李杰 王學(xué)廷 吳銀萍 王利輝

摘要 金銀花為忍冬屬植物忍冬干燥花蕾，包含揮發(fā)油、黃酮類、綠原酸類等多種有效成分，其中綠原酸具有抗菌消炎、降血脂、升高白細(xì)胞等作用，目前常以綠原酸的含量評價(jià)金銀花的質(zhì)量。該文綜述了金銀花中綠原酸的提取方法，為今后深入的研究提供參考。

關(guān)鍵詞 金銀花（FLOS LONICERAE JAPONICAE）；綠原酸；提取方法

中圖分類號 S567 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）16-04969-02

金銀花（FLOS LONICERAE JAPONICAE）為忍冬屬植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾。全世界忍冬屬約有200種，我國有98種，其中可供藥用的品種47種[1-2]。金銀花中含多種有效成分，如揮發(fā)油[3-4]、黃酮類[5-6]及綠原酸類[7-8]、三萜類[9-10]和微量元素[11]等。近年來化學(xué)和藥理研究證實(shí)，綠原酸是金銀花中藥理活性最強(qiáng)的成分之一，是金銀花的主要特征成分和藥用成分，通常以綠原酸的含量高低來評價(jià)金銀花質(zhì)量的好壞[12-13]。

綠原酸是一種多酚類化合物，化學(xué)式為：C16H18O9。綠原酸對消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)具有較強(qiáng)的藥理活性，具有廣泛的抗菌消炎、降血脂和升高白細(xì)胞等作用[14]。筆者就金銀花中綠原酸的提取方法來進(jìn)行總結(jié)，以期為今后的深入研究提供參考。

1 水提法

水提法是中藥提取中常見的提取方法。以水為提取劑，通過浸漬、煎煮、回流等方式提取中藥中的活性成分。王盈峰等[15]采用了水浸漬的方法提取金銀花中的綠原酸，當(dāng)料液比為1∶40（g/ml），溫度為80 ℃，時(shí)間為15 min時(shí)，綠原酸的提取率最高為4.09%。

李榮[16]以總浸膏率和綠原酸含量為指標(biāo)，采用水煎煮工藝提取綠原酸，認(rèn)為金銀花粉末過50目篩，料液比為1∶30（g/ml），煎煮3次，每次30 min時(shí)，提取效果最佳，金銀花總浸膏得率為60.7%，綠原酸的含量為6.78%。程明川[17]認(rèn)為水煎煮法可以最大限度的保留金銀花藥材中的化學(xué)成分，有利于建立金銀花藥材的HPLC特征圖譜。楊蓓蓓[18]采用水冷浸、超聲法和水回流法提取金銀花中的綠原酸，結(jié)果表明水回流法要優(yōu)于水冷浸和超聲法。采用水提法提取綠原酸，成本低，操作簡單，但提取物中蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等雜質(zhì)比較多，提取液易發(fā)霉，并且過濾、濃縮、純化等后續(xù)工作較困難[19]。

2 乙醇回流法

乙醇回流法是提取金銀花中綠原酸常用的方法。劉祥蘭[20]通過改變乙醇的濃度、回流時(shí)間以及料液比，發(fā)現(xiàn)乙醇濃度為75%，回流提取0.5 h，料液比為1∶10（g/ml）的情況下，提取綠原酸的效果最好，其中乙醇濃度是影響提取效果的主要因素，其次是回流時(shí)間，乙醇量影響最小。景曉明[21]、聶凌鴻[22]試驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)[20]基本吻合，回流時(shí)間略有差異。林丹[23]對比了水提法、水提醇沉法、醇提法和酶解法4種方法提取金銀花中的綠原酸的收率，認(rèn)為50%的醇提法綠原酸收率最高，可達(dá)15.28%。

