吳曙輝* 萬珍玲陳 翔龔 齊支紀治

（1 上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，上海 201900；2 海南省人民醫(yī)院，海南 海口 570311）

糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織中黏蛋白MUC4基因表達的影響

吳曙輝1* 萬珍玲2陳 翔1龔 齊1支紀治1

（1 上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，上海 201900；2 海南省人民醫(yī)院，海南 ?？?570311）

目的探討糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織中黏蛋白MUC4表達的影響。方法2009年12月至2011年12月在我院行鼻內(nèi)鏡手術(shù)患者85例，隨機分為兩組，對照組43例，治療組42例。對照組術(shù)前未予處理，治療組術(shù)前2周予輔舒良。免疫組織化學SP法檢測鼻息肉黏膜組織中MUC4蛋白的表達情況。結(jié)果對照組鼻息肉組織中MUC4的陽性表達率為37.2%，而治療組MUC4的陽性表達率為7.1%，兩組間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論MUC4基因在鼻息肉組織中存在表達，糖皮質(zhì)激素可下調(diào)黏蛋白MUC4基因表達，這可能是它抑制鼻息肉黏液過度分泌的途徑之一。

MUC4；鼻息肉；糖皮質(zhì)激素

鼻息肉是臨床上常見病和多發(fā)病，流行病學研究表明國內(nèi)成人鼻息肉的發(fā)病率為2.7%，60歲以上的老年人發(fā)病率高達5%以上[1]。迄今，鼻息肉的病因和發(fā)病機制尚未明確，感染、細胞因子、變態(tài)反應、基因異常[2]等可能參與鼻息肉的形成。黏液的異常分泌是鼻息肉、變應性鼻炎、鼻竇炎等鼻腔慢性炎癥性疾病的基本特征。黏蛋白是鼻黏液的主要成分，黏蛋白結(jié)構(gòu)和含量的變化可能是導致呼吸道炎性反應發(fā)生發(fā)展的重要因素，而其中MUC4是近年研究的一個新熱點。然而，在鼻息肉組織中MUC4（mucin4，4型黏蛋白）的表達與調(diào)控尚不清楚。目前臨床上應用的鼻用糖皮質(zhì)激素能夠減輕黏膜炎性反應及改善黏膜腫脹，效果顯著。本實驗通過檢測鼻息肉組織中MUC4的表達情況，以及應用糖皮質(zhì)激素后對鼻息肉中MUC4基因表達的影響，從而探討?zhàn)さ鞍譓UC4在鼻息肉的黏液分泌過程中的作用及糖皮質(zhì)激素治療鼻息肉的作用機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取2009年12月至2011年12月在我院因鼻息肉行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的85患者，其中男49例，女36例；年齡16～68歲，平均27歲。根據(jù)1997年?？跁h制定的慢性鼻竇炎鼻息肉臨床分型分期及內(nèi)鏡鼻竇手術(shù)療效評定標準。均無變態(tài)反應性鼻炎、哮喘等變態(tài)反應病史，1個月內(nèi)無應用類固醇激素及抗組胺藥物史，無阿司匹林不耐受。

1.2 方法

1.2.1 分組和治療方法：鼻息肉患者按隨機數(shù)字表法隨機分為兩組，對照組43例，治療組42例。對照組術(shù)前未予處理，治療組術(shù)前兩周予輔舒良（葛蘭素史克公司生產(chǎn)）鼻腔噴入干預，每個鼻孔各2噴，每日1次。兩組在年齡、病程、嚴重程度等方面差異無統(tǒng)計學意義，均具有可比性。

1.2.2 免疫組織化學法檢測MUC4基因表達：所有標本均經(jīng)病理檢查證實。標本取材后一式兩份，一份置-70 ℃低溫冰箱編號保存?zhèn)溆?，一份送病檢。一抗為小鼠抗人MUC4單克隆抗體購自Santa Cruz公司，SP試劑盒和DAB顯色劑均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。操作步驟按說明書進行，用已知陽性片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。MUC4抗體按1∶100稀釋。

1.2.3 實驗結(jié)果評定：MUC4以細胞胞質(zhì)出現(xiàn)明顯的深棕色或棕黃色顆粒為染色陽性。每例標本同一指標隨機取2張切片進行高倍鏡觀察（×400），每張切片分別隨機選10個視野。以陽性細胞占總細胞總數(shù)的的百分比來記分：當陽性細胞數(shù)小于總數(shù)的5%時計為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分。染色強度得分與陽性細胞數(shù)得分相乘，0分計為陰性“-”，1～3分計為弱陽性“+”，4～5分計為中度陽性“++”，大于或等于6分計為強陽性“+++”。

1.2.4 統(tǒng)計學處理：計數(shù)資料采用率表示，χ2檢驗比較兩組之間的差異，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

鼻黏膜MUC4基因主要表達于鼻息肉上皮杯狀細胞，而在鱗狀上皮及其他移行上皮則無表達，陽性產(chǎn)物定位于細胞質(zhì)，呈彌漫性著色。對照組43例鼻黏膜中16例MUC4黏蛋白染色陽性（+～++），陽性率為37.2%。治療組42例鼻黏膜組織中，有3例MUC4染色呈陽性（++～+++），陽性率為7.1%。兩組行χ2檢驗比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 MUC4蛋白在鼻息肉組織中的表達情況

