽搐等神經(jīng)興奮癥狀。死亡延遲的動(dòng)物（主要為給藥劑量較低者）則主要表現(xiàn)出安靜少動(dòng)、反應(yīng)遲鈍、行動(dòng)遲緩等神經(jīng)功能抑制的表現(xiàn)。而且，表現(xiàn)為神經(jīng)興奮度增高的動(dòng)物百分之百死亡，表現(xiàn)為神經(jīng)興奮度減低的動(dòng)物部分死亡，部分可以存活，存活的動(dòng)物給藥后24～48 h恢復(fù)常態(tài)。接受分煎樣品死亡的動(dòng)物與接受合煎樣品的動(dòng)物相比較，動(dòng)物死亡前僅表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)抑制癥狀，未見出現(xiàn)相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)興奮性表現(xiàn)，且動(dòng)物死亡速度亦較合煎樣品給藥組稍緩，142．47 g/kg劑量組給藥后2 h內(nèi)動(dòng)物死亡10只（大多死于給藥后30 min左右），4 h后死亡1只，另外一只則一直存活到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的小鼠部分死亡、部分可存活，且在給藥后8 h可恢復(fù)常態(tài)。另外發(fā)現(xiàn)，91．18 g/kg劑量組中1只存活的雌性小鼠在接受給藥后1．5 h出現(xiàn)一過性腹瀉，其余動(dòng)物未見異常表現(xiàn)。

2.2 單煎樣品急性毒性實(shí)驗(yàn) 依據(jù)清熱解毒方中5味藥材在方劑中所占比例（3∶3∶2∶1∶2）進(jìn)行拆分，分別按照單味藥物在處方中所占比例劑量（LD50）給藥。給藥后觀察并記錄動(dòng)物的死亡情況，各味藥物給藥劑量及動(dòng)物死亡情況詳見表2。表2顯示給藥后15 min，僅半枝蓮組有1只動(dòng)物死亡，除此之外，其余各給藥組動(dòng)物均全部存活，亦未見任何異常表現(xiàn)。

表2 單味藥急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 The results of acute toxicity test of single-drugdecoction

3 討論

方劑在中醫(yī)藥物治療中具有極其重要的意義，根據(jù)組方內(nèi)的每一味中藥的性味歸經(jīng)及其功效，按照君、臣、佐、使的原則進(jìn)行組方，其最終目的是發(fā)揮組方內(nèi)每一味中藥之間的協(xié)同和相加作用增加藥效，或發(fā)揮拮抗作用降低毒性，即達(dá)到“增效減毒”的治療目的。筆者在對(duì)幾個(gè)治則不同的抗腫瘤方劑進(jìn)行急性毒性的實(shí)驗(yàn)觀察中發(fā)現(xiàn)，其中1個(gè)由性味均屬無毒的中藥組成的方劑，經(jīng)水煎制備后產(chǎn)生了明顯的致死性毒性（相比較其余方劑均未出現(xiàn)明顯的毒性），這一現(xiàn)象確屬少見，為此，筆者對(duì)其做了進(jìn)一步的探討。

該方劑系治則為清熱解毒的臨床自擬方，主要用于證屬濕熱聚毒的腫瘤患者，方中五味中藥性味均屬無毒[6-7]（單味藥物煎劑給藥的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)亦顯示，按照組方劑量給藥，除半枝蓮出現(xiàn)1只動(dòng)物死亡外，其余藥物確實(shí)沒有毒性反應(yīng)）。但將5味中藥組方后水煎樣品（合煎樣品）對(duì)小鼠灌胃給藥顯示出了致死性的毒性LD50=（91．26±7．92）g/kg。將5味藥物單獨(dú)煎制，將單獨(dú)煎制的樣品混勻后再次進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，該分煎混合的給藥樣品（分煎樣品），同樣可以對(duì)小鼠產(chǎn)生致死性毒性，但是與前述煎劑相比較，毒性明顯降低，LD50=（111．47±9．12）g/kg。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩次測(cè)定結(jié)果存在顯著性差異（P＜0．05）。最后，按照分煎樣品的LD50劑量與各味藥物在方劑中所占比重，將5味藥分別單獨(dú)煎制的樣品（單煎樣品）分別給小鼠灌胃，觀察其毒性反應(yīng)，其結(jié)果顯示，除了半枝蓮組出現(xiàn)了1只動(dòng)物死亡外，未見其它動(dòng)物死亡，亦未見異常表現(xiàn)。為什么合煎樣品、分煎樣品、單煎樣品表現(xiàn)出不同的毒性（或生物活性呢）？筆者推測(cè)其原因大致主要來自2個(gè)方面。其一，藥物在煎制過程中其各自所含有的化合物之間產(chǎn)生了某些化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生了新的活性物質(zhì)，或使原活性物質(zhì)的煎出量發(fā)生了變化，最終導(dǎo)致其毒性發(fā)生變化。其二，藥物活性之間的相加或協(xié)同作用。其中，合煎樣品毒性增強(qiáng)的主要原因更可能歸結(jié)于“化學(xué)反應(yīng)”，由于在合煎過程中加熱的條件下，可能對(duì)反應(yīng)起到了催化的作用，從而使得合煎樣品的“化學(xué)反應(yīng)”比分煎樣品更加充分，因此毒性更大。合煎樣品給藥后動(dòng)物死亡前表現(xiàn)出的狀態(tài)與分煎樣品不同，呈現(xiàn)出神經(jīng)興奮性表現(xiàn)，分煎樣品各組別則呈現(xiàn)出靜臥少動(dòng)等神經(jīng)功能抑制的表現(xiàn)。這一現(xiàn)象顯示出合煎樣品及分煎樣品中活性物質(zhì)的含量有所差異或二者中所含的活性物質(zhì)種類不盡相同。此外，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明了該組方的合理性，即組方后增強(qiáng)了藥物的活性，且合煎活性更強(qiáng)。中藥成分復(fù)雜，復(fù)方中藥在不同條件下會(huì)發(fā)生不同的反應(yīng)，使得其各成分含量發(fā)生變化或生成新物質(zhì)，從而影響其藥效和毒性等。其他學(xué)者的研究[8-12]也從不同方面證明了這一現(xiàn)象。文章僅介紹了對(duì)清熱解毒方毒性研究中發(fā)現(xiàn)的一些現(xiàn)象，對(duì)于其發(fā)生的原理和過程以及涉及到的具體物質(zhì)現(xiàn)正在進(jìn)一步研究和探討中。

