李鳳美，周永斌，羅瑩，劉連強(qiáng)，陳曉明

（天津市林業(yè)果樹研究所，天津300384）

食用菌包埋菌種低溫保藏期間的試驗研究

李鳳美，周永斌，羅瑩，劉連強(qiáng)，陳曉明

（天津市林業(yè)果樹研究所，天津300384）

對十種食用菌包埋菌種進(jìn)行保藏環(huán)境和保藏時間的試驗研究，結(jié)果表明：包埋菌種在4℃環(huán)境下保藏時間在1年以內(nèi)，在-25℃低溫下保藏時間在3年以上。本試驗對擴(kuò)大食用菌液體菌種的應(yīng)用范圍和應(yīng)用時間具有重要意義。

食用菌；包埋；保藏

食用菌包埋菌種是指將食用菌液體菌種采用包埋法固定在凝膠網(wǎng)格結(jié)構(gòu)中或半透性聚合薄膜內(nèi)[1]，形成便于保藏和運(yùn)輸?shù)念w粒食用菌種子，該方法能夠克服液體菌種不耐貯藏，不易包裝、運(yùn)輸?shù)热秉c(diǎn)，從而延長液體菌種的存貯時間和應(yīng)用范圍。

本實驗采用海藻酸鈉對不同食用菌液體菌種進(jìn)行包埋，采用不同的保藏溫度進(jìn)行存放，定期取出進(jìn)行活性試驗，對液體菌種包埋顆粒的存儲環(huán)境和存儲時間進(jìn)行試驗探討，實驗對于擴(kuò)大液體菌種的應(yīng)用范圍具有深遠(yuǎn)影響[2]。

1 材料

1.1 供試菌株

猴頭菇（Hericium erinaceus Pers.）、平菇（Pleurotus ostreatus.）、香菇（Lentinus edodes）、木耳（Fructificatio Auriculariae Auriculae）、靈芝（Ganoderma lucidum）、雙孢菇（Agaricusbrunnescens）、杏鮑菇（Pleurotuseryngii）、白靈菇（Pleurotusnebrodensis）、金針菇（Flammulina velutiper Sing）、茶樹菇（Agrocybe chaxingu）均由天津市林業(yè)果樹研究所食用菌研究中心保藏。

1.2 培養(yǎng)基

母種液體培養(yǎng)基：馬鈴薯去皮200 g（加水煮沸20min，過濾取汁）、葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀1 g、硫酸鎂0.5 g、10mg、水1 000mL，pH 4～6。

1.3 試劑

海藻酸鈉、無水氯化鈣、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、葡萄糖：均為分析純，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠。

2 方法

2.1 包埋菌種的制備方法

配制濃度2%的氯化鈣溶液，滅菌后待用。制備含6%的海藻酸鈉的綜合馬鈴薯培養(yǎng)基溶液，105℃滅菌15min后冷卻到40℃，加入適量菌絲體細(xì)胞懸浮液，用移液槍吸取上述混合液慢慢滴入氯化鈣溶液中，不斷攪拌，使之形成球形顆粒。靜置3 h～4 h完全硬化后棄去氯化鈣溶液，用無菌水洗凈制得海藻酸鈉包埋小珠。

2.2 菌種保藏方法

將包埋后的菌種球分裝于離心管中密封，分別置于4℃和-25℃的冰箱中保藏，分別存放3、6、12、24、36個月后取出進(jìn)行活化培養(yǎng)。

2.3 菌種的復(fù)蘇與培養(yǎng)

將低溫存儲的菌株取出后立即置于37℃水浴中，快速解凍，融化的菌絲直接移接到斜面上，25℃培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況。

2.3.1 菌種成活率的測定

將保存不同時間的菌種接到馬鈴薯培養(yǎng)基中，每株菌株設(shè)置20個重復(fù)，25℃培養(yǎng)7 d～10 d，觀察成活情況，計算成活率。

2.3.2 菌絲萌發(fā)時間的測定

將保存不同時間的菌種接到馬鈴薯培養(yǎng)基中，每株菌株設(shè)置20個重復(fù)，25℃培養(yǎng)，觀察記錄菌絲萌發(fā)時間，計算菌絲平均萌發(fā)時間。

