王海霞,林萍,周文婷,姬生國

(廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院,廣州 510006)

氣候及地理環(huán)境對不同采收期廣金錢草質(zhì)量的影響*

王海霞,林萍,周文婷,姬生國

(廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院,廣州 510006)

目的 探討氣候、地理環(huán)境及采收期對廣金錢草藥材中夏佛塔苷的含量的影響,為廣金錢草的規(guī)范化種植提供參考。方法采用高效液相色譜法測定廣金錢草藥材中夏佛塔苷的含量,色譜柱為ODS-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)。流動相為甲醇-水(32∶68),流速為0.5 mL·min-1,柱溫35℃,檢測波長272 nm。結(jié)果氣候類型、降水量、年平均溫度、年平均日照時間、地理環(huán)境等對廣金錢草中夏佛塔苷含量有明顯的影響。結(jié)論亞熱帶季風(fēng)氣候,溫度在25～32℃,日照時間約10 h,平均降雨量約1 942 mm最適宜廣金錢草生長,廣西栽培種中總含量最高,海南樣品中含量最低。7月份采收的樣品含量較其他月份高。

廣金錢草;夏佛塔苷;采收期,不同;色譜法,高效液相

廣金錢草收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部,以干燥地上部分入藥,主產(chǎn)于廣西、廣東、海南等省[1]。具有清熱利濕、通淋排石之功效。研究表明廣金錢草含有生物堿、黃酮苷、酚類、鞣質(zhì)等眾多化學(xué)成分,其中夏佛塔苷為其質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分[2-3]。生長環(huán)境及產(chǎn)地的不同對廣金錢草中化學(xué)成分的變化有一定的影響,造成其質(zhì)量的參差不齊[4]。為了更好地對其進行質(zhì)量控制,保證臨床用藥的安全性及有效性[5],筆者以夏佛塔苷及浸出物的含量為指標(biāo),考察了廣金錢草主產(chǎn)地的120批次藥材中夏佛塔苷及浸出物的含量[6-7],并結(jié)合氣候地理因素進行分析、評判,以探討各種因素與其質(zhì)量的關(guān)系,為廣金錢草的規(guī)范化種植,提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材來源 實驗所用樣品于2013年采集于廣東省、海南省及廣西壯族自治區(qū)。經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院姬生國教授鑒定為豆科山螞蝗屬植物廣金錢草Desmodium styracifolium(Osb.)Merr.。藥材經(jīng)干燥后粉碎過50目篩,備用。

1.2 儀器與試劑 LC20AT型全自動高效液相色譜儀(日本島津公司),ODS-C18色譜柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm,日本島津公司),BIY211b電子天平(日本島津公司),KQ-500DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),KYC 100B恒溫振蕩器(上海福瑪實驗設(shè)備有限公司),試劑除流動相為色譜純外其余均為分析純。夏佛塔苷對照品(批號:MUST-12102909,成都曼思特生物科技有限公司,純度≥98%)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 ODS-C18色譜柱;流動相為甲醇-水(32∶68),流速為0.5 mL·min-1,柱溫35℃,檢測波長272 nm,進樣量10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取夏佛塔苷對照品,加甲醇配成每毫升含夏佛塔苷0.227 mg的對照品溶液,用孔徑0.45 μm微孔濾膜過濾。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱定樣品0.2 g,置具塞錐形瓶,加80%甲醇20 mL,稱質(zhì)量,超聲提取(功率100 W,頻率40 kHz)20 min,放冷,補足質(zhì)量,搖勻,濾過,濾液蒸干,50%甲醇定容在10 mL的量瓶中,用孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過,即得。

2.4 含量測定方法 精密吸取上述溶液10 μL,按“2.1”項下色譜條件進樣測定,記錄40 min色譜圖。夏佛塔苷的保留時間為27 min,理論板數(shù)為10 446.5,分離度為9.393。對照品及樣品高效液相色譜見圖1。

1.夏佛塔苷圖1 夏佛塔苷對照品(A)、廣金錢草樣品(B)色譜圖1.schaftosideFig.1 Chromatogram of schaftoside reference(A)and Desmodium styracifolium sample(B)

