耿滿奎　趙斌　韓龍　岳璽

【摘要】 目的 對量壓法和酶法檢測血清二氧化碳的方法學(xué)進(jìn)行比較， 分析兩種方法測定血清二氧化碳有無顯著性差異。方法 依據(jù)美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）制定的有關(guān)文件， 用量壓法與酶法分別測定血清二氧化碳100例， 運(yùn)用兩種方法檢測血清二氧化碳的濃度， 計算相關(guān)系數(shù)r和線性回歸方程， 并驗(yàn)證兩種方法的可比性、精密度和線性關(guān)系。結(jié)果 量壓法和酶法相關(guān)性比較的回歸方程為Y=0.8149X+4.7625， 相關(guān)系數(shù)r=0.9133 ， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）； 量壓法測定血清中的二氧化碳濃度為（22.68±2.03） mmol/L， 酶法為（23.24±1.81） mmol/L， 說明量壓法與酶法測定血清CO2濃度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.001）；兩種方法的批內(nèi)和批間精密度均<5%。結(jié)論 量壓法與酶法測定血清中CO2的相關(guān)性、線性和精密度均較好， 測定結(jié)果具有可比性， 可以為臨床所接受。

【關(guān)鍵詞】 二氧化碳；量壓法；酶法

二氧化碳是判斷人體酸堿平衡的重要項(xiàng)目， 也是常用的急診項(xiàng)目。陜西省西安市高陵縣中醫(yī)醫(yī)院測定二氧化碳有兩種儀器， 分別是江蘇南京勞拉的FAITH-4060型分立式全自動生化分析儀和廣東梅州康立的AFT-601D型電解質(zhì)分析儀。生化分析儀主要采用酶法， 用于大批量的標(biāo)本測定， 而AFT-601D型電解質(zhì)分析儀則采用量壓法， 主要用于急診檢驗(yàn)。由此產(chǎn)生一個問題， 即同一患者標(biāo)本在兩臺機(jī)器上測定的結(jié)果有無顯著差異， 對臨床的診斷有無影響， 為給臨床提供客觀準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果， 作者依據(jù)有關(guān)文件對兩種方法進(jìn)行比對。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本 本院隨機(jī)選擇門診及住院患者共計100例， 標(biāo)本采集均采用真空負(fù)壓針頭和真空負(fù)壓促凝管， 由專業(yè)醫(yī)護(hù)人員嚴(yán)格按照靜脈采血有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行采集，并經(jīng)3000 r/min離心10 min分離而成。

1. 2 儀器：江蘇南京勞拉FAITH-4060型分立式全自動生化分析儀。廣東梅州康立AFT-601D型電解質(zhì)分析儀。

1. 3 試劑

1. 3. 1 分立式全自動生化分析儀所用試劑由浙江東甌公司提供， 酶法， 試劑批號：2013070031， 校準(zhǔn)品為上海長征的臨床化學(xué)校準(zhǔn)血清， 校準(zhǔn)品批號：822UN。

1. 3. 2 電解質(zhì)分析儀采用原廠配套的二氧化碳試劑包和標(biāo)準(zhǔn)液， 試劑批號：1303002， 標(biāo)準(zhǔn)品批號：1302001。

1. 3. 3 朗道質(zhì)控品批號：620UE（水平III）。

1. 4 測定方法 每天隨機(jī)選取10份門診或住院患者新鮮血清， 該標(biāo)本必須符合：無溶血， 無黃疸， 非乳糜血。測試順序第一遍為1～10， 第二遍為10～1， 連續(xù)測定10 d， 共計100例。酶法每天用上海長征的臨床化學(xué)校準(zhǔn)血清定標(biāo)后進(jìn)行測試， 量壓法則用廣東梅州康立的二氧化碳標(biāo)準(zhǔn)液和配套試劑包進(jìn)行定標(biāo)和測定。兩種方法均使用上海長征的臨床化學(xué)質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、直線回歸和相關(guān)分析。

