李廣權(quán)，周衛(wèi)東，馬異云，張林

1.成都三六三醫(yī)院 檢驗(yàn)科，四川 成都610041；2.蓉生藥業(yè)有限公司，四川成都 610041

0 前言

羅氏Cobas e411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀具有靈敏度高、特異性高、親和力高、準(zhǔn)確度高、線性范圍寬、自動(dòng)化程度高、無放射污染、操作簡便快速、試劑保存期長、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是目前先進(jìn)的標(biāo)記免疫測定設(shè)備[1-2]。其工作原理：利用生物素化的單克隆抗體以及三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗體與樣本中靶抗原形成抗原抗體夾心復(fù)合物，再添加包被鏈霉親和素的磁珠，與夾心復(fù)合物中的生物素結(jié)合在一起形成牢固的免疫復(fù)合物；儀器吸入測量池中的反應(yīng)液通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面，未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell液去除；給電極加以一定電壓，使復(fù)合體進(jìn)行化學(xué)發(fā)光；根據(jù)光強(qiáng)度與分析物中抗原含量的正比關(guān)系計(jì)算出分析物中的抗原濃度。原裝試劑價(jià)格昂貴，每盒試劑測試數(shù)由二維條形碼決定，固定測試數(shù)為100次，但實(shí)際包裝盒內(nèi)的試劑量常常超出100次測試所用試劑量。當(dāng)每盒試劑完成100次測試后，儀器就顯示該試劑盒剩余測試數(shù)為0，但試劑瓶內(nèi)仍剩余約25%試劑，稱之為“死腔量試劑”。這些試劑如果不能再次利用就會(huì)造成浪費(fèi)。本文以降鈣素原（Procalcitonin，PCT）試劑為例，研究校準(zhǔn)對(duì)死腔量試劑檢測結(jié)果的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

（1）儀器：羅氏Cobas e411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀。

（2）試劑：羅氏降鈣素原（PCT）試劑盒，批號(hào)（00168846）。

（3）PCT質(zhì)控品：羅氏配套質(zhì)控品。水平1：批號(hào)（00168143），e411的靶值為：0.5±0.035；水平2：批號(hào)（00168145），e411的靶值為：9.88±0.593。

（4）PCT校準(zhǔn)液：羅氏配套校準(zhǔn)品，批號(hào)（00168846）。

（5）樣本來源：隨機(jī)收集兩個(gè)工作日內(nèi)門診住院病人中需進(jìn)行PCT項(xiàng)目檢測的標(biāo)本20例，每天各10例（嚴(yán)重黃疸、脂血、溶血標(biāo)本除外）。各自分離出血清，置于可密閉樣本管中，編上編號(hào)，放-20 ℃冰箱保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）復(fù)溶收集的20例PCT標(biāo)本和質(zhì)控液，新開一盒與死腔量試劑同批號(hào)的PCT試劑，用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，將其用于患者標(biāo)本和質(zhì)控液的常規(guī)檢測，記錄PCT檢測結(jié)果，用PCT新表示。

（2）將放置于冰箱保存的同一批號(hào)4盒PCT死腔量試劑（每盒試劑由M、R1、R2三聯(lián)瓶組成）合并成一盒PCT試劑，將其中任何一盒R2瓶身上粘貼的二維條形碼對(duì)應(yīng)的15位數(shù)字在儀器上進(jìn)行手工注冊(cè)，使儀器將混合PCT死腔量試劑識(shí)別為一盒新的與原來單盒死腔量試劑同批號(hào)的“原裝試劑”。然后將混合死腔量試劑盒裝入儀器中，執(zhí)行試劑掃描，儀器將混合死腔量試劑默認(rèn)為當(dāng)前試劑，并對(duì)收集的20例標(biāo)本和質(zhì)控液進(jìn)行PCT檢測，記錄PCT檢測結(jié)果，用PCT混校前表示。

（3）用配套校準(zhǔn)品對(duì)混合死腔量試劑進(jìn)行校準(zhǔn)后，再將其用于20例標(biāo)本和質(zhì)控液的PCT檢測，記錄PCT檢測結(jié)果，用PCT混校后表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)上述PCT測定結(jié)果采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組PCT檢查結(jié)果，見表1。PCT混校前與PCT新結(jié)果有顯著差異（P=0.04）；PCT混校后與PCT新結(jié)果無顯著差異（P=0.67）；PCT混校前與 PCT混校后結(jié)果有顯著差異（P=0.03）。結(jié)果表明，混合死腔量試劑校準(zhǔn)后PCT檢測精度高于校準(zhǔn)前，與新開試劑PCT檢測精度差別不大，可用于常規(guī)PCT項(xiàng)目的檢測。

3 討論

（1）e411電化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)采用封閉試劑，試劑信息（包括檢測項(xiàng)目、檢測量、試劑批號(hào)、效期以及廠家做的12點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線等）由條形碼閱讀器識(shí)別[3-4]。死腔量試劑的利用主要依靠R2瓶（黑瓶）上的條形碼信息，它包含的試劑信息與M瓶（透明瓶）上的條形碼信息（除了試劑盒號(hào)不同外）完全相同[5]。

表1 死腔量試劑校準(zhǔn)前后PCT檢測結(jié)果與新開試劑檢測PCT結(jié)果比較（ng/mL）

（2）e411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀采用一次性吸頭吸取試劑，避免加樣針污染試劑，保證了死腔量試劑與原裝試劑的一致性。但是試劑開啟后通常會(huì)放置在儀器上，試劑中包被的單克隆抗體活性會(huì)因水分蒸發(fā)及溫度變化等原因降低進(jìn)而導(dǎo)致試劑的穩(wěn)定性降低[5]；另外，死腔量試劑的穩(wěn)定性還與實(shí)驗(yàn)室的樣本量有關(guān)，樣本量越大，試劑放在儀器上的時(shí)間就越短，死腔量試劑的穩(wěn)定性可基本保持不變，檢測結(jié)果可靠性就越高。PCT說明書提示，開封試劑在分析儀上可穩(wěn)定4周。若實(shí)驗(yàn)室該項(xiàng)目樣本量很少，開封試劑在儀器上放置時(shí)間就越長，收集的混合死腔量試劑的穩(wěn)定性就越差，若測定前不進(jìn)行校準(zhǔn)，該項(xiàng)目檢測結(jié)果的可靠性就很難得到保證[6]。本研究表明，采用配套校準(zhǔn)品對(duì)PCT混合死腔量試劑校準(zhǔn)后再檢測，能明顯提高PCT檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

（3）工作實(shí)踐中觀察到每瓶試劑剩余量約為25%左右，將死腔量試劑收集起來再利用，可有效降低檢測成本，提高經(jīng)濟(jì)效益[7]。實(shí)際工作中，若遇到某項(xiàng)目的標(biāo)本量極少，在完成原裝試劑的測試過程中，若質(zhì)控偏移，中途就需要進(jìn)行兩點(diǎn)校準(zhǔn)；這種情況下，死腔量試劑使用前校準(zhǔn)就更必不可少了。需要注意的是,對(duì)于經(jīng)過上述處理的死腔量試劑，儀器掃描顯示的測試數(shù)對(duì)應(yīng)的試劑量與試劑盒里的實(shí)際試劑量可能不相符，而儀器吸干了試劑盒里的試劑后才會(huì)報(bào)警。為保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確性，除了要進(jìn)行必要的室內(nèi)質(zhì)控外，還必須隨時(shí)注意試劑瓶中的實(shí)際試劑量[8]。

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