2.5 線性關(guān)系考察 分別各精密吸取兩種對照品溶液2.0,2.0,1.0,1.0,1.0,1.0,1.0 mL,分別置2,5,5, 10,25,50,100 mL量瓶中,加50%甲醇定容至刻度,搖勻,經(jīng)孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過。按“2.4”項下進樣測定(n=6),以對照品峰面積為縱坐標(biāo)(Y),濃度為橫坐標(biāo)(X),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:夏佛塔苷:Y=4×107X-47 680,r=0.999 7。結(jié)果表明,在上述色譜條件下,對照品在質(zhì)量濃度為0.002 27～0.227 00 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度實驗 取夏佛塔苷對照品溶液,按“2.4”項下測定連續(xù)進樣測定6次,得夏佛塔苷含量,RSD為2.3%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 精密稱定樣品約0.2 g,按“2.4”項下制成供試品溶液,按“2.4”項下測定,于0,2,4,8, 12,24 h分別進樣測定,計算得夏佛塔苷含量,RSD為1.0%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實驗 取同一批樣品6份,每份0.2 g,精密稱定,分別按“2.3”項下方法制備成供試品溶液,按“2.4”項下方法進樣測定,計算得夏佛塔苷含量,RSD為2.3%。結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率實驗 精密稱取6份已知含量的樣品(夏佛塔苷含量為0.043 mg·mL-1)各0.2 g。分別精密加入0.043 mg夏佛塔苷對照品,按“2.3”項方法制備供試品溶液,按“2.4”項方法進樣測定,計算回收率。結(jié)果夏佛塔苷平均回收率為98.26%,RSD為1.51%。

表1 夏佛塔苷加樣回收率實驗結(jié)果Tab.1 Recovery results of schaftoside

2.10 樣品含量測定 將樣品按“2.3”項下制備成供試品溶液,按“2.4”項下含量測定方法進行測定,記錄色譜圖,計算各樣品中夏佛塔苷含量,結(jié)果見表2。廣東省廣州市和廣東省湛江市3～7月份采收期夏佛塔苷平均含量分別為2.33,2.34,2.81,2.92,3.11和2.00,2.05,2.06,2.71,3.24 mg·g-1。

2.11 浸出物測定 將樣品按《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅩA水溶性浸出物測定法項下冷浸法測定,記錄質(zhì)量,計算各樣品中浸出物含量。結(jié)果顯示,廣東、海南、廣西產(chǎn)夏佛塔苷浸出物平均含量依次為9.16%,7.96%,11.01%。

3 討論

廣金錢草多生于低海拔的荒坡、草地或林下。喜溫暖濕潤氣候,較耐干旱,不耐嚴(yán)寒,最適宜生長溫度為25～32℃,溫度低于-4℃則不能生長[8]。日照時間以約10 h為最佳,全光照條件下生長好,蔭蔽度＞30%時側(cè)蔓少,生長不旺盛。對土壤要求不嚴(yán),黃壤土、紅壤土、砂質(zhì)壤土均能生長,但以透水性良好的砂質(zhì)壤土為好[9]。栽培品種在生長期要求土壤水分含量較多時,才能促進芽萌發(fā)和側(cè)枝及蔓枝的生長。研究結(jié)果表明采收于廣西的廣金錢草平均夏佛塔苷含量(1.71 mg·g-1)及浸出物(11.01%)均高于采收于廣東省(1.49 mg·g-1)(9.16%)和海南省(1.27 mg·g-1)(7. 96%)的樣品。分析原因可能是由于廣西屬低緯地區(qū),四周多山,境內(nèi)以丘陵山地為主,南瀕熱帶海洋。這種特殊的地理環(huán)境,與大氣環(huán)流的共同作用,形成熱量豐富、四季宜耕,降水豐沛(年平均年降水量1 942 mm, 70%～80%集中于夏季)、干濕分明,日照適中、冬少夏多,土壤主要由砂巖和泥質(zhì)巖發(fā)育形成的,適合廣金錢草生長。而海南地處于熱帶的北緣,具有熱帶和亞熱帶自然條件的過渡特征,屬于海洋性熱帶季風(fēng)氣候,年均降水量＞1 600 mm,時見暴雨出現(xiàn),也常有臺風(fēng)侵襲,全年雨量分配很不均勻,呈顯著的干濕兩季,溫度較高,相比于廣西、廣東降水量較少,環(huán)境相對于不利于廣金錢草的生長,由此導(dǎo)致采收于廣西、廣東的夏佛塔苷含量高于采收于海南。

表2 不同產(chǎn)地廣金錢草夏佛塔苷含量測定結(jié)果Tab.2 Results of content determination of schaftoside in Desmodium styracifolium from different collecting area

