韋 勤，盧 紅，黎丹娜，梁 飛，丘天鳳，陸 欣

(廣西化工研究院，廣西 南寧 530001)

實(shí)驗(yàn)室與分析

薄層色譜法用于確定維生素B6合成過(guò)程反應(yīng)終點(diǎn)

韋 勤，盧 紅，黎丹娜，梁 飛，丘天鳳，陸 欣

(廣西化工研究院，廣西 南寧 530001)

以硅膠加燒石膏(占15%)作為吸附劑，正丁醇∶醋酸∶水(60∶15∶25)為展開(kāi)劑，3%茚三酮乙醇溶液為顯色劑，采用薄層色譜法確定合成維生素B6中酯化和?；磻?yīng)的終點(diǎn)。結(jié)果表明，該方法設(shè)備、操作簡(jiǎn)單，速度快，受溫度影響小，靈敏度高，用于確定合成維生素B6酯化反應(yīng)和?；磻?yīng)終點(diǎn)明顯，可操作性強(qiáng)。

維生素B6；酯化反應(yīng)；?；磻?yīng)；終點(diǎn)；薄層色譜法

維生素B6具有廣泛的生理作用，是人體必需的維生素之一[1-3]。維生素B6又稱吡哆素，是一種水溶性維生素，遇光或堿易破壞，不耐高溫。通常其分析方法有色譜法[4-5]、聚硫堇/亞鐵氰根修飾碳糊電極法[6]、分光光度法[7]、熒光法[8]、微生物法[9]等。

維生素B6的合成工藝有 唑法和吡啶酮法等，本實(shí)驗(yàn)采用 唑法生產(chǎn)。工藝流程大致為：將氨基丙酸和鹽酸投入成鹽鍋，在一定的溫度下保溫，減壓蒸去酸水至鍋內(nèi)物呈乳白色固狀；稍冷加入乙醇溶解固狀物，用泵打到酯化鍋然后加入定量的苯、乙醇進(jìn)行三元共沸脫水酯化反應(yīng)，當(dāng)分水器有水分出時(shí)，開(kāi)始滴加定量的苯、乙醇混合物，滴加速度大致與分水器速度相等，乙醇滴加完畢，繼續(xù)回流一定時(shí)間（根據(jù)分析結(jié)果確定），加入催化劑磷酸，繼續(xù)帶水至鍋內(nèi)酯化液水分≤0.5%（W/V），然后常壓加收苯醇至鍋溫90℃停止。將上述所得的酯化液抽入干燥的草?；?，加入草酸二乙酯，分次加入小蘇打，然后升溫至50℃保溫反應(yīng)一定時(shí)間（根據(jù)分析結(jié)果確定），得到N-草酰物。薄層色譜法[10-12]常用于中藥材的薄層鑒別，具有設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，分析速度快，靈敏度高，選擇性好，固體相和流動(dòng)相的選擇范圍大等優(yōu)點(diǎn)。我們?cè)诤铣删S生素B6中，酯草工序難以確定酯化反應(yīng)和?；磻?yīng)的終點(diǎn)。酯草工序有成鹽反應(yīng)、酯化反應(yīng)和?；磻?yīng)，成鹽反應(yīng)很快就完成，但酯化反應(yīng)和?；磻?yīng)的終點(diǎn)則難以確定。本文通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，篩選出一種簡(jiǎn)易的薄層色譜法，并將該法用于化學(xué)藥品合成過(guò)程中的分析。結(jié)果表明，薄層色譜法比用高效液相法分析速度快，投入成品低，且該方法設(shè)備、操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，可用于維生素B6合成過(guò)程反應(yīng)終點(diǎn)的確定。

1 儀器和試劑

載玻片、研缽、展開(kāi)槽、干燥烘箱。

酯化液、?；骸⒅行匝趸X、硅膠、燒石膏、正丁醇、醋酸、茚三酮、乙醇。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 吸附劑（載體）的選擇

選擇載體，必須同時(shí)兼顧所用展開(kāi)劑與分離物質(zhì)三者的關(guān)系。針對(duì)被分離物的性質(zhì)，在眾多的吸附劑中，分別選用中性氧化鋁和硅膠作吸附劑加入燒石膏（占吸附劑的15%）為粘合劑制成薄層板，活化條件為105℃，30min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可看出，活性為Ⅳ級(jí)的硅膠分離效果最好。

