田 莉，施 洋， 暢 靜， 王東東， 田樹(shù)革

(1新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院， 2新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 烏魯木齊 830011)

香鱗毛蕨[Dryopterisfragrans(L.) Schott]為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物，系多年生草本植物，生長(zhǎng)于海拔700～2 500 m的山地林緣和山坡石縫中，分布于我國(guó)東北、河北、內(nèi)蒙古等地，新疆境內(nèi)主要產(chǎn)于北疆的青河、富蘊(yùn)、阿勒泰、布爾津、哈巴河等縣，國(guó)外西伯利亞、遠(yuǎn)東、蒙古、朝鮮、日本以及北美各地亦有分布[1-2]。

香鱗毛蕨具有驅(qū)蟲(chóng)、殺菌、抗炎和抗腫瘤等藥理活性，民間流傳用其水煎液涂擦患處可治療牛皮癬、皮疹、皮炎、痤瘡等各種皮膚病且無(wú)毒副作用，水提液洗頭可去頭屑、止癢，被黑龍江省北部居民視為“皮膚病的克星”，尤其治療牛皮癬療效顯著[3]。香鱗毛蕨具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用，張彥龍[4]研究發(fā)現(xiàn)其乙醇提取物治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的療效優(yōu)于雷公藤多苷片；張瑩瑩[5]分離獲得了具有抗腫瘤活性和免疫調(diào)節(jié)活性的提取物。目前對(duì)東北產(chǎn)香鱗毛蕨的研究主要為臨床療效和化學(xué)成分，尤其對(duì)牛皮癬和關(guān)節(jié)炎療效的研究較多。該植物資源在新疆分布廣泛，但未作為藥用植物使用，也未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。本研究在參考相關(guān)文獻(xiàn)[6]的基礎(chǔ)上對(duì)新疆產(chǎn)香鱗毛蕨的質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，并評(píng)價(jià)其質(zhì)量，為該植物資源的進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1材料3批香鱗毛蕨樣品分別采自新疆布爾津、哈巴河、青河縣，均系野生，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院李永和主任中藥師鑒定為香鱗毛蕨[Dryopterisfragrans(L.) Schott.]。將藥材陰干，去除根莖及葉柄殘基以外的其他部分，粉碎，備用；綿馬貫眾素ABBA對(duì)照品(成都瑞芬思生物科技有限公司，純度98%，批號(hào)：M-040-111008)，堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽(上海阿拉丁試劑有限公司，批號(hào)：F106955)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

1.2儀器Mikroskope Primo Star X2005型數(shù)碼顯微鏡(德國(guó)麥克奧迪實(shí)業(yè)有限公司)，XS105型電子天平(德國(guó)梅特勒-托利多儀器有限公司)，AK-1000A搖擺式中藥粉碎機(jī)(溫嶺市奧為中藥機(jī)械有限公司)，KQ3200DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，CS101型鼓風(fēng)干燥箱(中華人民共和國(guó)重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)，GBCCinira-40型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(澳大利亞GBC科學(xué)儀器公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1原植物形態(tài)[1-2]植株高15～30 cm，根狀莖粗短，直立或斜升，密被三角狀披針形棕褐色鱗片。葉簇生，革質(zhì)，兩面被金黃色腺體；葉柄長(zhǎng)5～10 cm，禾稈色，連同葉軸和羽軸密被卵形或披針形、邊緣具細(xì)齒、先端尾狀尖、密被金黃色腺體的鱗片；葉片倒披針形，長(zhǎng)10～20 cm，寬2.5～3.5 cm，二回羽狀全裂；羽片20～25對(duì)，互生，相距4～8 mm，披針形，中部者最大，長(zhǎng)12～15 mm，寬約5 mm，先端鈍，基部楔形，一回羽狀；小羽片5～7對(duì)，長(zhǎng)約3 mm，寬約1.5 mm，長(zhǎng)圓形，先端鈍圓，基部下延成狹翅，邊緣具鈍圓鋸齒，向下各對(duì)羽片逐漸縮小，基部1～2對(duì)呈耳狀；葉脈羽狀分枝。孢子囊群圓形，生側(cè)脈中下部；囊群蓋圓腎形，灰白色，膜質(zhì)，邊緣缺刻狀。孢子橢圓形，周壁具瘤狀突起，見(jiàn)圖1。植物略具香味，故有香鱗毛蕨之稱。