《中華人民共和國藥典》2010年版一部中廣金錢草項下的采收時間是夏、秋二季采割。據(jù)此,筆者對3月至7月間采集于廣東省廣州市及湛江市烏塘鎮(zhèn)的廣金錢草GAP種植基地的樣品進行了含量測定。結(jié)果7月份采集的樣品中夏佛塔苷的含量最高。由于每年的5月至7月份為廣金錢草的生長旺盛期,8月進入生殖生長期,開花結(jié)果,10月初果實逐漸成熟,11月下旬植株開始落葉枯萎,以宿根越冬。據(jù)此,筆者認(rèn)為7月份采收的頭茬藥材質(zhì)量為優(yōu)。

亞熱帶季風(fēng)氣候夏季較熱,年降水量都相對較大,冬季較少且溫度較高,季節(jié)變化基本相似。6月,7月降水量占總降水量約70%,降水量豐富,日照充足,有利于廣金錢草的生長,有效成分的積累相對較高,可以保證廣金錢草藥材的質(zhì)量。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:190.

[2] 陳豐連,張文進,徐鴻華.不同采收期及不同產(chǎn)地廣金錢草地上部分HPLC指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2010,16(14):96-98.

[3] 李曉亮,汪豪,劉戈,等.廣金錢草的化學(xué)成分研究[J].中藥材,2007,30(7):802-805.

[4] 陳豐連,馬鑫斌,徐鴻華.不同產(chǎn)地廣金錢草藥材質(zhì)量研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報,2010,26(3):248-251.

[5] 姬生國,郭念欣,李穎春,等.廣金錢草及其制劑的HPLC指紋圖譜研究[J].中國藥房,2010,21(27):2543-2545.

[6] 何梟宇,楊若婧,朱志凱,等.大葉蛇葡萄不同提取物總黃酮含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2012,31(2):211-212.

[7] 汪秋蘭,王文清,馬永貴.高效液相色譜法在中藥有效成分含量測定中的應(yīng)用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2011,30(11):1474-1476.

[8] 蒙愛東,覃柳燕,董青松.中藥材廣金錢草種植基地選擇標(biāo)準(zhǔn)的探討[J].中國標(biāo)準(zhǔn)化,2009,52(11):27-28.

[9] 蒙愛東,閆志剛,董青松,等.廣金錢草綠色藥材生產(chǎn)基地環(huán)境質(zhì)量評價[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(9):4242-4243.

DOI 10.3870/yydb.2014.08.027

Influence of Climate and Geographical Environment on Quality of Desmodium Styracifolium Herba Harvested at Different Time

WANG Hai-xia,LIN ping,ZHOU Weng-ting,JI Sheng-guo
(School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China)

Objective To study the influence of climate,geographical environment and harvesting time on contents of schaftoside inDesmodium styracifoliumHerba.MethodsContent of schaftoside inDesmodium styracifoliumHerba was determined by using HPLC.ODS-C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm)was used,the mobile phase was methanol-water(32∶68),the detection wavelength was 272 nm,the flow rate was 0.5 mL·min-1,and the column temperature was 35℃.ResultsThe climate type,amount of precipitation,average temperature,duration of sunshine,geographical environment of different province had significant impacts on the content of schaftoside inDesmodium styracifoliumHerba.ConclusionSubtropical monsoon climate,temperature from 25℃to 32℃,sunshine time of 10 h per day and the average annual rainfall of 1 942 mm are suitable for growth ofDesmodium styracifolium.The content of schaftoside in samples cultivated fromGuangxiProvince is higher than that cultivated fromGuangdongProvince andHainanProvince.The schaftoside content of sample cultivated in July is higher than that cultivated in other months.

Desmodium styracifolium;Schaftoside;Collecting time,different;Chromatograph,high performance liquid

R282.71;R927.2

A

1004-0781(2014)08-1077-03

2013-10-29

2014-01-02

*廣東省科技計劃項目(2009B030801044)

王海霞(1989-),女,海南憺州人,在讀碩士,研究方向:中藥資源開發(fā)與道地性研究。電話:020-39352327,E-mail:wanghx200820@163.com。

姬生國(1967-),男,海南延津人,教授,博士,從事中藥資源、中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及中藥新藥研究。電話:020-39352327,E-mail:shengguo_ji@163.com。