[1]年 莉,李慧平,王亞萍，等．對(duì)方劑配伍規(guī)律研究的幾點(diǎn)認(rèn)識(shí)[J]．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,32(3):129-131．

[2]胡人杰．中藥方劑配伍的實(shí)驗(yàn)研究[J]．中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2009,27（1):117-119．

[3]鄧軼淵,高文遠(yuǎn),陳海霞，等．中藥復(fù)方合煎與分煎的差異性研究進(jìn)展[J]．中草藥，2005,36（12):1909-1911．

[4]李儀奎．中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]．第2版．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006：119．

[5]徐叔云,卞如濂,陳 修．藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:400-404．

[6]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）[S]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

[7]宋立人,洪 恂,丁緒亮，等．現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典[S]．北京:人民衛(wèi)生出版社,2001．

[8]周思思,馬增春,梁乾德,等．人參附子不同比例配伍對(duì)小鼠急性毒性的影響[J]．天津中醫(yī)藥,2013,30（1):43-46．

[9]吳 嬌,李 進(jìn),陳 濤,等．葛根—石膏藥對(duì)不同配伍比例中有效成分含量變化研究[J]．天津中醫(yī)藥,2013,30(9):557-560．

[10]鐘正靈,梁光義,張麗艷，等．當(dāng)歸六黃湯分煎與合煎樣品中阿魏酸含量的比較[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(6):1291-1292．

[11]崔景朝,趙自明．中藥配方顆粒研究進(jìn)展（II）——中藥單煎與合煎對(duì)比研究概況[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(4):240-245．

[12]李德順,李亞清．定喘湯及其拆方治療哮喘藥理作用實(shí)驗(yàn)研究[J]．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2003,22(1):16-18．

Prescription compatibility can raise activity of Chinese medicine-An experimental research from toxicology

SHI Peng-cheng1，SHEN Hong-sheng1，HU Ren-jie1*，YAO Qiang2
（1.Anti tumor drugs R&D Centre,Tianjin Institute of Medical and Pharmaceutical Science,Tianjin 300020,China;2.Tianjin People's Hospital,Tianjin 300121,China）

[Objective]To compare the effect of toxicity of Qingre Jiedu(clearing heat and detoxification)prescription in different preparation method．[Methods]The drugs contained in Qingre Jiedu prescription were prepared to different samples:single-decoction,mixeddecoction,and single-drug-decoction．The LD50of each sample after intragastric administration was determined in mice by simplified probit method,and the results were compared．[Results]The LD50of mixed-decoction and single-decoction samples were(91．26±7．92)g/kg and（111．47±9．12）g/kg respectively．Compared with the mixed-decoction samples,the toxicity of single-decoction samples was decreased significantly(P＜0．05)．Different death time and different behaviors before death were fund in animals．Single-drug-decoction samples showed no toxic reaction in most animals after administration．[Conclusion]Compared with single-decoction sample and single-drugdecoction sample,compatible prescription has a certain effect of raising the bioactivity of Chinese medicine．

Qingre Jiedu prescription;mixed-decoction;single-decoction;LD50

R223．11

A

1672-1519（2014）09-0567-03

2014-03-25）

（本文編輯：高 杉，張震之）

10．11656/j．issn．1672-1519．2014．09．17

天津市衛(wèi)生局中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合課題項(xiàng)目（07038）。作者簡(jiǎn)介：史鵬程（1986-），男，研究實(shí)習(xí)員，主要從事中藥藥理學(xué)和腫瘤藥理學(xué)研究工作。

胡人杰，E-mail:renjiehu@163．com。