夏志鴻 周潔

貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 貴州貴陽 550001

抗核抗體滴度檢測方案的優(yōu)化和價(jià)值

夏志鴻 周潔

貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 貴州貴陽 550001

目的:探討采用間接免疫熒光法(IIF)檢測抗核抗體滴度的方案優(yōu)化和價(jià)值。方法:間接免疫熒光法(IIF)。結(jié)果:一種優(yōu)化方案是我們將標(biāo)本先做1:100的稀釋度，然后再把陽性標(biāo)本取出加做1:320，1:1000，1:3200，＞1:3200的滴度的方案，ANA滴度結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方案的結(jié)果一致。另一種優(yōu)化方案則是只需做1:100，1:1000，1:3200甚至只需做1:100，1:1000的方案，ANA滴度結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方案的結(jié)果也一致。結(jié)論:我們采用的兩種優(yōu)化方案操作都取得了很好的結(jié)果，不但減少了很多繁瑣的稀釋操作，也減少了觀察熒光的時(shí)間，大大提高了工作效率。另外，ANA試劑和儀器成本高，這兩個(gè)方案也可以節(jié)省試劑，提高經(jīng)濟(jì)效益。

抗核抗體(ANA)滴度是指與相同稀釋度的陰性血清相比，剛剛能檢測到特異性熒光反應(yīng)時(shí)的樣品最高稀釋倍數(shù)。ANA滴度檢測是一個(gè)專業(yè)性很強(qiáng)的工作，必須由有經(jīng)驗(yàn)、經(jīng)過培訓(xùn)的技術(shù)人員或研究人員實(shí)施［1］。間接免疫熒光法(IIF)檢測抗核抗體的滴度是經(jīng)典的篩選方法。歐蒙推薦的標(biāo)準(zhǔn)稀釋方案為1:100、1:320、1:1000、1:3200、1:10000。但是間接免疫熒光法全是手工的方法，操作繁瑣，特別是判讀熒光的結(jié)果非常辛苦。如果采用標(biāo)準(zhǔn)的滴度稀釋方法，由于標(biāo)本量大，每個(gè)標(biāo)本我們都需要做5個(gè)稀釋度，而且需要看5個(gè)熒光結(jié)果，實(shí)驗(yàn)人員的工作量非常大。因此，在保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)上。對標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行優(yōu)化，找到一種省時(shí)省力的方案很有必要。一種優(yōu)化方案我們采用先做1:100的稀釋度，再把陽性標(biāo)本取出加做1:320，1:1000，1:3200，1:10000的稀釋度;另一種優(yōu)化方案則是只需做1:100，1:1000，1:3200的稀釋度甚至只需做1:100，1:1000的稀釋度。

1 資料與方法

1.1 檢測對象104標(biāo)本均來自貴陽中二附院的病人以及體檢人群，其中男性41例，女性63例，平均年齡45歲。

1.2 試劑及檢測方法ANA檢測以鼠肝和Hep－2細(xì)胞為底物，用IIF測定，試劑盒均來自德國歐蒙醫(yī)學(xué)試驗(yàn)檢測股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測方法我們先用標(biāo)準(zhǔn)方案分別進(jìn)行1:100，1:320，1:1000，1: 3200，1:10000稀釋;一種方案我們采用先做1:100的稀釋度，再把陽性標(biāo)本取出加做1:320，1:1000，1:3200，1:10000的稀釋方案;另一種方案則是只需做1:100，1:1000，1:3200甚至只需做1:100，1:1000的方案。步驟操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2.結(jié)果見表1－表4

本研究中104例血清檢查結(jié)果:表1是標(biāo)準(zhǔn)方案的ANA滴度結(jié)果。ANA滴度最終結(jié)果為1:100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，1: 3200有12份，＞1:3200有9份。

表2中是第二種方案的ANA滴度最終結(jié)果為1:100有12份，1:320 有24份，1:1000有15份，1:3200有12份，＞1:3200有9份。跟據(jù)熒光強(qiáng)度可以推斷出1:320有24份，＞1:3200有9份。

表3中是第三種方案的ANA滴度最終結(jié)果為ANA滴度最終結(jié)果1: 100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，1:3200有12份，＞1:3200 有9份。跟據(jù)熒光強(qiáng)度可以推斷出1:320有24份，1:3200有12份，＞1: 3200有9份。

表4中，ANA滴度最終結(jié)果1:100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，但是1:3200與＞1:3200的份數(shù)與表1有明顯差異。

