高 云 周慶秋

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000)

復(fù)方參花搽劑是泰安市中心醫(yī)院在原制劑參花搽劑基礎(chǔ)上改進(jìn)處方及工藝而成的新制劑，主要有苦參、金銀花、黃柏、白鮮皮、蛇床子、白芷、地膚子、龍膽草等八味藥材組成，有清熱燥濕、抗菌止癢之功效，臨床上可用于治療蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、皮膚瘙癢癥、皮癬等多種皮膚病。本文通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)及臨床療效觀察兩個(gè)方面進(jìn)行初步研究，比較兩種制劑的藥效。

1 體外抑菌試驗(yàn)

1.1儀器與試劑 標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853各6株，山東省臨床檢驗(yàn)中心提供。試驗(yàn)菌株變形桿菌6株由泰安市中心醫(yī)院院臨床標(biāo)本分離，鑒定按照NCCLS文件方法進(jìn)行。游標(biāo)卡尺，規(guī)格(0～150 mm)×0.02 mm：安徽桐城量具廠。恒溫培養(yǎng)箱，規(guī)格GI6-2，美國(guó)SHELLAB。LB培養(yǎng)基粉，上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司。LB營(yíng)養(yǎng)瓊脂, 上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司。恒溫氣浴搖床,規(guī)格THZ-82B，金壇市國(guó)旺實(shí)驗(yàn)儀器廠。復(fù)方參花搽劑(自制，批號(hào)20130805)。參花搽劑(泰安市中心醫(yī)院提供，批號(hào)20130709)。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1菌種保存 將取得的金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌分別進(jìn)行菌種的保存。在超凈臺(tái)下，用經(jīng)過(guò)酒精燈反復(fù)灼燒的取菌環(huán)，選取一個(gè)生長(zhǎng)良好的菌落，輕輕刮取菌落表面，再將取菌環(huán)在培養(yǎng)液中輕輕震蕩，使刮取的細(xì)菌充分散落在3 ml LB培養(yǎng)液中，置于37 ℃恒溫?fù)u床，170 r/min培養(yǎng)6小時(shí)。取出后用移液器反復(fù)吹打混勻，取700 μl菌液，加入高壓過(guò)的甘油200 μl，放置于-20℃冰箱中封存。

1.2.2細(xì)菌培養(yǎng) 在超凈臺(tái)下，進(jìn)行接種培養(yǎng)。用無(wú)菌接種環(huán)，挑取菌種冰晶，在3 ml LB培養(yǎng)液中輕輕震蕩，使菌種均勻分布于培養(yǎng)液中，37℃恒溫?fù)u床170 r/min過(guò)夜培養(yǎng)16小時(shí)。隔日早晨進(jìn)行轉(zhuǎn)種，無(wú)菌條件下，取過(guò)夜培養(yǎng)16 h后的細(xì)菌，以1∶100的比例加入新鮮LB培養(yǎng)液中次代培養(yǎng)，置轉(zhuǎn)速為170 r/min，37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)2.5～3 h，使細(xì)菌達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

1.2.3抑菌活性測(cè)定 采用K-B紙片擴(kuò)散法[1-3]，用移液器輕輕吹打混勻菌液，無(wú)菌涂抹棒沾取菌液，均勻涂抹在LB 瓊脂培養(yǎng)基表面，再分別將經(jīng)過(guò)浸泡的含復(fù)方參花搽劑、參花搽劑藥液的濾紙片(直徑0.4 cm)，輕輕放置在培養(yǎng)基表面。將培養(yǎng)皿放置于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)48 h，觀察并測(cè)量抑菌環(huán)直徑(d/mm)。用0.9%的生理鹽水浸泡的濾紙片作為陽(yáng)性對(duì)照，用空白細(xì)菌培養(yǎng)皿作陰性對(duì)照。重復(fù)5次，取平均值(d/mm)。

1.2.5試驗(yàn)結(jié)果 由表1結(jié)果可見(jiàn)，復(fù)方參花搽劑對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑制作用。金黃色葡萄球菌對(duì)復(fù)方參花搽劑有較強(qiáng)的敏感性，抑菌圈大于19 mm, 變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌對(duì)復(fù)方參花搽劑中度敏感。

參花搽劑對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑處于13～19 mm之間，屬于中度敏感，對(duì)變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑處于8～13 mm之間，屬低度敏感。