2.2 展開(kāi)劑的選擇

選用合適的展開(kāi)劑，可使各成分恰當(dāng)?shù)胤蛛x，方便對(duì)各成分進(jìn)行定量，確定反應(yīng)的終點(diǎn)。要將吸附劑的活性，被分離化合物的極性和溶解性，以及展開(kāi)劑的極性三方面的因素結(jié)合起來(lái)考慮。被分離化合物有丙氨酸鹽酸鹽和酯化物等，綜合各因素，選用了正丁醇、醋酸和水3種溶劑按一定比例組成的溶劑系統(tǒng)作為展開(kāi)劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可看出，展開(kāi)劑為正丁醇∶醋酸∶水=60∶15∶25時(shí)，斑點(diǎn)顯色效果最佳。

表1 吸附劑的選擇

表2 展開(kāi)劑的選擇

2.3 顯色劑的選擇

生物堿指示劑中，選擇麻黃生物堿類常使用的3%茚三酮乙醇溶液作指示劑，經(jīng)過(guò)與2.1和2.2同步試驗(yàn)，結(jié)果顯色明顯。

2.4 實(shí)驗(yàn)樣品測(cè)定

采用自制薄層硅膠G板(15cm×20cm玻璃棉板)，課題組自制樣品，按表3所列時(shí)間取樣，用毛細(xì)管在離邊緣1.5cm處點(diǎn)樣，放入展開(kāi)槽中約10min后展開(kāi)，取出，放在干燥箱烘干，然后用3%的茚三酮乙醇溶液顯色，在105℃加熱約5 min，觀察顯色斑點(diǎn)。Rf=0.5處為丙氨酸鹽酸鹽斑點(diǎn)，Rf=0.7處為酯化物斑點(diǎn)，均顯紫紅色。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

采用薄層色譜法分析，以硅膠加燒石膏(占 15%)作為吸附劑，正丁醇∶醋酸∶水(60∶15∶25)為展開(kāi)劑，3%茚三酮乙醇溶液為顯色劑，在維生素B6合成中，在乙醇滴加完后第4h，Rf=0.5處無(wú)斑點(diǎn)，Rf=0.7處斑點(diǎn)明顯，表明酯化反應(yīng)結(jié)束；最后一次加入小蘇打后第9h，Rf=0.5處無(wú)斑點(diǎn)，Rf=0.7處幾乎看不見(jiàn)斑點(diǎn)，表明酰化反應(yīng)結(jié)束。

4 結(jié)論

1）以硅膠加燒石膏(占15%)作為吸附劑，正丁醇∶醋酸∶水(60∶15∶25)為展開(kāi)劑，3%茚三酮乙醇溶液為顯色劑，進(jìn)行薄層色譜分析，所顯的斑點(diǎn)位置和顏色最佳。

2）采用薄層色譜分析法確定合成維生素B6中酯草工序酯化和酰化反應(yīng)的終點(diǎn)方法可行，該方法設(shè)備、操作簡(jiǎn)單，速度快，受溫度影響小，靈敏度高，可操作性強(qiáng)。

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Determination of Reaction End Point of Vitamin B6 Synthesis by Thin-layer Chromatography

WEI qin, LU hong, LI Dan-na, LIAN Fei, QIU Tian-feng, LU Xin
(Guangxi Research Institute of Chemical Industry，Nanning 530001,China)

Used silica gel and bassanite (15%) as absorbent, n-butyl alcohol : acetic acid : water(60:15:25) as developing solvent, 3% ninhydrin ethanol solution as color-developing agent,the end point of esterification and acylation reaction in synthesis of vitamine B6 was determined by thin-layer chromatography. The test result showed that this method was easy, rapid, simple equipment, little temperature influence, high sensitive and operability. The esterification and acylation reaction endpoint was clear.

vitamine B6; esterification; acylation reaction; end point; thin-layer chromatography

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

O 657.7

A

1671-9905(2014)08-0041-03

韋勤（1964-），女，高級(jí)工程師，主要從事原料藥工藝和檢測(cè)研究。E-mail: 952849588@. qq .com

2014-07-03