對表中結(jié)果做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:表1的結(jié)果與表2結(jié)果、表3結(jié)果無明顯差異。表1的結(jié)果與表4的結(jié)果有明顯差異。

表1 104例血清標(biāo)本ANA 5個(gè)稀釋度的熒光結(jié)果

表2 104例血清標(biāo)本ANA 3個(gè)稀釋度的熒光結(jié)果

表3 104例血清標(biāo)本ANA 2個(gè)稀釋度的熒光結(jié)果

表4 104例血清標(biāo)本ANA 1個(gè)稀釋度的熒光結(jié)果

3.討論

自身免疫病發(fā)病率高、臨床表現(xiàn)復(fù)雜。幾乎所有的自身免疫病在發(fā)生發(fā)展過程中都會產(chǎn)生自身抗體。自身抗體在自身免疫病的早期診斷、治療及預(yù)后評估中起到了重要作用［2］。自身抗體檢測是系統(tǒng)性自身免疫病診治中必不可少的工具。隨著早期診斷、規(guī)范化治療的廣泛開展，自身抗體檢測發(fā)揮的作用也越來越受到重視。

ANA系細(xì)胞核內(nèi)各種蛋白質(zhì)分子及其復(fù)合物(DNA、RNA、堿性組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種酶等)為靶抗原的自身抗體的總稱。在眾多的自身免疫性疾病中，細(xì)胞核的核仁、核內(nèi)染色質(zhì)、非組蛋白以及由RNA和相關(guān)蛋白構(gòu)成的各種核糖核蛋白粒子都可以成為自身免疫反應(yīng)攻擊的靶子，繼而產(chǎn)生ANA［3］。ANA篩查試驗(yàn)是針對細(xì)胞中的所有抗原成分的總抗體，對自身免疫性疾病有很高的診斷敏感性，所以被認(rèn)為是此類疾病的首選篩查項(xiàng)目［3］。

IIF法檢測ANA滴度是經(jīng)典的篩選方法，歐蒙推薦的標(biāo)準(zhǔn)稀釋方案為1:100、1:320、1:1000、1:3200、1:10000。但是間接免疫熒光法全是手工的方法，操作繁瑣，特別是判讀熒光非常辛苦。如果采用標(biāo)準(zhǔn)的滴度稀釋方法，在臨床工作中，由于標(biāo)本量大，每個(gè)標(biāo)本的ANA滴度檢測我們都需要做5個(gè)稀釋度而且需要看5個(gè)熒光結(jié)果，實(shí)驗(yàn)人員的工作量非常大。因此，在保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)上。我們對標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行了優(yōu)化。

本研究中104例血清檢查結(jié)果:表1是標(biāo)準(zhǔn)方案的ANA滴度結(jié)果。表1結(jié)果與表2、表3結(jié)果無明顯差異。表1結(jié)果與表4結(jié)果有明顯差異。

因此在有一定臨床經(jīng)驗(yàn)的前提下，除了標(biāo)準(zhǔn)方案外，我們采用先做1: 100的稀釋度，再把陽性標(biāo)本取出加做1:320，1:1000，1:3200，＞1:3200的滴度的方案，也可以有很好的效果。另一種方案則是只需做1:100，1: 1000，1:3200或者只需做1:100，1:1000的方案，根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)再判斷結(jié)果也完全可行。

我們采用的兩種優(yōu)化方案都取得了很好的結(jié)果，不但減少了很多繁瑣的稀釋操作，也減少了很多觀察熒光的時(shí)間，大大提高了工作效率。另外，ANA試劑及儀器成本高，這兩個(gè)優(yōu)化方案也可以節(jié)省試劑，提高經(jīng)濟(jì)效益。在臨床實(shí)際工作中，我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體情況，靈活運(yùn)用。

總之，IIF法檢測ANA滴度是一項(xiàng)復(fù)雜和辛苦的工作。我們采用的兩種優(yōu)化方案都能大大減少操作的強(qiáng)度和時(shí)間，也能提高經(jīng)濟(jì)效益。

［1］孫爾維.應(yīng)加強(qiáng)自身抗體檢測的臨床應(yīng)用與研究.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2014，4(18):217－219

［2］李雪，賈園.2013年抗核抗體檢測的最新歐美建議.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2014，5(18):35－358

［3］曹海濤.抗核抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測及臨床意義.華北國防醫(yī)藥，2006，4(18):148－149

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1009－6019(2014)09－0167－02