綠原酸是由咖啡酸和奎尼酸形成的縮酚酸，在中性條件下容易水解，造成綠原酸損失。因此，閻巧娟等[24]研究了乙醇溶液酸堿度對綠原酸提取率的影響，在酸性條件下有利于綠原酸的提取，堿性條件下綠原酸的得率和質(zhì)量分?jǐn)?shù)都隨著pH值的增大而降低，在pH值約為4時(shí)，綠原酸的純度和得率最高，分別達(dá)到45.20%和36.59%。何德貴[25]、高春榮[26]、梁玉敏[27]、范遠(yuǎn)景[28]的研究結(jié)果也表明乙醇溶液的pH值約為4時(shí)，回流提取的綠原酸收率最高。與水提法相比，乙醇回流法提取時(shí)要耗用大量乙醇，加大生產(chǎn)成本，但是提取物中水溶性的雜質(zhì)少，且提取液不易發(fā)霉變質(zhì)，后處理比較方便。

3 超聲波提取法

超聲波提取技術(shù)，是近年來新興的一種中藥活性成分提取方法。超聲波提取主要利用超聲波在溶劑和提取樣之間產(chǎn)生了聲波的空化作用，導(dǎo)致溶液內(nèi)形成氣泡，氣泡不斷增大，造成壓縮爆破，致使固體樣品被分散，增大提取樣品與萃取溶劑間的接觸面積，提高了目標(biāo)提取物從固相轉(zhuǎn)移進(jìn)入液相的傳質(zhì)速率。

府旗中[29]將超聲波法與傳統(tǒng)的水提法和乙醇回流法進(jìn)行了對比，認(rèn)為超聲波法的綠原酸提取率要高于水提法和乙醇回流法，60%的乙醇，用超聲波加載提取30 min的提取效果最佳，綠原酸的提取率可達(dá)4.18%。周軍[30]，曹淵[31]的試驗(yàn)也證實(shí)了超聲波法要優(yōu)于水提法和乙醇回流法這一結(jié)論。此外，周軍[30]考慮了乙醇溶液酸堿度對提取率的影響，發(fā)現(xiàn)乙醇溶液pH值為4時(shí)，綠原酸的提取率最高為9.41%。曹淵[31]進(jìn)一步考慮了預(yù)浸時(shí)間的影響，結(jié)果表明金銀花預(yù)先浸泡12 h后，超聲提取的效果會更好。袁飛[32]對溶劑類型、預(yù)處理、提取時(shí)間和物料比進(jìn)行了研究，認(rèn)為溶劑類型是影響超聲提取的主要因素。采用微波預(yù)處理金銀花，一方面可以提高綠原酸的提取率，另一方面可以縮短超聲提取的時(shí)間。最終確定了超聲提取的最佳工藝，即60%乙醇為溶劑，微波處理1 min，物料比1∶30，提取時(shí)間45 min。樊銘聰[33]研究了超聲處理溫度對綠原酸提取率的影響，隨著超聲溫度的升高綠原酸的提取率先增加后減小，溫度為60 ℃時(shí)綠原酸的提取率最高。此外，還有許多研究學(xué)者[34-37]以甲醇溶液為提取劑來超聲提取金銀花中的綠原酸，也取得了良好的結(jié)果。

4 微波提取法

微波法具有操作簡單、提取時(shí)間短、安全可靠、無污染、節(jié)能環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，而受到了廣大科技工作者的青睞。

郭振庫[38]認(rèn)為乙醇濃度為35%，料液比為1∶30（g/ml），壓力為0.1 MPa，加熱時(shí)間為1 min，70%微波功率（最大功率850 W）時(shí)，綠原酸的提取率最高，為5.89%；并與超聲波提取法進(jìn)行了對比，認(rèn)為微波法的綠原酸提取率和重復(fù)性均高于超聲波法。張霞[39]采用響應(yīng)曲面法優(yōu)選出了微波輔助提取的最佳工藝：濃度43%的甲醇溶液為提取劑，料液比為1∶40（g/ml），微波功率400 W下提取8 min，綠原酸的提取率可以達(dá)到7.62%。舒孝順[40]把微波功率、料液比、提取次數(shù)、提取時(shí)間和溶劑的提取劑的酸堿度作為影響因素，來進(jìn)行正交試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在料液比為1∶12（g/ml），pH為3的水溶液中進(jìn)行微波提取2次，每次5 min，綠原酸的提取率可以達(dá)到4.54%，其中影響綠原酸的主要因素為微波功率，然后依次是提取次數(shù)、溶劑酸堿度和提取時(shí)間。