復(fù)方參花搽劑組F=106.580，P≤0.01，表明復(fù)方參花搽劑對(duì)四種細(xì)菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；參花搽劑組F=5.914，P≤0.01，表明參花搽劑對(duì)四種細(xì)菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種藥液間對(duì)每種細(xì)菌的比較采用t檢驗(yàn)，組間金黃色葡萄球菌t=14.93，P<0.01，說(shuō)明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組間變形桿菌t=5.946，P<0.01，說(shuō)明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對(duì)變形桿菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組間大腸桿菌t=9.334，P<0.01，說(shuō)明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對(duì)大腸桿菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組間銅綠假單胞菌t=4.306，P<0.01，說(shuō)明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對(duì)銅綠假單胞菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 抑菌試驗(yàn)結(jié)果

注：-表示無(wú)抑菌作用

1.3討論

復(fù)方參花搽劑對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑制作用，且對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用較強(qiáng)于對(duì)變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌作用。說(shuō)明復(fù)方參花搽劑對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)有抑菌活性，對(duì)革蘭氏陰性菌(G-)亦有抑菌活性，且對(duì)G+菌的活性強(qiáng)于對(duì)G-菌的活性。臨床實(shí)踐表明，苦參具有清熱燥濕、祛風(fēng)、殺蟲(chóng)、止癢，用于濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢等癥。金銀花清熱解毒[4]，所含綠原酸及黃酮類(lèi)化合物同樣具有天然抗菌活性，對(duì)金黃色葡萄球菌及變形桿菌也有較強(qiáng)的抑制作用[5]，為瘡瘍要藥；黃柏、蛇床子、地膚子、龍膽草、白芷等可以加強(qiáng)主藥清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲(chóng)之功，共為輔藥；全方為伍可用于蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、濕疹、手足癬的治療。

參花搽劑中主藥同為苦參，制劑同樣具有以上功效，但抑菌效果比復(fù)方參花搽劑弱。中藥制劑的抑菌作用原理比較復(fù)雜，但究其原因應(yīng)與有效成分的濃度有著正相關(guān)性。2種藥液對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)出差異性較大，主要與處方改進(jìn)及制劑工藝優(yōu)選有關(guān)，傳統(tǒng)意義上的經(jīng)驗(yàn)煎煮法不考慮吸水率及加水倍量、提取次數(shù)、提取時(shí)間的科學(xué)設(shè)計(jì)等因素導(dǎo)致苦參堿、綠原酸等成分提取率較低，而復(fù)方參花搽劑系經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行提取，有效成分提取率高，隨著有效成分濃度的增大細(xì)菌敏感度提高，抑菌效果明顯增強(qiáng)，為下一步的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。

2 臨床療效觀察

濕疹與皮炎是臨床上皮膚科非常常見(jiàn)的疾病，發(fā)病初期病人皮膚紅腫，出現(xiàn)皮疹、丘疹，病程持續(xù)進(jìn)展的病人皮膚表面通常會(huì)出現(xiàn)糜爛、水皰、血痂等癥狀，同時(shí)伴劇烈腫痛，極劇瘙癢，病人難以克制反復(fù)抓撓，進(jìn)而加速病情進(jìn)展，影響了患者的正常生活質(zhì)量，甚至影響到患者的心理。

2.1資料與方法

2.1.1一般資料 選擇2013年8月中旬至2013年11月之間的在泰安市中心醫(yī)院皮膚科就診的患濕疹的58例病患志愿者，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《臨床皮膚病學(xué)》[6]判定。病程3天～3個(gè)月。病例資料年齡2歲～63歲，男30例，女28例，每組29例。治療組，男14例，女15例，平均年齡38.5歲；對(duì)照組，男15例，女14例，平均年齡40.3歲。兩組間性別、癥狀、年齡、病情均無(wú)明顯差異，具有可比性。

2.1.2方法

2.1.2.1治療方法 用藥前將患處用生理鹽水清洗干凈，晾干后搽用藥液。治療組使用復(fù)方參花搽劑，批號(hào)20130805，對(duì)照組使用參花搽劑，批號(hào)20130709。用藥方法為用棉簽蘸取藥液輕搽濕疹部位，每日2次，早晚各用藥1次。連續(xù)使用5天為1個(gè)療程，根據(jù)病人恢復(fù)情況使用1～3個(gè)療程，2個(gè)療程間隔1～2天。注意事項(xiàng)為禁忌辛辣刺激飲食，禁忌用熱水清潔患處。