2.2藥材性狀根據(jù)實(shí)際藥材樣品觀察：藥用根莖，呈圓柱形略彎曲，長(zhǎng)10～25 cm，粗1～3 cm，所被葉柄基部呈扁圓形，稍彎曲，長(zhǎng)2～5 cm，粗0.5～0.8 cm，表面呈棕褐色或灰棕色，有縱脊紋和粗槽紋，內(nèi)呈棕色。根莖周圍密生葉柄和叢生紅棕色鱗片(圖1)。氣特異，味甘而苦辛，有不愉快感。

2.3顯微特征

2.3.1 葉柄基部橫切面 表皮細(xì)胞1列，外壁稍厚；厚壁細(xì)胞數(shù)列，多角形，棕色；基本組織中有分體中柱3～7個(gè)，每一分體中柱具周韌維管束，外圍以內(nèi)皮層，見(jiàn)圖2。

圖1香鱗毛蕨[Dryopterisfragrans(L.)Schott]

圖2香鱗毛蕨葉柄基部橫切面

2.3.2粉末特征 內(nèi)皮層碎片甚多，黃棕色；孢子囊環(huán)帶，由14～20個(gè)增厚細(xì)胞組成；氣孔環(huán)式；梯紋管胞，見(jiàn)單個(gè)纖維或纖維束；非腺毛由單細(xì)胞組成，彎曲或筆直；鱗片細(xì)胞排列緊密；兩面型孢子，孢子表面觀與赤道面觀不易看清楚。薄壁細(xì)胞呈多角形或類圓形，含淀粉粒；周壁具有褶皺，褶皺形成瘤狀突起，有時(shí)孢子沿褶皺處裂開(kāi)，外壁厚度約為2.5μm，外層厚于內(nèi)層。管胞孔紋、梯紋，偶有網(wǎng)紋，有的薄壁細(xì)胞和木栓細(xì)胞具孔紋。偶見(jiàn)草酸鈣簇晶，見(jiàn)圖3。

2.4水分、灰分、浸出物測(cè)定分別采用《中國(guó)藥典》(2010年版)一部附錄Ⅸ H烘干法測(cè)定水分；附錄Ⅸ K方法測(cè)定灰分和酸不溶性灰分；附錄Ⅹ A方法測(cè)定水浸出物；附錄Ⅸ A方法測(cè)定醇浸出物，分別采用了熱浸法和冷浸法；附錄ⅨE 方法測(cè)定重金屬。結(jié)果顯示3批香鱗毛蕨水分為9.46%～10.22%，灰分為8.46%～9.52%，酸不溶性灰分為2.89%～3.56%，水溶性浸出物為15.77%～20.34%，采用熱浸法的醇溶性浸出物遠(yuǎn)高于冷浸法，浸出物含量為24.53%～32.33%，重金屬與砷鹽檢查結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》規(guī)定的限量檢查要求，見(jiàn)表1。

2.5薄層鑒別[7]取本品粉末0.5 g，加環(huán)己烷20 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液10 mL，濃縮至5 mL，作為供試品溶液。另取香鱗毛蕨對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上[取硅膠G 10 g、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH 7.0)10 mL、維生素C 60 mg、羧甲基纖維素鈉溶液20 mL，調(diào)勻，鋪板，室溫避光晾干，50℃活化2 h后備用]，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(30∶15∶1)為展開(kāi)劑，薄層板置展開(kāi)缸中預(yù)飽和2 h，展開(kāi)，展距15 cm以上取出，立即噴以0.1%堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽的稀乙醇溶液，在40℃放置1 h。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖4。

圖3 香鱗毛蕨粉末

1～3: 供試品; S: 對(duì)照藥材

2.6總間苯三酚含量測(cè)定

2.6.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綿馬貫眾素ABBA對(duì)照品適量，用95%乙醇制成濃度為0.08 g/L的溶液，備用。