3 討 論

鼻息肉是臨床常見的鼻黏膜慢性炎癥性疾病，發(fā)病率在1%～4%，具有遷延不愈、反復發(fā)作的特點。目前外科手術(shù)仍是鼻息肉治療的主要方法，多采用手術(shù)治療，但術(shù)后復發(fā)傾向強，復發(fā)率可高達15%～40%[3]。其病因和發(fā)病機制至今尚未明確，鼻竇慢性炎癥可導致鼻息肉的產(chǎn)生，而鼻息肉又通過原發(fā)或繼發(fā)因素導致黏液過度分泌。局部黏液的過度分泌為繼發(fā)性真菌感染提供了條件，并使炎性反應遷延不愈[4]。黏液的異常分泌是鼻息肉、變應性鼻炎、鼻竇炎等鼻腔慢性炎癥性疾病的基本特征，而黏蛋白是其中最主要的組成成分。

目前在NCBI的基因文庫里有超過20種的人和鼠類黏蛋白基因，分為膜結(jié)合型與分泌型，人類黏蛋白（mucin，MUC）基因分別為MUC1、2、3A、3B、4、5AC、5B、6～9、11～20，分布于人1、3、4、7、11、12和19號染色體上。近幾年來，國內(nèi)外對黏蛋白在耳鼻咽喉科領(lǐng)域的研究日益增多，其中對分泌型黏蛋白如MUC5AC在鼻竇炎、變應性鼻炎等鼻疾患中的研究已見相關(guān)報道[5，6]。但到目前為止，國內(nèi)外尚無MUC4在鼻息肉方面的研究報道。MUC4是新發(fā)現(xiàn)的位于3q29的候選癌基因，編碼的跨膜蛋白型黏蛋白在人體中分布廣泛[7-9]，在腫瘤發(fā)生，發(fā)展過程中起著重要作用[10]，新近研究顯示MUC4在多種上皮源性腫瘤中異常表達，可能是硬化性上皮樣纖維肉瘤、胰腺癌等的一種敏感、特異的標志物[11，12]，使其成為腫瘤檢測的重要指標及治療的潛在靶點。

目前臨床上鼻息肉的治療藥物有糖皮質(zhì)激素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、抗組胺類藥物、白三烯拮抗藥等，但最有效的藥物仍是鼻用類固醇激素，在臨床上用于治療和術(shù)后防止鼻息肉的復發(fā)，可不同程度地改善主觀癥狀和客觀指標。Bonfils等[13]對100例鼻息肉病采取糖皮質(zhì)激素治療（短期口服、局部長期應用），經(jīng)過3年隨訪，其有效率為85%，只有15%的患者需采取手術(shù)治療。Vento等[14]在一項隨機、雙盲、對照的前瞻性臨床研究中發(fā)現(xiàn)對阿司匹林耐受的鼻息肉患者術(shù)后使用鼻腔局部曲安奈德治療，能有效阻止鼻息肉術(shù)后的復發(fā)。

鼻用糖皮質(zhì)激素能夠減輕黏膜炎性反應及改善黏膜腫脹，目前在耳鼻咽喉科臨床上的應用日益得到重視。汪際云等[15]將35例鼻息肉患者分為地塞米松組和對照組。用RT-PCR方法檢測兩組患者鼻息肉中MUC8 mRNA的表達，結(jié)果地塞米松組鼻息肉中MUC8 mRNA的表達（0.71±0.34）較對照組（1.12±0.26）明顯減少（P＜0.05）。因此認為地塞米松可抑制鼻息肉中MUC8 mRNA的表達。彭璐等[5]通過體外培養(yǎng)人鼻息肉組織研究地塞米松和組胺對黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表達的影響，結(jié)果表明炎性遞質(zhì)組胺可上調(diào)黏蛋白表達，地塞米松可下調(diào)MUC5AC mRNA和蛋白的表達。本實驗就鼻用糖皮質(zhì)激素對鼻黏膜組織黏蛋白MUC4基因表達的影響進行了研究，結(jié)果顯示對照組和糖皮質(zhì)激素治療組均存在MUC4基因的表達，證實了鼻息肉具有黏液高分泌性疾病的特點。黏液的高分泌是伴有鼻息肉的慢性鼻竇炎的一個顯著特征。但是應用局部糖皮質(zhì)激素后，鼻息肉組織MUC4基因表達水平降低，且與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。這提示MUC4基因在鼻息肉黏液過量分泌中起著一定的作用，激素治療能下調(diào)鼻息肉組織中MUC4基因的表達。

總之，糖皮質(zhì)激素能下調(diào)鼻黏膜組織黏蛋白MUC4基因表達，這可能是它抑制鼻息肉黏液過度分泌的途徑之一。但有關(guān)糖皮質(zhì)激素通過何種信號通路調(diào)節(jié)MUC4的表達尚待進一步深入研究。

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Effect of MUC 4 Expression in Nasal Polyp Organization After Glucocorticoids Application

WU Shu-hui1*, WAN Zhen-ling2, CHEN Xiang1, GONG Qi1, ZHI Ji-zhi1
(1 Shuguang Hospital Baoshan Branch of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201900, China; 2 Hainan Provincial People's Hospital, Haikou 570311, China)

ObjectiveTo investigate the effect of MUC4 expression on nasal polyp organization after local glucocorticoids application.MethodsFrom Dec 2009 to Dec 2011, 85 cases of nasal polyp mucosa in our hospital were enrolled and divided into two groups, control group(n=43)and therapeutic group(n=42). No additional treatment was performed in control group, flixonase was applied 2 weeks before endoscopic surgery. MUC4 expression of nasal polyp mucosa tissues was detected by immunohistochemical SP method.ResultsThe positive expression rate of MUC4 of nasal polyp was 37.2% in control group, but 7.1% in therapeutic group(P＜0.05).ConclusionMUC4 genes expression existed in nasal polyps, and glucocorticoid can down-regulate the MUC4 gene expression, which could be one of the ways inhibit nasal mucus hypersecretion.

MUC4; Nasal polyp; Glucocorticoid

R765

B

1671-8194（2014）21-0045-02

*通訊作者