2 數(shù)據(jù)處理

2. 1 離群點(diǎn)檢查 見表1。

以量壓法結(jié)果為X ， 酶法結(jié)果為Y ， 計算每份樣本兩種方法測定結(jié)果的均值（Xi和Yi）樣本重復(fù)測定值差值的絕對值（DXi和 DYi）及均數(shù)， 兩種方法測定均值間差值的絕對值（Yi-Xi）及均數(shù)， 超出上述均數(shù)4倍的值作為離群點(diǎn)予以刪除。

經(jīng)檢查， 無超出控制限的測定點(diǎn)， 無離群點(diǎn)產(chǎn)生， 可繼續(xù)進(jìn)行相關(guān)分析。

2. 2 線性相關(guān)分析 以量壓法測定的CO2濃度為X軸， 酶法CO2濃度測定值為Y軸繪制散點(diǎn)圖（見圖1） ， 得線性回歸方程為Y=0.8149X+4.7625， 相關(guān)系數(shù)r=0.9133， 經(jīng)t檢驗(yàn)得：tr=22.20， tr>t0.001（98）。所以 P<0.001， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義， 說明量壓法與酶法測定值之間存在顯著相關(guān)關(guān)系。

2. 3 線性回歸的方差分析 對線性回歸方程為Y=0.8149X+ 4.7625進(jìn)行方差分析， 得F=55.98， F>F0.001（1，98），所以P<0.001， 故量壓法與酶法兩種測定方法之間存在明顯線性回歸關(guān)系。見表2。

2. 4 量壓法與酶法測定血清CO2濃度的比較 見表3。

結(jié)過配對t檢驗(yàn)， 得統(tǒng)計量t=-6.8188， t0.001，說明量壓法與酶法測定血清CO2濃度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2. 5 預(yù)期偏差分析 見表4。

根據(jù)量壓法與酶法的線性回歸方程Y=0.8149X+4.7625， 在醫(yī)學(xué)決定水平 20 mmol/L 和30 mmol/L 處分別計算其預(yù)期偏差和相對偏差， 經(jīng)統(tǒng)計兩種實(shí)驗(yàn)方法之間的相對偏差均小于允許誤差， 說明兩種方法所得數(shù)據(jù)具有可比性， 其結(jié)果的差異可為臨床所接受。

2. 6 兩種檢測方法測定二氧化碳的精密度比較 見表5

用酶法和量壓法分別測定同一質(zhì)控血清20次（朗道III）， 進(jìn)行批內(nèi)精密度試驗(yàn)；使用科室日常檢驗(yàn)工作中收集的高、低兩種濃度混合血清， 分別用兩種方法每天測定一次， 連續(xù)測定20 d， 進(jìn)行批間精密度試驗(yàn)， 經(jīng)測定變異系數(shù)均<5%， 精密度良好。

3 討論

3. 1 隨著醫(yī)院業(yè)務(wù)的發(fā)展， 好多項(xiàng)目都有兩種或兩種以上的方法或儀器來進(jìn)行測定， 作者目前對二氧化碳采用的方法是大批量的標(biāo)本用酶法， 急診標(biāo)本用量壓法。此時， 比對試驗(yàn)就顯得尤為重要。各檢測系統(tǒng)應(yīng)有可比性， 才能為臨床提供客觀真實(shí)的檢驗(yàn)結(jié)果， 保證醫(yī)療安全。

3. 2 本試驗(yàn)數(shù)據(jù)屬于配對資料， 因此對兩種方法測定結(jié)果做了配對t檢驗(yàn)， 量壓法測定血清中的二氧化碳濃度為（22.68±2.03） mmol/L， 酶法為（23.24±1.81） mmol/L， 兩種方法測定血清CO2濃度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.001）。

3. 3 測定血清二氧化碳影響因素很多， 在各個環(huán)節(jié)都容易導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生， 下面就可能的影響因素進(jìn)行分析。

3. 3. 1 兩種方法測定原理不同， 不同方法之間本身就會存在差異。量壓法原理是利用壓敏傳感器來完成二氧化碳的測量， 樣品內(nèi)的二氧化碳濃度與其相應(yīng)電壓成正比； 酶法的原理是堿化標(biāo)本后二氧化碳通過磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶-蘋果酸脫氫酶 -NADH的偶聯(lián)反應(yīng)體系測定， 在波長340 nm 處， 吸光度下降的速率與樣品中的二氧化碳含量成正比[1]。