韋藤幼[41]采用微波預(yù)處理法提取金銀花中的綠原酸，即將樣品用乙醇溶液濕潤，然后微波預(yù)處理破壞細(xì)胞組織，再水提。結(jié)果表明金銀花經(jīng)過微波預(yù)處理后，綠原酸的提取率比傳統(tǒng)醇提法提高了1%。何培[42]運(yùn)用正交試驗(yàn)對微波預(yù)處理法進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在微波預(yù)處理過程中，乙醇用量對綠原酸的提取影響最大，其次是乙醇濃度，最后是微波預(yù)處理時(shí)間。給出了綠原酸提取的最佳條件：4倍量濃度80%的乙醇，微波預(yù)處理60 s，15倍量的蒸餾水，水提溫度為70 ℃，水提時(shí)間為50 min。

5 酶解提取法

酶的作用具有高度專一性、極強(qiáng)的催化活性和反應(yīng)條件溫和等特點(diǎn)。植物的細(xì)胞壁主要是由大分子的纖維素構(gòu)成，酶制劑可以降解植物細(xì)胞壁中的纖維素，使其成為水溶性糖類物質(zhì)，細(xì)胞壁的破壞有利于細(xì)胞內(nèi)的成分溶出，同時(shí)也有利于提取溶劑進(jìn)入。劉佳佳[43]用纖維素酶和果膠酶處理金銀花樣品。經(jīng)過纖維酶處理后，提取物收率和綠原酸收率均有提高，綠原酸收率可以達(dá)到8.15%，比單獨(dú)乙醇回流法的收率提高了1.68%，但是果膠酶的加入對金銀花提取物收率有影響，對綠原酸的收率影響不大。

楊茉[44]以酶用量、酶解時(shí)間、酶解時(shí)溶液的酸堿度及酶解溫度為因素，進(jìn)行正交試驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)對綠原酸提取率的影響程度依次為：酶解時(shí)間、酶用量、酶解溫度、酶解時(shí)溶液的酸堿度，認(rèn)為酶解水提的最佳工藝為酶用量0.5%，酶解時(shí)pH值6.0，酶解時(shí)間1.5 h，酶解溫度40 ℃，水提溫度為70 ℃，水提2次，1次1 h。

6 其他提取方法

馮文宇[45]采用石硫醇法、異戊醇法和改良的醋酸乙酯法提取金銀花中的綠原酸，改良的醋酸乙酯法優(yōu)于其他2種方法，該法可節(jié)約大量的乙醇原料，降低運(yùn)行成本，認(rèn)為實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)以改良的乙酸乙酯法為先。王秀玲[46]采用索氏提取法提取金銀花中綠原酸，結(jié)果表明，乙醇濃度為70%，pH值為4，虹吸次數(shù)為5時(shí)，綠原酸的提取率最高。乙醇的濃度是影響綠原酸提取率的主要因素，pH值次之，虹吸次數(shù)影響最小。

7 小結(jié)與展望

金銀花在中國作為藥物使用已有很長的歷史了，目前作為經(jīng)濟(jì)植物在我國廣大地區(qū)都有大規(guī)模的人工種植。從金銀花中提取的綠原酸除了可以應(yīng)用在醫(yī)藥工業(yè)外，還廣泛的應(yīng)用在食品、保健和日用化工等領(lǐng)域。雖然我國有著豐富的富含綠原酸的植物資源如金銀花，但對綠原酸的提取、純化和開發(fā)利用技術(shù)等方面的研究仍遠(yuǎn)落后發(fā)達(dá)國家，因此研究金銀花中綠原酸的提取分離工藝具有十分廣闊的應(yīng)用前景和巨大的社會、經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)對我國植物資源開發(fā)利用也具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

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責(zé)任編輯 石金友 責(zé)任校對 況玲玲