2.6.2 供試品溶液的制備 精密稱定香鱗毛蕨藥材粉末(60目)約1 g，加入95%乙醇100 mL，稱重，回流提取1 h，冷卻至室溫，稱重，補(bǔ)足減失重量，混勻，過(guò)濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2 mL置于10 mL量瓶中，用95%乙醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

2.6.3 測(cè)定方法[8]精密量取對(duì)照品溶液或供試品溶液2 mL，置于10 mL磨口具塞刻度試管中，精密加入0.5%堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽溶液5 mL，混勻，室溫放置20 min，采用比色法在476 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算總間苯三酚含量，結(jié)果總間苯三酚含量為5.16%～8.10%，RSD=7.14%，見(jiàn)表1。

表1 香鱗毛蕨藥材水分、灰分、浸出物、含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

新疆產(chǎn)香鱗毛蕨主要分布于新疆北部天山和阿爾泰山，資源豐富。現(xiàn)有研究主要集中于東北產(chǎn)香鱗毛蕨的化學(xué)成分、藥理作用和臨床應(yīng)用，而對(duì)質(zhì)量控制的研究很少。香鱗毛蕨的同屬植物綿馬貫眾(DryopteriscrassirhizomaNakai.，即粗莖鱗毛蕨)是《中國(guó)藥典》收載品種，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括性狀、TLC鑒別、檢查(水分、灰分、酸不溶性灰分、醇浸出物)，參照其項(xiàng)下內(nèi)容建立香鱗毛蕨的質(zhì)量控制方法。

香鱗毛蕨主要含間苯三酚類、萜類和黃酮類等成分[9]，而間苯三酚類是其特征性化學(xué)成分，也是主要的藥理活性成分。香鱗毛蕨根莖含多種間苯三酚化合物，已分離得到的單體成分有Aspidin AB(綿馬素AB)、Aspidin BB(綿馬素BB)、Aspidinol(綿馬酚)、AspidinPB(綿馬素PB)，Dryofragin(香鱗毛蕨素)[10]。因此，測(cè)定香鱗毛蕨中總間苯三酚的含量對(duì)控制其質(zhì)量具有代表性和合理性。本研究增加了香鱗毛蕨中總間苯三酚的含量測(cè)定。

根據(jù)不同地區(qū)3批藥材質(zhì)量研究結(jié)果，并考慮藥材來(lái)源差異的實(shí)際情況，可以初步確定水分不超過(guò)12.0%，總灰分不超過(guò)10.0%，酸不溶性灰分不超過(guò)5.0%，醇溶性浸出物不少于20.0%，總間苯三酚含量限度為不低于6.0%。新疆不同產(chǎn)地的香鱗毛蕨中總間苯三酚含量有較大差異，此種差異可能與藥材的生長(zhǎng)環(huán)境、生長(zhǎng)年限有關(guān)，有待進(jìn)一步的研究。香鱗毛蕨尚無(wú)人工栽培品，本實(shí)驗(yàn)所用均為野生采集，有害重金屬砷(As)和鉛(Pb)含量均不超標(biāo)，鉛(Pb)≤5 μg/g，砷(As)<1 μg/g，說(shuō)明沒(méi)有其他無(wú)機(jī)物污染和摻雜。

本研究對(duì)薄層鑒別方法中各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行了確定，考察了不同的薄層板，如國(guó)產(chǎn)的預(yù)制板、進(jìn)口預(yù)制板，效果均不理想，因此采用自制板；確定了展開(kāi)溶劑種類和比例，間苯三酚類化合物與堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽呈特征性顏色反應(yīng)，故確定0.1%堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽為顯色劑。

本研究較全面地考查了新疆產(chǎn)香鱗毛蕨藥材的各項(xiàng)指標(biāo)，在實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析的基礎(chǔ)上制定了相關(guān)限度。所建立的方法簡(jiǎn)便、快速、可靠，適用于該藥材的質(zhì)量控制，而與其他產(chǎn)地香鱗毛蕨的質(zhì)量對(duì)比還有待進(jìn)一步研究。

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