3. 3. 2 血液標(biāo)本開蓋后應(yīng)在 60 min 內(nèi)測定出結(jié)果。因?yàn)檠褐械亩趸茧x體后易受外界環(huán)境的影響， 如果開蓋后長時間不做， 容易使二氧化碳逸出從而使測定值降低[2]。檢驗(yàn)人員接到標(biāo)本并打開試管后， 應(yīng)立即檢測， 時間上一定要有緊迫感。如不能立即測定， 最好保持試管的密封狀態(tài)。

3. 3. 3 采用真空負(fù)壓管， 樣本在密閉環(huán)境中保存， 可以防止二氧化碳從血清中逸出。在一定時間內(nèi)， 測定結(jié)果相當(dāng)穩(wěn)定[3]。

3. 3. 4 酶法的優(yōu)點(diǎn)是適合大批量標(biāo)本。缺點(diǎn)是檢測過程中試劑易與空氣中的CO2發(fā)生化學(xué)反應(yīng)， 導(dǎo)致試劑中的還原成分易被氧化， 空白吸光度值下降， 檢測結(jié)果偏低[4]， 所以不像其他生化項(xiàng)目， 每一批試劑定一次標(biāo)， CO2測定每天都必須定標(biāo)， 費(fèi)時費(fèi)力， 而且在上機(jī)時必須考慮交叉污染的問題。 生化項(xiàng)目的排序大致如下：AIT， AST， ALP， GGT， CHE， TP， ALB， TBIL， DBIL， UREA， UA， CRE， CKMB， HBDH， LDH， GLU， TG， CHO， HDJ， LDL， APOA1， APOB， AMY， CO2， P， CA[5]， 二氧化碳的測試順序排在淀粉酶后面， 可以基本解決交叉污染；量壓法的優(yōu)點(diǎn)是快速準(zhǔn)確， 測試在特定的通道中進(jìn)行， 不考慮交叉污染的問題。雖然量壓法也需要測定前定標(biāo)， 但是每次定標(biāo)僅需要幾分鐘， 比生化儀快速便捷。但如果標(biāo)本量大， 先做二氧化碳再做其他生化項(xiàng)目就顯得工作效率低下， 而且二氧化碳壓敏傳感器的穩(wěn)定性直接影響結(jié)果。因此， 對電解質(zhì)分析儀的日常維護(hù)相當(dāng)重要。目前的維護(hù)是每天測試完成后做3次管道沖洗， 并清潔采樣針以防止管道堵塞；每周做1次去蛋白；從半年的運(yùn)行來看， 效果良好。

3. 4 本次試驗(yàn)依據(jù)美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）制定的有關(guān)文件[6]， 對測定血清二氧化碳的兩種方法酶法與量壓法進(jìn)行了比較， 兩者相關(guān)性較好， 線性回歸方程為Y=0.8149X+4.7625， 相關(guān)系數(shù)r=0.9133（P<0.001）， 說明量壓法與酶法測定值之間存在顯著相關(guān)關(guān)系；在醫(yī)學(xué)決定水平 20 mmol/L 和30 mmol/L 處預(yù)期相對偏差分別為5.30%、2.63%；最后對酶法與量壓法測定血清中二氧化碳的精密度進(jìn)行了評價， 兩種方法的批內(nèi)和批間精密度均<5%， 表明兩種方法的穩(wěn)定性較好， 變異較小。

綜上所述， 量壓法與酶法測定血清中CO2的相關(guān)性、線性和精密度均較好， 測定結(jié)果具有可比性， 可以為臨床所接受。

參考文獻(xiàn)

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3. 3 測定血清二氧化碳影響因素很多， 在各個環(huán)節(jié)都容易導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生， 下面就可能的影響因素進(jìn)行分析。