2.3.3 菌絲長速長勢的測定

將保存不同時間的菌種接到馬鈴薯培養(yǎng)基中，每株菌株設(shè)置20個重復(fù)，25℃培養(yǎng)，以菌絲體在斜面上的直線生長距離及長勢的強(qiáng)弱作為生長量指標(biāo)，記錄菌絲生長速度、菌絲長勢[3]。

3 結(jié)果與分析

3.1 包埋菌種不同保藏方式的試驗

將不同供試食用菌液體菌絲體細(xì)胞包埋后形成的包埋菌種球，如圖1。

圖1 食用菌包埋菌種Fig.1 Entrapped spawnsof edible fungi

這種菌種相比液體菌種保存時間更長，采用真空包裝袋進(jìn)行包裝后，運(yùn)輸更方便。后續(xù)試驗主要對該包埋菌種進(jìn)行保藏環(huán)境及時間的試驗研究。

各食用菌包埋菌種保藏不同時間后活化生長情況如表1。

從表1可以看出，將包埋后的菌種球置于4℃條件保藏，保藏期到12個月時，各菌株成活率都在96%以上，保藏期到24個月時，菌種球成活率顯著降低至55%以下。分析原因可能是，包埋菌種球表面包裹的基質(zhì)海藻酸鈉長時間存放后會發(fā)生失水干縮，造成基質(zhì)內(nèi)的菌絲體逐漸脫水死亡，因此采用4℃環(huán)境保藏包埋菌種，適用于菌種的短期存放，不適合中長期保藏。

表1 各食用菌包埋菌種保藏不同時間后活化生長情況Table1 Thegrow th condition of edible fungi’sentrapped spawns which preserved different time

續(xù)表1各食用菌包埋菌種保藏不同時間后活化生長情況Continue table1 Thegrow th condition ofedible fungi’s entrapped spawnswhich preserved different time

將包埋后的菌種球置于-25℃的低溫冰箱，各菌株的保藏時間都能達(dá)到36個月，且菌株復(fù)水活化后成活率都在95%以上，適合包埋菌種的中長期保藏和存放。

4 討論

從試驗可以看出，將不同食用菌包埋菌種置于-25℃的低溫環(huán)境下，冰晶在形成時，由于菌絲體細(xì)胞交聯(lián)在海藻酸鈉的凝膠網(wǎng)格結(jié)構(gòu)中，受到基質(zhì)材料的保護(hù)，從而減少了低溫凍結(jié)對細(xì)胞的傷害，海藻酸鈉起到了冰凍保護(hù)劑的作用，保證菌種處于長時間的低溫、干燥、缺氧的休眠狀態(tài)，適合包埋菌種的中長期保藏。

[1]鄧百萬.海藻酸鈉包埋保藏對食藥用菌種活性的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(3):418-419

[2]戴建清.食用菌液體菌種研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].中國食用菌, 2012,31(5):1-3

[3]韓芹芹.液氮保藏平菇菌種的處理方法初探[J].食用菌學(xué)報,2010 (增刊):57-60

Experim ent Research on Entrapped Spawns of Edible Fungi during Low Tem perature Preserved Period

LIFeng-mei，ZHOUYong-bin，LUOYing，LIU Lian-qiang，CHENXiao-ming
（Research Institute of Forestry and Fruit Tree in Tianjin，Tianjin 300384，China）

In this paper，the storage periods and storage conditions of ten kinds of entrapped spawns of edible fungiwere tested and studied.The resultsshowed that：the storage periodsofentrapped spawns in 4 temperaturewas1 year.In-25℃，the entrapped spawns can storage over3 years.Thisstudywas important to liquid spawns，applications field and time.

edible fungi；entrapment；preservation

2013-09-29

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.034

天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院科研項目（11005）

李鳳美（1981—），女（漢），助理研究員，碩士，主要從事食用菌栽培與加工的研究和開發(fā)。