李 琛

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430014)

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HPLC法測(cè)定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量

李 琛

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430014)

目的：建立高效液相色譜測(cè)定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法。方法：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，流動(dòng)相為0.4%醋酸溶液-乙腈，梯度洗脫，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為269nm，柱溫為30℃。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷分別在0.055 1～0.350 2g/L和0.064 2～0.125 1g/L濃度范圍內(nèi)與其峰面積積分呈良好的線性關(guān)系，r分別為0.999 3和0.999 5，加樣回收率分別為98.45%和99.68%。結(jié)論：采取高效液相色譜法測(cè)定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量簡(jiǎn)便可行，專屬性較強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為菊花中有效成分的含量測(cè)定方法，用于其質(zhì)量控制。

菊花；木犀草素；木犀草素-7-O-葡萄糖苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

菊花為菊科植物菊花的干燥頭狀花序，其主要功效為疏風(fēng)、清熱、明目、解毒等，可用于治療頭痛、目赤、眩暈、疔瘡、心胸?zé)嵋约澳[毒等癥[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，菊花可治療冠心病、降血壓、預(yù)防高血脂等，并具有抗病毒、抗菌、抗衰老等諸多藥理活性。中藥材有效成分相對(duì)復(fù)雜，近年研究顯示，菊花含有的木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷具有顯著的降血脂、降血壓以及雙向免疫調(diào)節(jié)作用[2]。因此本研究建立了高效液相色譜測(cè)定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法，以控制菊花藥材的質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1100 系列高效液相色譜儀，包括配套的UV 檢測(cè)器，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器以及柱溫箱；電子天平。

1.2 試劑與藥材

木犀草素對(duì)照品，木犀草素-7-O-葡萄糖苷對(duì)照品，純度均>98.5%；菊花藥材，購(gòu)自5個(gè)不同產(chǎn)地，通過(guò)鑒定證實(shí)為菊科菊屬植物菊的干燥頭狀花序。乙腈為色譜純，醋酸為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為樂百氏純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱，流動(dòng)相為0.4%醋酸溶液-乙腈，梯度洗脫，A相為0.4%醋酸水溶液，B相為乙腈，0～5min時(shí)B相濃度為5%～15%，5～10min時(shí)為15%～25%，10～25min時(shí)為25%～55%。流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為269nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20μL[3]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取木犀草素1.02mg和木犀草素-7-O-葡萄糖苷1.04mg，經(jīng)甲醇溶解后定容至1mL容量瓶中，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)后得到混合對(duì)照品溶液，于4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 供試品溶液制備 菊花藥材經(jīng)充分粉碎后過(guò)60目篩，精密稱取1g菊花粉末，用20mL甲醇溶解，超聲提取1.5h，所得提取液經(jīng)石油醚萃取，萃取液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，得供試品溶液，于4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 線性關(guān)系考察

將對(duì)照品溶液配制成一系列濃度的溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，以色譜峰面積作為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y(木犀草素)=56 923X-1.613，r=0.999 3，木犀草素在0.055 1～0.350 2g/L濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系；Y(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)=57 144X-1.703，r=0.999 5，木犀草素-7-O-葡萄糖苷在0.064 2～0.125 1g/L濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度考察

取同一濃度供試品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，連續(xù)操作6次，計(jì)算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積的RSD值，結(jié)果表明木犀草素峰面積RSD值為0.98%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積RSD值為0.77%，均在允許范圍內(nèi)，表明該方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性考察

取同一批次的菊花藥材，制成供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的峰面積RSD值，結(jié)果表明木犀草素峰面積RSD值為1.01%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積RSD值為1.12%，均在允許范圍內(nèi)，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，分別在配制后0、2、4、6、8、12、16h時(shí)在上述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的峰面積RSD值，結(jié)果表明木犀草素峰面積RSD值為1.22%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積RSD值為1.28%，表明供試品溶液在16h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性，測(cè)定結(jié)果可靠。

2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)

稱取5份已知有效成分含量的菊花樣品，每份1g，分別精密加入一定量的木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷對(duì)照品溶液，制成供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

將5個(gè)不同產(chǎn)地的菊花藥材充分粉碎后過(guò)60目篩，制成供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量詳見表2。

表2 不同產(chǎn)地菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果 (mg/g)

3 討論

菊花屬于藥食同源植物，目前關(guān)于菊花的分類、鑒定、化學(xué)成分、臨床以及藥理研究均較多，其有效成分復(fù)雜，其中木犀草素與木犀草素-7-O-葡萄糖苷為兩種重要成分[4]。為了對(duì)菊花進(jìn)行充分開發(fā)利用，本研究擬建立高效液相色譜測(cè)定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法。本研究對(duì)超聲提取法的提取時(shí)間、提取溶劑以及提取次數(shù)等均進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無(wú)水甲醇一次性超聲提取1h的色譜峰響應(yīng)值最高，且含量也未發(fā)生明顯改變，穩(wěn)定性良好。其后對(duì)流動(dòng)相比例也進(jìn)行了考察，最后確定流動(dòng)相為乙腈-0.4%醋酸水溶液梯度洗脫[5]。

通過(guò)線性關(guān)系、精密度、重現(xiàn)性考察證實(shí)，木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷分別在0.055 1～0.350 2g/L和0.064 2～0.125 1g/L范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，r分別為0.999 3和0.999 5，加樣回收率分別為98.45%和99.68%。該法精密度與重現(xiàn)性良好，加樣回收實(shí)驗(yàn)表明木犀草素與木犀草素-7-O-葡萄糖苷的回收率分別為97.6%和99.8%；穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明菊花供試品溶液在16h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；最后對(duì)5個(gè)不同產(chǎn)地菊花藥材中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地菊花的有效成分含量存在一定差異，說(shuō)明菊花的有效成分含量會(huì)受產(chǎn)地的影響，值得關(guān)注[6-7]。

綜上所述，本研究建立的檢測(cè)方法具有較高的可行性和專屬性，精密度與重現(xiàn)性良好，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可作為菊花藥材質(zhì)量控制的有效手段，為市場(chǎng)藥材流通以及臨床用藥提供了可靠依據(jù)，值得關(guān)注并推廣。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-01-06

李琛(1973-)，女，湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

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