3. 3. 1 兩種方法測定原理不同， 不同方法之間本身就會存在差異。量壓法原理是利用壓敏傳感器來完成二氧化碳的測量， 樣品內(nèi)的二氧化碳濃度與其相應(yīng)電壓成正比； 酶法的原理是堿化標(biāo)本后二氧化碳通過磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶-蘋果酸脫氫酶 -NADH的偶聯(lián)反應(yīng)體系測定， 在波長340 nm 處， 吸光度下降的速率與樣品中的二氧化碳含量成正比[1]。

3. 3. 2 血液標(biāo)本開蓋后應(yīng)在 60 min 內(nèi)測定出結(jié)果。因?yàn)檠褐械亩趸茧x體后易受外界環(huán)境的影響， 如果開蓋后長時間不做， 容易使二氧化碳逸出從而使測定值降低[2]。檢驗(yàn)人員接到標(biāo)本并打開試管后， 應(yīng)立即檢測， 時間上一定要有緊迫感。如不能立即測定， 最好保持試管的密封狀態(tài)。

3. 3. 3 采用真空負(fù)壓管， 樣本在密閉環(huán)境中保存， 可以防止二氧化碳從血清中逸出。在一定時間內(nèi)， 測定結(jié)果相當(dāng)穩(wěn)定[3]。

3. 3. 4 酶法的優(yōu)點(diǎn)是適合大批量標(biāo)本。缺點(diǎn)是檢測過程中試劑易與空氣中的CO2發(fā)生化學(xué)反應(yīng)， 導(dǎo)致試劑中的還原成分易被氧化， 空白吸光度值下降， 檢測結(jié)果偏低[4]， 所以不像其他生化項(xiàng)目， 每一批試劑定一次標(biāo)， CO2測定每天都必須定標(biāo)， 費(fèi)時費(fèi)力， 而且在上機(jī)時必須考慮交叉污染的問題。 生化項(xiàng)目的排序大致如下：AIT， AST， ALP， GGT， CHE， TP， ALB， TBIL， DBIL， UREA， UA， CRE， CKMB， HBDH， LDH， GLU， TG， CHO， HDJ， LDL， APOA1， APOB， AMY， CO2， P， CA[5]， 二氧化碳的測試順序排在淀粉酶后面， 可以基本解決交叉污染；量壓法的優(yōu)點(diǎn)是快速準(zhǔn)確， 測試在特定的通道中進(jìn)行， 不考慮交叉污染的問題。雖然量壓法也需要測定前定標(biāo)， 但是每次定標(biāo)僅需要幾分鐘， 比生化儀快速便捷。但如果標(biāo)本量大， 先做二氧化碳再做其他生化項(xiàng)目就顯得工作效率低下， 而且二氧化碳壓敏傳感器的穩(wěn)定性直接影響結(jié)果。因此， 對電解質(zhì)分析儀的日常維護(hù)相當(dāng)重要。目前的維護(hù)是每天測試完成后做3次管道沖洗， 并清潔采樣針以防止管道堵塞；每周做1次去蛋白；從半年的運(yùn)行來看， 效果良好。

3. 4 本次試驗(yàn)依據(jù)美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）制定的有關(guān)文件[6]， 對測定血清二氧化碳的兩種方法酶法與量壓法進(jìn)行了比較， 兩者相關(guān)性較好， 線性回歸方程為Y=0.8149X+4.7625， 相關(guān)系數(shù)r=0.9133（P<0.001）， 說明量壓法與酶法測定值之間存在顯著相關(guān)關(guān)系；在醫(yī)學(xué)決定水平 20 mmol/L 和30 mmol/L 處預(yù)期相對偏差分別為5.30%、2.63%；最后對酶法與量壓法測定血清中二氧化碳的精密度進(jìn)行了評價， 兩種方法的批內(nèi)和批間精密度均<5%， 表明兩種方法的穩(wěn)定性較好， 變異較小。

綜上所述， 量壓法與酶法測定血清中CO2的相關(guān)性、線性和精密度均較好， 測定結(jié)果具有可比性， 可以為臨床所接受。

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3. 3 測定血清二氧化碳影響因素很多， 在各個環(huán)節(jié)都容易導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生， 下面就可能的影響因素進(jìn)行分析。