2.1.2.1療效標(biāo)準(zhǔn) 痊愈：全部皮疹消失, 病人無(wú)瘙癢感。顯效：80%的皮疹消退, 病人瘙癢癥狀明顯減輕。有效：50%的皮疹消退, 病人瘙癢感覺(jué)稍減輕。無(wú)效：用藥后濕疹未發(fā)生變化或病情進(jìn)一步進(jìn)展。復(fù)發(fā)：痊愈病人4周內(nèi)又出現(xiàn)皮疹、瘙癢感現(xiàn)象。有效率以痊愈+顯效+有效計(jì)。

2.2結(jié)果

2.1.1治療結(jié)果 治療組與對(duì)照組各觀察了3個(gè)療程，療程期間兩組均無(wú)明顯不良反應(yīng)。治療組總有效率為96.4%，對(duì)照組總有效率為86.2%，治療組的總有效率比對(duì)照組的總有效率高10.2%。見(jiàn)表2。

表2 兩組療效比較

2.1.2隨訪(fǎng)結(jié)果 以上兩組病例治療結(jié)束后，對(duì)痊愈者41人進(jìn)行了4周以?xún)?nèi)的隨訪(fǎng)。治療組痊愈志愿者22人中，1～4周內(nèi)復(fù)發(fā)病人5人，復(fù)發(fā)率22.7%。對(duì)照組痊愈病人19人中，1～4周內(nèi)復(fù)發(fā)病人8人，復(fù)發(fā)率42.1%。治療組的復(fù)發(fā)率比對(duì)照組的復(fù)發(fā)率低20%。

2.3討論

臨床對(duì)照觀察結(jié)果表明，復(fù)方參花搽劑作為純中藥制劑對(duì)濕疹總有效率近100%，療效確切，且無(wú)明顯不良反應(yīng)；改進(jìn)后的復(fù)方參花搽劑與原制劑參花搽劑相比，具有有效率高尤其是治愈率高、復(fù)發(fā)率低的優(yōu)點(diǎn)，這與苦參堿等藥理成分的綜合提取率增加有直接關(guān)系。臨床觀察結(jié)果與體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果一致，驗(yàn)證了經(jīng)處方及工藝優(yōu)化之后的復(fù)方參花搽劑提取工藝合理、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定、治療作用確切，病人使用簡(jiǎn)單便捷，無(wú)局部刺激，可以在臨床推廣應(yīng)用。

濕疹屬于變態(tài)反應(yīng)性疾病，隨著環(huán)境的改變及工作生活壓力的增加，臨床上此類(lèi)疾病呈現(xiàn)出日趨增長(zhǎng)的趨勢(shì)，且無(wú)年齡、性別選擇性，復(fù)發(fā)率極高。濕疹皮炎發(fā)病原因非常復(fù)雜，簡(jiǎn)單來(lái)分有內(nèi)在因素和外在因素，兩因素間互相聯(lián)系，作用協(xié)同。外因如化學(xué)制劑、動(dòng)物毒素、魚(yú)蝦、花粉、化妝品、日曬、塵埃等，內(nèi)因包括遺傳因素、免疫因素、代謝因素、精神因素等，心理因素對(duì)此類(lèi)皮膚病的影響越來(lái)越受到重視。建議此類(lèi)病人除藥物治療外，要保持飲食生活規(guī)律，調(diào)整良好的精神心理狀態(tài)及適應(yīng)能力。中藥制劑可以減少病人因藥物過(guò)敏引起的不良反應(yīng)，在治療過(guò)程中優(yōu)勢(shì)明顯。

本研究從體外抑菌試驗(yàn)到臨床試用觀察，從基礎(chǔ)研究與臨床研究?jī)蓚€(gè)方面入手，兩方面結(jié)果一致，證實(shí)了經(jīng)處方及工藝改進(jìn)后的新制劑復(fù)方參花搽劑對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑菌效果，對(duì)濕疹皮炎的治療有效率高、復(fù)發(fā)率低，使用效果優(yōu)良。因時(shí)間等原因，臨床采集病例樣本較少，下一步將繼續(xù)觀察復(fù)方參花搽劑的長(zhǎng)期臨床效果。

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