3. 3. 1 兩種方法測定原理不同， 不同方法之間本身就會存在差異。量壓法原理是利用壓敏傳感器來完成二氧化碳的測量， 樣品內(nèi)的二氧化碳濃度與其相應(yīng)電壓成正比； 酶法的原理是堿化標(biāo)本后二氧化碳通過磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶-蘋果酸脫氫酶 -NADH的偶聯(lián)反應(yīng)體系測定， 在波長340 nm 處， 吸光度下降的速率與樣品中的二氧化碳含量成正比[1]。

3. 3. 2 血液標(biāo)本開蓋后應(yīng)在 60 min 內(nèi)測定出結(jié)果。因?yàn)檠褐械亩趸茧x體后易受外界環(huán)境的影響， 如果開蓋后長時間不做， 容易使二氧化碳逸出從而使測定值降低[2]。檢驗(yàn)人員接到標(biāo)本并打開試管后， 應(yīng)立即檢測， 時間上一定要有緊迫感。如不能立即測定， 最好保持試管的密封狀態(tài)。

3. 3. 3 采用真空負(fù)壓管， 樣本在密閉環(huán)境中保存， 可以防止二氧化碳從血清中逸出。在一定時間內(nèi)， 測定結(jié)果相當(dāng)穩(wěn)定[3]。

3. 3. 4 酶法的優(yōu)點(diǎn)是適合大批量標(biāo)本。缺點(diǎn)是檢測過程中試劑易與空氣中的CO2發(fā)生化學(xué)反應(yīng)， 導(dǎo)致試劑中的還原成分易被氧化， 空白吸光度值下降， 檢測結(jié)果偏低[4]， 所以不像其他生化項(xiàng)目， 每一批試劑定一次標(biāo)， CO2測定每天都必須定標(biāo)， 費(fèi)時費(fèi)力， 而且在上機(jī)時必須考慮交叉污染的問題。 生化項(xiàng)目的排序大致如下：AIT， AST， ALP， GGT， CHE， TP， ALB， TBIL， DBIL， UREA， UA， CRE， CKMB， HBDH， LDH， GLU， TG， CHO， HDJ， LDL， APOA1， APOB， AMY， CO2， P， CA[5]， 二氧化碳的測試順序排在淀粉酶后面， 可以基本解決交叉污染；量壓法的優(yōu)點(diǎn)是快速準(zhǔn)確， 測試在特定的通道中進(jìn)行， 不考慮交叉污染的問題。雖然量壓法也需要測定前定標(biāo)， 但是每次定標(biāo)僅需要幾分鐘， 比生化儀快速便捷。但如果標(biāo)本量大， 先做二氧化碳再做其他生化項(xiàng)目就顯得工作效率低下， 而且二氧化碳壓敏傳感器的穩(wěn)定性直接影響結(jié)果。因此， 對電解質(zhì)分析儀的日常維護(hù)相當(dāng)重要。目前的維護(hù)是每天測試完成后做3次管道沖洗， 并清潔采樣針以防止管道堵塞；每周做1次去蛋白；從半年的運(yùn)行來看， 效果良好。

3. 4 本次試驗(yàn)依據(jù)美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）制定的有關(guān)文件[6]， 對測定血清二氧化碳的兩種方法酶法與量壓法進(jìn)行了比較， 兩者相關(guān)性較好， 線性回歸方程為Y=0.8149X+4.7625， 相關(guān)系數(shù)r=0.9133（P<0.001）， 說明量壓法與酶法測定值之間存在顯著相關(guān)關(guān)系；在醫(yī)學(xué)決定水平 20 mmol/L 和30 mmol/L 處預(yù)期相對偏差分別為5.30%、2.63%；最后對酶法與量壓法測定血清中二氧化碳的精密度進(jìn)行了評價， 兩種方法的批內(nèi)和批間精密度均<5%， 表明兩種方法的穩(wěn)定性較好， 變異較小。

綜上所述， 量壓法與酶法測定血清中CO2的相關(guān)性、線性和精密度均較好， 測定結(jié)果具有可比性， 可以為臨床所接受。

參考文獻(xiàn)

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